畜牧兽医学报  2021, Vol. 52 Issue (3): 845-850. DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2021.03.029    PDF    
引用本文
胡月, 高雁怩, 加尔肯, 车传忠, 王旭蕾, 姜平, 冉多良, 刘建华. 新疆部分地区马疱疹病毒1型感染的血清学调查[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(3): 845-850.  
HU Yue, GAO Yanni, Jarhen, CHE Chuanzhong, WANG Xulei, JIANG Ping, RAN Duoliang, LIU Jianhua. Serological Investigation of Equid Herpesvirus-1 Infection in Some Areas of Xinjiang[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2021, 52(3): 845-850.  
新疆部分地区马疱疹病毒1型感染的血清学调查
胡月1, 高雁怩2, 加尔肯1, 车传忠1, 王旭蕾1, 姜平2, 冉多良1, 刘建华1     
1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052;
2. 南京农业大学动物医学学院, 南京 210095
收稿日期：2020-08-27
基金项目：南京农业大学-新疆农业大学联合基金项目（KYYJ201906）；新疆维吾尔自治区重大专项项目子课题（2017A01002-2-4）
作者简介：胡月(1994-), 女, 新疆阿克苏人, 博士生, 主要从事动物病毒学与传染病防治, E-mail: 13565858351@163.com.
通信作者：冉多良, 主要从事动物传染病诊断与防治, E-mail: xjrdl7@163.com.
摘要：旨在了解新疆地区马疱疹病毒1型感染的流行现状和特点，本研究于2019—2020年从新疆乌鲁木齐、昌吉州、伊犁州、巴州16处规模化马场收集1 657份马血清样品，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行抗体检测，对不同地区、品种、性别及年龄马匹的马疱疹病毒1型抗体阳性率进行统计分析。结果显示，乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州、巴州马疱疹病毒1型抗体阳性率分别为39.34%、22.56%、90.52%、5.00%；纯血马、混血马、哈萨克马、伊犁马、焉耆马、普氏野马的EHV-1抗体阳性率分别为20.34%、32.93%、44.92%、19.35%、5.00%、90.52%；普氏野马与家马的EHV-1抗体阳性率分别为90.52%和29.32%；家马中新疆本土品种马与引进品种马的EHV-1抗体阳性率分别为31.70%和25.50%；母马与公马的EHV-1抗体阳性率分别为38.84%和22.00%；处于幼年、青年、成年、老年阶段的马匹EHV-1抗体阳性率分别为35.37%、33.00%、34.31%、23.81%。结果提示，新疆乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州、巴州规模化养殖场普遍存在EHV-1感染，且不同地区、品种、性别及年龄的马EHV-1感染率差异显著（P < 0.05）。本研究为新疆地区EHV-1感染的探讨和防控工作提供调查数据。
关键词：马疱疹病毒1型    酶联免疫吸附试验    血清学调查    
Serological Investigation of Equid Herpesvirus-1 Infection in Some Areas of Xinjiang
HU Yue1, GAO Yanni2, Jarhen1, CHE Chuanzhong1, WANG Xulei1, JIANG Ping2, RAN Duoliang1, LIU Jianhua1     
1. College of Veterinary Medicine, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China;
2. College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China
Corresponding author: RAN Duoliang, E-mail: xjrdl7@163.com.
Abstract: This study aimed to investigate the epidemic status and characteristics of equid herpesvirus-1(EHV-1) infection in Xinjiang. One thousand six hundred and fifty-seven samples of horse sera were collected from Urumqi, Yili, Changji, Bazhou, from 2019 to 2020. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to detect EHV-1 antibody. Statistical analysis of the positive rate of EHV-1 antibody in different regions, breeds, genders and ages. The detection rate of Urumqi, Yili, Changji and Bazhou were 39.34%, 22.56%, 90.52% and 5.00%; The positive rate of Thoroughbred horse, Half-bred horse, Hasake horse, Yili horse, Yanqi horse, Przewalski's horse were 20.34%, 32.93%, 44.92%, 19.35%, 5.00%, 90.52%, respectively; The positive rate of Przewalski's horse and domestic horse were 90.52% and 29.32%, respectively. The positive rate of local variety and introduced variety were 31.70% and 25.50%; The positive rate of female and male were 38.84% and 22.00%; The positive rate of infancy, youth, adult, old age were 35.37%, 33.00%, 34.31% and 23.81%, respectively. The results indicated that EHV-1 infection was widespread in large-scale stud-farms in Urumqi, Changji, Yili and Baizhou of Xinjiang. The infection rates of EHV-1 in different regions, breeds, genders and ages were significantly different (P < 0.05). This study provides survey data for the research and prevention of EHV-1 infection in the region.
Key words: equid herpesvirus-1    enzyme linked immunosorbent assay    sero-epidemiology investigation    

马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1，EHV-1)和4型(equine herpesvirus-4，EHV-4)是马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis，ER)的病原体，这两种病毒均能引起马属动物呼吸系统疾病[1]。然而，EHV-1除了可以引起马匹呼吸系统疾病以外，还能导致孕马流产和新生马驹死亡及神经系统疾病，如马疱疹病毒髓脑病(equine herpesvirus myeloencephalopathy，EHM)，且其所致疾病的病发率和死亡率均较EHV-4高[2-3]。由于EHV-1是一种引起马匹不同临床综合征的病原体，给马产业造成严重的经济损失，2012年5月，世界卫生组织将EHV-1引起的疾病称为马疱疹病毒-1型感染(infection with equine herpesvirus-1)[4]，2020年7月，我国农业农村部、海关总署将该病列为二类动物传染病[5]。

然而，长期以来，我国的流行病学的研究重心一直放在马鼻肺炎病的调查与防控上，忽略了区分EHV-1与EHV-4感染[6-8]。2013—2017年，针对新疆地区的马鼻肺炎的流行病学调查显示各地区平均阳性率为15.16%~28.85%[9-13]。ER在新疆广泛流行，但却没有针对EHV-1开展的流行病学调查，对EHV-1的防控工作带来阻碍。为掌握新疆地区EHV-1的流行现状，本研究于2019—2020年研究采集新疆不同地区代表性马场的1 657份马血清样品，利用已建立的针对EHV-1 gG蛋白抗体的间接ELISA检测方法[14]，进行了血清学调查，并分析其流行特点和感染因素，为新疆马疱疹病毒1型感染的有效防控提供数据支撑。

1 材料与方法 1.1 样本

2019年6月—2020年7月，由新疆农业大学动物医学学院和部分地区兽医站从新疆乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州和巴州的16处规模化养殖场采集纯血马、混血马、哈萨克马、伊犁马、焉耆马、普氏野马共1 657份血液样本，分批离心制备血清，于－80 ℃保存后集中检测。

1.2 试剂及仪器

TMB显色液和DAB试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；ELISA酶标板购自康为世纪公司；兔抗马IgG-HRP购自Abcam公司；其他常规试剂均为国产分析纯。酶标分析仪(Elx800)购自Bio-tek公司。

1.3 菌种、质粒及抗体

表达EHV-1 gG蛋白的阳性质粒pGEX-4T-1-gG，感受态表达菌E. coli BL21(DE3)，EHV-1感染马阳性血清、阴性血清均由新疆农业大学动物医学学院传染病实验室保存。

1.4 检测方法

将含有pGEX-4T-1-gG的阳性菌大量诱导表达后，用GSTrapTM HP kits纯化EHV-1 gG蛋白，并测定蛋白浓度。按照实验室已建立的间接ELISA方法进行样品检测，反应条件：抗原蛋白包被浓度为0.5 μg·mL－1；4 ℃过夜；50 g·L－1脱脂奶粉封闭，37 ℃ 2 h；待检血清1∶800稀释，37 ℃ 1 h；二抗1∶1 000稀释，37 ℃ 30 min；加TMB显色液，37 ℃ 5 min；加1 mol·L－1 H2SO4终止。每个样品同时设置3个平行对照，设阴阳对照。结果判定，样品OD450 nm值＞0.307可判为阳性，OD450 nm值≤0.307可判为阴性。

1.5 数据统计与分析

运用SPSS 20.0进行统计分析，对不同品种、性别及年龄的马匹EHV-1感染阳性率采用卡方检测。

2 结果 2.1 不同地区马血清马疱疹病毒1型感染抗体检测

来自16处规模化养殖场的1 657份血液样本含有544份阳性样品，平均阳性率为32.28%。乌鲁木齐7处规模化养殖场平均阳性率为39.34%(297/755)；伊犁州7处规模化场平均阳性率为22.56%(155/687)；昌吉州1处规模化养殖场阳性率为90.52%(86/95)；巴州1处规模化养殖场阳性率为5.00%(6/120)(表 1)。其中，昌吉州某养殖场阳性率最高，乌鲁木齐次之，与伊犁州和巴州相比差异显著(P < 0.05)。乌鲁木齐养殖场感染EHV-1存在城郊差异，县郊养殖场(乌鲁木齐县、达坂城区)44.05%(270/613)与乌鲁木齐市区养殖场(高新区、国有马场)19.01%(27/142)抗体阳性率差异显著(P < 0.05)。伊犁州的不同乡镇的养殖场感染EHV-1存在差异，昭苏县阿克达拉镇阳性率最高，达48.28%(28/58)，尼勒克县阳性率最低，仅为0.9%(2/222)。表明EHV-1感染在新疆马群中存在地区差异。

表 1 马血清来源及其EHV-1抗体检测结果 Table 1 Source of horse sera and the detection results of EHV-1 antibody
2.2 不同品种马血清EHV-1抗体检测

纯血马、混血马、哈萨克马、伊犁马、焉耆马、普氏野马的EHV-1抗体阳性率分别为20.34%、32.93%、44.92%、19.35%、5.00%、90.52%。其中，普氏野马血清的EHV-1抗体阳性率最高，显著高于其他品种的马(P < 0.05)。焉耆马血清的EHV-1抗体阳性率最低，显著低于其他品种的马(P < 0.05)(图 1)。本土品种(哈萨克马、伊犁马、焉耆马)平均抗体阳性率为31.70%(305/962)，与引进品种(纯血马、混血马)25.50%(153/600)差异显著(P < 0.05)；普氏野马90.52%(86/95)与家马29.32%(458/1562)的抗体阳性率差异显著(表 2)。通过血清学检测初步表明不同品种马匹EHV-1抗体阳性率差异显著。

图 1 不同品种马血清马疱疹病毒1型抗体检测结果 Fig. 1 The detection result of horse EHV-1 antibody in different breeds
表 2 不同属性马匹感染EHV-1血清抗体检测结果 Table 2 The detection result of horse EHV-1 antibody in different attributes
2.3 不同性别、年龄马血清EHV-1抗体检测

统计(表 2)表明，母马感染EHV-1的抗体阳性率为38.84%(414/1 066)显著高于公马22.00% (130/591)(P < 0.05)，马匹感染EHV-1存在性别差异。16处规模化养殖场饲养的马匹年龄为0~15岁，可分为幼年(0≤Age≤1)、青年(1＜Age≤3)、成年(3＜Age≤10)、老年(10＜Age≤15)4个阶段，成年阶段的马匹存栏量最高，EHV-1抗体阳性率为34.31%(398/1 162)；幼年阶段的马匹EHV-1抗体阳性率最高35.37%(29/82)；老年阶段的马匹EHV-1抗体阳性率最低，显著低于其他年龄的马匹(P < 0.05)。表明马群感染EHV-1存在年龄差异(表 2)。

3 讨论

此次EHV-1抗体阳性率检测结果表明，2019—2020年新疆部分规模化马场EHV-1的平均阳性率为32.28%。新疆乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州、巴州规模化养殖场普遍存在EHV-1感染，且不同地区、品种、性别及年龄的马EHV-1感染率差异显著(P < 0.05)。其中，昌吉州某马场饲养的普氏野马发病率高达90.52%，该地区某养殖区于2019年5月暴发马疱疹病毒1型感染，圈养95匹野马，其中，86匹野马体温升高至39.5~41.5 ℃，出现急性呼吸系统疾病，6~7匹孕马流产。2匹野马死亡。86匹患马经血清学检测均为EHV-1抗体阳性，并经病毒分离鉴定确诊为EHV-1感染。普氏野马为国家一级保护动物，该物种具有6 000万年演化史，是研究家马起源和性状改良的不可或缺的材料[15]。此次，新疆昌吉州暴发该病为我国普氏野马的繁育与保护带来了严重危害，制约着该物种的健康发展和保存。制定合理的免疫程序，有效控制EHV-1在新疆的流行，对该珍贵物种的保存具有重大意义[16]。

对乌鲁木齐的调查结果显示，县郊养殖场抗体阳性率(44.05%)显著高于市区养殖场(19.01%)。这与饲养环境及管理水平相关，县郊养殖场主要饲养哈萨克马，还包括混血马和伊犁马，多用于景区参观，而市区养殖场仅饲养纯血马，用于赛马和马术活动。由于引进马匹的经济成本较高，养殖场更注重饲养环境和消毒防疫工作，因而市区马场的饲养管理水平较县郊马场高[17]。此外，市区马场间隔较远，而县郊马场较为密集，不利于疫情防控[18]。提示当地应提高县郊马场的管理水平，降低饲养密度并做好疫苗接种工作。此次伊犁州7处规模化马场平均阳性率为22.56%，低于2017年袁贝等[13]对伊犁州10个乡镇的调查结果(28.85%)。其中，伊犁州新源县和尼勒克县阳性率为5.96%(18/302)，低于2016年杜润慈等[12]对两县的马鼻肺炎抗体检测结果(15.16%)。这可能与该地区EHV-4流行有关，本研究采用的EHV-1 gG蛋白抗体的间接ELISA检测方法可以有效区分EHV-1和EHV-4感染，因此，可以准确了解EHV-1感染情况。巴州焉耆县集中饲养的本地品种焉耆马EHV-1感染抗体阳性率仅为5%。焉耆马以群牧为主，因其具有持久耐劳的特性多用于马术比赛，当地政府也重视科学饲养和防疫程序，积极开展焉耆马养殖技术培训班，有效控制疫病传播[19]。

统计表明，母马EHV-1抗体阳性率(38.84%)显著高于公马(22.00%)，且养殖场的母马存栏量高于公马，应当对母马加强免疫预防该病。1岁以下马匹EHV-1抗体阳性率最高，其原因是5~6月龄马驹获得的母源抗体逐渐减少而自身免疫力较弱，与其他年龄阶段马匹相比更易于感染EHV-1[20-21]。研究表明，4~7月龄未断奶马驹及时进行疫苗接种可有效预防EHV-1感染，因而养殖场应重视对幼驹的预防接种工作[21]。

本研究通过对新疆部分地区规模化养殖场马匹的血清抗体检测，初步了解当前新疆地区EHV-1感染的流行情况，为该病的防控提供数据支持。分析结果提示，科学的饲养管理和严格的防疫工作可有效控制EHV-1在马群中的传播，养殖场应根据不同品种的马匹特性，给予其良好的生长环境；制定完善的免疫程序；对患马应及时隔离与治疗；加强跨区运输马匹EHV-1感染的监测工作。

4 结论

通过对新疆乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州、巴州规模化养殖场进行马疱疹病毒1型抗体检测，发现新疆地区普遍存在EHV-1感染，且不同地区、品种、性别及年龄的马匹EHV-1感染率差异显著(P < 0.05)，可为新疆地区EHV-1感染的研究和防控工作提供调查数据。

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