畜牧兽医学报  2023, Vol. 54 Issue (5): 2050-2061. DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2023.05.026    PDF    
一株鸭腺病毒3型的分离、鉴定及致病性分析
曹秀芸1, 刘吉文1, 汤智辉1, 郑紫怡1, 闫丽萍1,2, 宋素泉1     
1. 南京农业大学动物医学院 动物健康与食品安全实验室,南京 210000;
2. 南京农业大学免疫研究所,南京 210000
摘要:从现地分离一株3型鸭腺病毒(duck adenovirus 3,DAdV-3)并命名为DAdV-3 YN株,分析该毒株的基因特征与致病特性,本研究选用LMH细胞进行病毒分离与纯化,并对YN株的hexon、penton base、fiber1和fiber2基因进行测序分析。通过腿部肌肉注射病毒感染7日龄番鸭,观察番鸭精神状态,记录体重变化、脏器剖检特征、组织病理学变化、计算脏器载毒量、泄殖腔拭子排毒量以及血清生化等数据,同时测定法氏囊与脾内凋亡相关基因转录水平以探究YN株对宿主免疫功能的影响。结果显示,番鸭感染YN株后体重增长受到显著抑制(P<0.01;P<0.000 1);体内各脏器均出现不同程度病变,攻毒组鸭的肝组织与肾组织脏器系数均大于对照组且在攻毒后第7天差异极显著(P<0.01);攻毒组番鸭血清内丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和尿素氮含量均显著高于对照组(P<0.001,P<0.000 1);同时,法氏囊与脾内细胞凋亡相关基因mRNA水平显著上升(P<0.01;P<0.001)。以上结果提示,YN株感染7日龄番鸭后,可以导致肝和肾等脏器损伤,同时可以诱导法氏囊与脾内细胞凋亡从而影响番鸭免疫功能。
关键词鸭腺病毒3型    基因特征    致病力    免疫功能    
Isolation, Identification and Pathogenicity Analysis of a Duck Adenovirus Type 3
CAO Xiuyun1, LIU Jiwen1, TANG Zhihui1, ZHENG Ziyi1, YAN Liping1,2, SONG Suquan1     
1. Animal Health and Food Safety Laboratory, College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210000, China;
2. Nanjing Agricultural University Institute of Immunology, Nanjing 210000, China
Abstract: The purpose of this study was to isolate a novel Duck adenovirus 3 (DAdV-3) YN strain and elucidate its genetic characteristics and pathogenicity. LMH cells were selected for virus isolation and purification, and then the virus genes, including hexon, penton base, fiber1, and fiber2 were sequenced and analyzed. Seven-days-old Muscovy ducks were infected by intramuscular injection in the legs, and the mental state of the ducks was observed. Besides, the body weight changes, necropsy characteristics of organs, histopathological changes, viral load of organs, cloaca swab detoxification, and serum biochemistry were recorded and analyzed. Furthermore, the transcription levels of apoptosis-related genes in the bursa and the spleen were measured to explore the effect of YN strain on immune function. The results showed that the weight gain of infected ducks was significantly inhibited (P < 0.01, P < 0.000 1), and different degrees of lesions appeared in various organs. The coefficients of livers and kidneys of the experimental group were larger than those of the control group, and the difference was extremely significant on the 7th day after the challenge. Alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, and urea nitrogen in the serum of the Muscovy ducks in the challenge group were significantly higher than those in the control group (P < 0.001, P < 0.0001). At the same time, the mRNA levels of apoptosis-related genes in the bursa and the spleen increased significantly (P < 0.01, P < 0.001). (Conclusion) The above results suggest that DAdV-3 YN strain can damage livers and kidneys when challenging the 7-days-old Muscovy ducks, simultaneously, it can affect the immune function of Muscovy ducks by causing apoptosis of cells in the bursa and the spleen.
Key words: duck adenovirus 3    genetic characteristics    pathogenicity    immune function    

鸭腺病毒(duck adenovirus,DAdV)被发现最早可以追溯到1977年法国番鸭场中爆发的一场大规模疾病之中,在疫病中被感染的番鸭体重下降,站立不稳,直到1982年,Bouquet等[1]通过中和试验,确认该病毒不同于之前所知的禽腺病毒属成员,是一种新型腺病毒。2011年,Harrach等[2]提议将这种病毒命名为2型鸭腺病毒(duck adenovirus 2,DAdV-2),但是因为缺乏全株基因序列,该提议并没有被国际病毒委员会(The International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)所采纳。2014年,奥地利科学家Marek等[3]成功获得DAdV-2全基因组序列。同年在我国广东,部分番鸭养殖场也出现了类似DAdV-2感染的症状,对所分离毒株进行全基因组测序发现,分离株不同于先前的DAdV-2 GR株,被认为是3型鸭腺病毒(duck adenovirus 3,DAdV-3)的候选毒株[4-5]。根据ICTV最新分类,DAdV-2和DAdV-3均属于禽腺病毒属成员。目前,国内多地流行的鸭腺病毒仍以DAdV-3为主[6],被感染番鸭主要表现为肝、肾肿胀出血和轻微心包积液。发病率在40%~55%之间,死亡率可达35%~43%,给各地养殖场带来极大的经济损失[6]

2021年7月,云南某番鸭养殖场内7日龄雏鸭纷纷发病,呈现典型DAdV-3的感染症状,本实验室在此批病料中分离获得1株DAdV-3,命名为DAdV-3 YN株。本研究拟通过分析毒株的4段主要结构蛋白基因,并感染7日龄番鸭观察分析其临床症状、脏器变化、脏器载毒量以及法氏囊内细胞凋亡相关基因转录水平,对DAdV-3的遗传特性和致病特征做出全面系统描述,以期为临床对DAdV-3的科学防控提供理论支持。

1 材料与方法 1.1 试剂材料

TreliefTM Animal Genomic DNA Kit购自擎科生物有限公司,2×Hieff® PCR Master Mix、Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit、Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix购自翌胜生物,RNA isolater Total RNA Extraction Reagent购自诺唯赞生物公司;DL600 DNA Marker、DL2000 DNA Marker、pMDTM18-T Vector Cloning Kit购自TakaRa宝日医生物公司。

1.2 样品处理与病原检测

2021年7月,云南某番鸭养殖场内7日龄番鸭广泛发病,主要临床病变为肝肾肿胀出血。无菌采集番鸭肝组织冷藏运送至实验室进行检测。取适量肝组织置于EP管内,充分研磨后取组织悬液上清,按照说明书提取组织DNA和RNA。使用常见鸭源病毒引物进行检测,PCR阳性产物连接T载体后送往擎科生物有限公司进行测序验证,每样质粒送3份样品。

1.3 病毒扩增与纯化

选取雄性莱昂鸡肝癌(Leghorn male hepatoma,LMH)细胞按照文献中内容进行病毒扩增,当80%以上细胞出现病变后收取培养上清[7]。采取有限稀释法进行病毒纯化,3轮有限稀释法后用PCR方法检测无外源病毒,随后使用蚀斑试验进一步纯化病毒株。

1.4 病毒TCID50测定

LMH细胞接种于96孔板,根据文献中方法接毒[8-9],采用Reed-Muench两氏法计算TCID50为107.8·mL-1。收集细胞培养上清用于后续试验。

1.5 YN株主要结构蛋白基因序列分析

参照NCBI上已有DAdV-3 GDMM10株(MH777398)的hexon、penton base、fiber1和fiber2基因序列,设计5对引物进行序列扩增,引物由擎科生物有限公司合成,相关信息见下表。按照各自退火温度进行PCR扩增,在1%琼脂糖凝胶上电泳,切下明亮条带连接T载体后送往擎科生物有限公司进行测序。所得测序结果使用DNAMAN软件进行序列拼接并使用MEGA 7进行序列比对分析。

表 1 测序引物信息表 Table 1 The information of sequencing primers
1.6 DAdV-3 YN株动物致病性试验

1.6.1 试验动物分组与攻毒设计   1日龄番鸭(购自南京特给力种植有限公司)适应性饲养至7日龄,随机分为攻毒组与对照组。对照组包含12只番鸭,攻毒组分为观察组与剖检组,每组各10只。攻毒组番鸭腿部肌肉注射0.3 mL病毒液(3×106.8·mL-1 TCID50),对照组相同部位注射0.3 mL PBS。攻毒组与对照组番鸭在不同房间饲养,并由不同人员管理,其余条件相同,连续观察14 d,记录观察组番鸭临床变化,攻毒后每间隔2 d称量番鸭体重并采集泄殖腔拭子。剖检组与对照组番鸭在攻毒后第3与第7天随机剖检3只。攻毒后14 d安乐死剩余攻毒组与对照组番鸭并进行剖检。

1.6.2 剖检观察与切片制作   番鸭静脉采血后处死。对番鸭进行解剖,观察有无脏器病变。称取心、肝、肾重量并计算脏器系数,脏器系数的计算公式为:脏器重量(g)/体重(g)*100%。采集脏器保存于-80 ℃冰箱准备后续检测病毒,固定攻毒后第7天番鸭相应脏器,送往武汉皮诺飞生物公司制作切片。

1.6.3 血清生化检测   攻毒后第3、7和14天分别采集攻毒组与对照组血清,使用南京建成生物工程研究所检测试剂盒检测番鸭血清内丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和尿素氮(urea nitrogen,BUN)三种酶含量,每个样本重复检测3次。参照说明书计算分析酶活性。

1.6.4 番鸭排毒量与脏器病毒载量测定   攻毒后第3、7和14天分别采集攻毒组与对照组番鸭脏器,攻毒后每隔2 d采集泄殖腔拭子。依照说明书步骤提取病毒DNA。以DAdV-3 YN株hexon基因序列为模板,使用Primer 5软件设计引物,引物信息见表 2,引物由擎科生物有限公司合成。

表 2 DAdV-3病毒定量PCR引物信息 Table 2 Primer information of quantitative PCR detection for DAdV-3

以实验室所构建T-hexon质粒为阳性模板,按照文献方法[10],10倍比稀释制作荧光定量标准曲线。qPCR检测脏器与泄殖腔拭子所含病毒,将攻毒组Ct值数据带入标准曲线公式内计算拷贝数。每个样品重复3次。根据10 copies病毒量为界限,3个重复孔Ct值大于35的判定为阴性,反之则判断为阳性。

1.6.5 法氏囊与脾凋亡基因mRNA转录水平测定   TRIzol法提取法氏囊和脾总RNA并反转录成cDNA,SYBR Green qPCR进行检测,所得数据基于2-△△Ct的方式进行计算,获得促凋亡基因BaxBak-1,caspase-3和caspase-9以及抑凋亡基因Bcl-2的转录水平。引物参考现有文献内序列,相关信息见表 3,由擎科生物有限公司合成。

表 3 引物信息表 Table 3 Primer information
1.7 数据分析

本研究中使用GraphPad Prism整理试验数据并绘图,数据均表示为“平均值±标准误差(mean±SEM)”,通过双因素方差分析(Two-way ANOVA)对不同组数据之间的差异性进行统计学检验。*P≤0.05被认为具有显著性差异。

2 结果 2.1 病毒的分离

番鸭样品经过检测发现禽流感病毒、减蛋综合征病毒、4型禽腺病毒等常见病原均为阴性,但DAdV-3呈强阳性,同时伴随着鸭瘟病毒(duck enteritis virus,DEV)和番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)感染。PCR产物经过测序比对确认无误。

选择LMH细胞进行病毒分离,病毒接种于LMH细胞24 h后,细胞出现典型的细胞病变(图 1A):细胞皱缩呈现葡萄串状,大量死细胞脱落漂浮于培养上清中,与腺病毒接毒后病变相似[13]。病毒在细胞上多次传代均可见一致的细胞病变。收取细胞培养上清,PCR结果显示培养上清中可扩增得到633 bp的特异性条带(图 1B)。

A.接毒后LMH细胞产生病变;B.DAdV-3 PCR后电泳结果:M. DL2000 DNA Marker;1. 阳性对照;2. 细胞培养上清;3.阴性对照 A. Cytopathic effect (CPE) was produced in LMH cells post-infection of the viral isolate; B. Electrophoresis results of DAdV-3 after PCR: M. DL2000 DNA Marker; 1. Positive; 2. Cell culture supernatant; 3. Negative control 图 1 YN株接毒后细胞病变与PCR检测 Fig. 1 Cytopathic effect detected in LMH cell and PCR detection of YN strain
2.2 YN株基因进化分析

鸭腺病毒主要依据hexon与fiber等基因序列的同源性进行种属分类[6, 14]。序列比对结果显示(图 2),YN株hexon,penton base和fiber1基因与DAdV-3 GDMM10株以及CH-GD-12-2014株高度同源(100%);fiber2在第1 338个碱基处存在突变,由腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C),翻译的氨基酸由异亮氨酸变为谷氨酰胺,与GDMM10等毒株相同源性99.93%。与禽腺病毒的一些血清型相比,YN株与Goose adenovirus-4同源性更高,相比之下禽腺病毒虽然也能感染鸭,但与YN株同源性相对较低。

A. hexon基因进化树;B. penton base基因进化树;C. fiber1基因进化树;D. fiber2基因进化树。方框内为本研究中YN株 A. Genetic evolutionary tree of hexon gene; B. Genetic evolutionary tree of penton base gene; C. Genetic evolutionary tree of fiber1 gene; D. Genetic evolutionary tree of fiber2 gene.The YN strain was showed by a box 图 2 DAdV-3 YN株基因进化树 Fig. 2 Genetic evolutionary tree of DAdV-3 YN strain
2.3 攻毒后番鸭临床症状

7日龄番鸭攻毒后出现精神沉郁,蹲卧好静等情况,未见死亡病例。对照组番鸭精神状态良好,生长发育正常。每隔2 d对番鸭进行称重(图 3),结果显示,攻毒组番鸭体重在第7与第9天显著低于对照组(P<0.000 1),攻毒后第11天攻毒组仍显著低于对照组(P<0.05)。直至攻毒后第13天,两组番鸭体重差异不显著。结果表明,7日龄番鸭攻毒后体重增长受到一定抑制。

*.P<0.05;**.P<0.01;***.P<0.001;****.P<0.000 1,下同 *.P < 0.05; **.P < 0.01; ***.P < 0.001; ****.P < 0.000 1. The same as below 图 3 攻毒后番鸭体重(n=5) Fig. 3 Body weight of Muscovy ducks after infection (n=5)
2.4 攻毒后番鸭脏器病变

2.4.1 脏器解剖学病变   雏鸭通过腿部肌肉注射感染病毒后,在感染后第3、7和第14天进行剖检,发现攻毒组番鸭出现轻微心包积液(图 4A),心表观未见明显变化。在第3、7天肝组织略显肿大并存在出血点,第14天肝充血肿胀,边缘略显钝圆,存在明显出血点(图 4B)。此外,攻毒组番鸭肾组织存在不同程度的肿胀,颜色加深(图 4C)。脾淤血肿胀,边缘钝圆,颜色暗红(图 4D)。

A.番鸭出现心包积液;B.番鸭肝组织病变;C. 攻毒后番鸭肾组织病变;D.番鸭脾组织病变。心包内积液由黑色箭头指出,肝组织出血点由白色箭头指出。dpi表示攻毒后天数 A. Pericardial effusion after infection; B. Pathological changes of livers; C. Pathological changes of kidneys; D. Pathological changes of spleens.Pericardial effusion was showed by black arrows and bleeding point in livers was showed by white arrows.dpi means days post infection 图 4 攻毒后番鸭脏器病变 Fig. 4 Organs' pathological changes of Muscovy ducks after infection

2.4.2 脏器组织病理学变化   固定脏器相应部位后制作切片,显微镜观察未发现心肌细胞出现明显变化。攻毒组番鸭肝细胞变性,染色不均,肝细胞排列混乱,肝索结构消失。脾淤血,大量红细胞分布于脾细胞间。攻毒后番鸭肾组织内肾小球萎缩,与小囊间间隙增大且肾小囊内血细胞增多,肾小管上皮细胞变性、肿大突入管腔内导致管腔狭窄,小管结构不清(图 5)。

图 5 不同脏器病理切片(400×) Fig. 5 Pathological section of different organs (400×)

2.4.3 脏器系数变化   通过计算脏器系数,发现攻毒组与对照组番鸭心脏系数无明显差异,攻毒组番鸭的肝脏与肾脏系数在攻毒后均大于对照组,在攻毒后第7天存在显著差异(图 6AP<0.01),提示攻毒后肝、肾存在一定肿胀。

A. 心脏系数;B. 肝脏系数;C. 肾脏系数;D. 血清BUN含量;E. 血清ALT含量;F. 血清AST含量 A. Cardiac coefficient; B. Liver coefficient; C. Kidney coefficient; D. Level of BUN; E. Level of ALT; F. Level of AST 图 6 脏器系数与血清生化指标(n=3) Fig. 6 Organ coefficient and serum biochemical index (n=3)

2.4.4 血清生化指标变化   检测血清ALT,AST以及BUN三种酶的含量。结果显示,血清内BUN含量在攻毒后第3、7、14天都显著高于对照组(P<0.001)。ALT在攻毒后第3、7与14天差异极显著(P<0.01,P<0.001)。攻毒组血清AST含量在攻毒后第3天(P<0.01),第7天(P<0.001)和第14天(P<0.01)与对照组相比差异极显著(图 6B)。结果提示攻毒后番鸭肝与肾均存在一定损伤。

2.5 攻毒后番鸭排毒量与脏器载毒量

使用荧光定量PCR对所采集泄殖腔拭子以及不同组织脏器进行检测,结果显示,攻毒后番鸭排毒量持续在102~103 copies·mL-1,攻毒后第1天排毒量最高,直至试验结束仍可向环境中持续排毒(图 7A)。

A. 攻毒后试验组番鸭泄殖腔排毒情况;B. 攻毒后3 d脏器载毒量;C:攻毒后7 d脏器载毒量;D. 攻毒后14 d脏器载毒量。数据分析采用双因素方差分析(n=3)。相同字母表示两组数据无显著差异,不同字母表示两组数据存在显著差异,肝与其他脏器差异性用* 表示 A. Expelling of toxin in cloaca of experiment ducks after infection; B. Organ virus load in 3 days post-challenge; C. Organ virus load in 7 days post-challenge; D. Organ virus load in 14 days post-challenge. Data were analyzed using two-way ANOVA (n=3). The same letter indicates no significant difference between the two groups and the different letters indicate significant differences between the two groups of data, the difference between the liver and other organs is indicated by* 图 7 攻毒后试验组番鸭泄殖腔排毒量与脏器组织病毒载量 Fig. 7 Viral load of cloacal swab and viscera in experiment ducks after infection

攻毒后番鸭肝与心载毒量较高,在攻毒后第7和14天分别达105和104 copies·g-1,攻毒后第7与14天,肝载毒量逐渐升高,与其他脏器差异显著(P<0.01,P<0.001,P<0.000 1)。攻毒后脾脏载毒量较其他脏器略低,约103~104 copies·g-1。试验过程中对照组番鸭的泄殖腔拭子与脏器载毒量检测均呈阴性。

2.6 法氏囊与脾凋亡相关基因转录水平

由结果可知(图 89),攻毒后番鸭法氏囊与脾促凋亡基因转录水平出现不同程度升高。攻毒组番鸭在攻毒后第7天法氏囊内4种促凋亡基因BaxBak-1、caspase-3和caspase-9转录水平显著高于对照组(P<0.000 1),攻毒后第14天Bax(P<0.01)、Bcl-2(P<0.001)、caspase-3(P<0.000 1)和caspase-9(P<0.000 1)也显著高于对照组。抑凋亡基因Bcl-2则在攻毒后第7天(P<0.000 1)和第14天(P<0.01)显著下降,Bcl-2/Bax比值也在攻毒后显著下降(P<0.001,P<0.000 1)。结果表明攻毒后番鸭法氏囊内细胞凋亡水平上升。

图 8 法氏囊凋亡相关基因转录水平(n=3) Fig. 8 Transcription level of apoptosis-related genes in bursa (n=3)
图 9 脾凋亡相关基因转录水平(n=3) Fig. 9 Transcription level of apoptosis-related genes in spleen (n=3)

攻毒后第7天番鸭脾内凋亡相关基因转录水平均显著高于对照组(P<0.000 1),抑凋亡基因转录水平显著下降(P<0.01,P<0.000 1);攻毒后第14天Bax(P<0.01)、Bak-1(P<0.001)和caspase-3、caspase-9(P<0.000 1)也显著升高。Bcl-2/Bax比值也在攻毒后第7与14天显著下降,以上数据提示攻毒后番鸭脾内细胞凋亡水平上升。

3 讨论

2014年从广东番鸭体内分离到第一株DAdV-3后[15],国内报告DAdV-3临床感染的情况越来越多。2018年,Shi等[14]自福建、浙江、安徽和广东分离得到4株鸭腺病毒。2016—2019年间,Shi等[6]分离得到7株DAdV-3,全基因组测序发现ORF67存在缺失,可能是新的突变株。2018—2020年间,广东、福建与广西三省番鸭养殖场发生多起DAdV-3感染病例,Yin等[16]从病料中分离获得12株DAdV-3。

本实验室从来自云南的病料中分离得到1株DAdV-3 YN株,序列比对后发现该毒株与目前在国内流行的CH-GD-12-2014株以及GDMM10株等相应片段相似度为99.93%~100%。不同于现有突变株存在的ORF67截断突变,YN株fiber2蛋白长短未改变,也未见对盲肠存在明显致病效果[6]。目前对禽腺病毒的研究发现,毒株的致病能力强弱主要由hexon,fiber2蛋白决定[17-18],有研究表明,fiber2作为保护性抗原可针对病原感染提供免疫保护[19-20],也有学者认为,fiber1在病毒侵染宿主过程中起到主要作用[21]。因此,研究4段主要结构蛋白的基因序列对预测分离株的毒力有一定的指导意义。

之前的研究报道中,鸭腺病毒可以抑制受感染番鸭的生长发育[1, 4],同属的禽腺病毒也存在相同的抑制作用[22]。本研究中感染番鸭精神状态不佳,体重增长受到显著抑制,与之前研究相一致。对攻毒后番鸭脏器进行检测发现各脏器均存在病毒扩增,在肝组织中拷贝量最高。番鸭感染DAdV-3后可向环境中持续排毒,这可能对同群番鸭造成感染风险。这也与之前对禽腺病毒的研究相符合:禽腺病毒可以通过口-粪传播途径造成水平传播[23]

剖检结果显示,番鸭感染YN株后肝、肾等脏器均出现一定病变,与之前CH-GD-12-2014株感染后病变相似[4]。相应脏器固定后切片染色,可观察到相对应的组织学病变,同之前Shi等[6]与Yin等[16]所观察的DAdV-3导致的组织病理学变化相似。ALT、AST和BUN分别在肝与肾细胞受到损伤时逸出到血液中[24],因此,本研究攻毒组番鸭血清ALT、AST和BUN含量升高也从侧面证明了番鸭的肝与肾受损。

Bax与Bak-1作为同一促凋亡家族蛋白,两者之间可形成二聚体激活caspase[11, 25];caspase-9为凋亡初始阶段发生作用蛋白,caspase-3则为凋亡的“执行者”,一旦被激活则使细胞发生不可逆的凋亡[26]。本研究中,攻毒组番鸭在感染后法氏囊与脾内Bax等促凋亡基因的表达量均显著上升,Bcl-2/Bax则在攻毒后显著降低,提示法氏囊与脾功能可能受到损害。法氏囊是禽类主要免疫器官,在体液免疫中起到重要作用,与宿主抵抗病毒时抗体水平息息相关[27]。一些疾病如传染性法氏囊损伤法氏囊后,宿主的免疫功能受到影响[28]。研究发现,当传染性法氏囊与禽腺病毒共同感染鸡时,可以导致宿主免疫反应降低以及死亡率增加[29]。脾是全身免疫的重要器官,与禽类的先天性免疫息息相关[30],在病毒侵入机体时积极响应[31]。已有研究发现,当一些病原感染机体后通过使脾坏死从而削弱宿主的免疫能力[32]。本研究中番鸭中枢免疫与外周免疫器官均受到一定影响,势必会增加其他病原的共感染风险。流行病学调查发现禽类养殖场内常存在腺病毒与其他病原混合感染的情况[33-35],亦有报道称DAdV-3与其他病原混合感染后可能会导致DAdV-3临床症状加剧[14, 16]。本研究检测发现,DAdV-3 YN株存在与DEV、MDPV混合感染的情况,番鸭免疫机能受到影响,可能导致养殖场内番鸭在混合感染的情况下DAdV-3的临床症状加剧或者其他病原在番鸭体内致病能力增强,这也从侧面解释了实验室感染DAdV-3 YN株后致病能力弱于当地番鸭的临床感染。

4 结论

本研究自云南番鸭养殖场分离得到1株鸭腺病毒,通过对分离株的主要基因序列进行分析证实该病毒为DAdV-3。致病性试验证实该病毒以较为温和的方式在番鸭群体中流行,感染番鸭后影响其生长性能,损害多个脏器,且导致番鸭持续向环境中排毒,还可以影响番鸭的免疫功能。因此,本研究对DAdV-3的分离鉴定和早期防控都具有重要意义。

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(编辑   范子娟)