血清淀粉样蛋白A (Serum Amyloid A, SAA)是载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，不仅与C反应蛋白一样，是一种急性时相反应蛋白，同时在炎症应答过程中它可以代替载脂蛋白A1成为高密度脂蛋白的主要载脂蛋白。关于SAA与肥胖的关系已有文献报道，Meta分析发现体重指数(BMI)与SAA浓度密切相关^[1]。最近的研究发现SAA1基因多态性可以改变SAA的血清浓度^[2]，因此SAA1基因多态性可能与肥胖有关。我们此次研究了SAA1基因多态性与重度肥胖儿童血脂的关系。

研究对象来自本地一所初中，年龄12-15岁，青春期发育在Ⅱ-Ⅴ期，所有研究对象必须经家长同意并随时可以无条件退出本研究。中重度肥胖儿童的诊断标准参照《实用儿科学》第七版进行判断^[3]，并排除其他病理性肥胖。最后符合入选标准的共有65人(其中男孩40人，女孩25人)。

体格检查由同一人负责，包括体重、身高，并计算BMI。体重精确到0.1 kg，身高精确到0.1 cm, BMI精确到0.1。

所有研究对象均空腹12 h后取肘静脉血3 ml, 所有标本直接送本院检验科，离心后置-80 ℃低温冰箱保存供检测。血脂包括总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)，SAA均使用专用的测定试剂盒进行检测，SAA使用酶联免疫吸附测定。

单核苷酸多态性(SNPs)的选择和基因分型按照谢翔^[4]等报道的方法进行，我们在此研究中分析了四个标签SNPs (rs12218, rs4638289, rs7131332和rs11603089)。基因组DNA使用DNA提取试剂盒(Beijing Bioteke Co.Ltd)从外周血白细胞中提取。基因分型确认通过聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)分析。四种SNPs的引物配对序列、变性温度及限制性内切酶见表 1。反应体系25 μl，包括2×Power Mix12.5 μl (北京百泰克生物技术有限公司)，上下游引物各0.5 μl (10 pmol/μl)，DNA模板1 μl (50 ng/μl)，体积不足部分用双蒸水补足。

表 1(Table 1)

表 1 四种单核苷酸多态性的引物序列 基因型 PCR引物 变性温度 产物长度 限制性内切酶 rs4638289* 5′TTAAATTCATGGTCGTTGAT 3′ 48 ℃ 243 bp DpnⅠ 5′AAAGTGCTGAGATTATAGGC3′ rs12218 5′AACAGGGAGAATGGGAGGGTGGG3′ 58 ℃ 193 bp BglⅠ 5′GCAGGTCGGAAGTGATTGGGGTC3′ rs7131332* 5′GGTGAAAAGCCACGCCCG3′ 55 ℃ 201 bp BcoⅠ 5′TTCAACGCCTCCCCTCTG3′ rs11603089 5′TCTCTGCCTATTTCCTTC3′ 50 ℃ 133 bp MaeⅢ 5′CCCCTCTTTCTCATTCTA3′ *表示错配的碱基

表 1 四种单核苷酸多态性的引物序列

使用SPSS 17.0版本进行统计学分析，样本的群体代表性分析使用Hardy Weinberg平衡检验，计量资料的比较使用t检验；计数资料的比较使用卡方检验；单核苷酸多态性基因型与BMI之间的相关性在调整了混杂变量后使用一般线性模型(GLM)分析检验。正态性通过绘制残差评估。每基因型实现一个假设意义的概率值的危险因素的数量使用多重检验校正。所有计量指标使用均数±标准差(x±s)。治疗前后相关指标均数的比较使用t检验。

符合条件的重度肥胖研究对象共有65人，同时在年龄、性别和种族匹配的体重正常儿童也有65人，两组儿童的体格检查参数及血液检查指标见表 2，如同预期的一致，肥胖组儿童较正常对照组有较高的LDL-C、TC和TG水平(P < 0.001)，SAA水平也明显高于正常对照组儿童(P < 0.001)，BMI和SAA相关系数为0.58(P < 0.001)。

表 2(Table 2)

表 2 两组儿童体格检查和血液检查参数 组别 人数 年龄(岁) BMI (kg/m2) TC (mmol/L) LDL-C (mmol/L) HDL-C (mmol/L) TG (mmol/L) SAA/(μg/ml) 肥胖组 65 13.8±1.2 25.8±3.2 3.9±1.4 2.0±1.1 0.85±0.2 0.95±0.3 75.5±32.54 对照组 65 13.7±1.1 17.3±1.5 2.8±0.8 1.2±0.7 0.83±0.2 0.64±0.2 55.4±28.68 P 0.865 < 0.01 < 0.01 < 0.01 0.105 < 0.01 < 0.01

表 2 两组儿童体格检查和血液检查参数

重度肥胖组儿童和正常对照组儿童每种SAA1基因型的分布频率见表 3，可以看出，重度肥胖组儿童较正常对照组儿童有较高的rs12218和rs4638289分布频率(P < 0.05)，而在其它两组基因型分布频率上无明显差异(P>0.05)。

表 3(Table 3)

表 3 两组儿童SAA1四种基因型分布 SNPs 等位基因(1/2) 组别 基因型[n(%)] P 1/1 1/2 2/2 rs11603089 A/G 对照组 46 (0.71) 18 (0.27) 1(0.02) 0.295 肥胖组 45 (0.69) 18 (0.27) 2 (0.05) rs4638289 A/T 对照组 27 (0.42) 31(0.48) 9(0.10) 0.001 肥胖组 21 (0.33) 27 (0.44) 15 (0.23) rs12218 C/T 对照组 37 (0.57) 26 (0.40) 2 (0.03) 0.014 肥胖组 33 (0.50) 23 (0.36) 9 (0.14) rs7131332 A/G 对照组 17 (0.26) 38(0.58) 10 (0.15) 0.897 肥胖组 16 (0.24) 39 (0.60) 11 (0.18)

表 3 两组儿童SAA1四种基因型分布

对两组儿童每组基因型间的SAA浓度进行比较(表 4)，发现只有rs4638289各基因型间SAA浓度有显著性差异(P < 0.05)，其它单核苷酸多态性各基因型间SAA浓度无显著性差异(P>0.05)。

表 4(Table 4)

表 4 两组儿童每种基因型SAA的浓度(μg/ml) 组别 rs11603089 rs4638289 rs12218 rs7131332 AA AG GG AA AT TT CC CT TT AA AG GG 肥胖组 73.34± 25.28* 69.97± 23.89* 72.71± 26.24* 63.35± 22.41* 79.05± 24.18* 90.62± 31.56*△ 72.83± 24.32* 71.25± 24.05* 71.26± 25.98* 73.21± 24.63* 74.87± 24.59* 72.36± 24.31* 对照组 50.88± 24.38 51.51± 21.64 52.67± 25.13 44.53± 20.15 60.24± 23.54 62.12± 23.72△ 56.42± 23.28 51.56± 25.06 55.31± 22.48 50.38± 22.36 51.43± 22.37 54.16± 25.73 与对照组相比，*P < 0.05;与rs4638289基因型AA比较, △P < 0.05

表 4 两组儿童每种基因型SAA的浓度(μg/ml)

SAA和C反应蛋白(CRP)都是重要的炎症标志物。近年的研究发现肥胖存在一种低度的慢性炎症状态，CRP早已被证明与肥胖密切相关^[5]，我们以前也已对肥胖儿童进行了相关的研究，得出了CRP与肥胖密切相关的结论^[6]。而SAA与肥胖的关系似乎也与CRP一样，体重指数与SAA的浓度成正相关，当体重下降时，SAA的浓度也下降。我们此次的研究证实在重度肥胖儿童中不仅血脂(TC、LDL-C、TG)较正常儿童高，SAA的浓度也明显高于正常儿童，且体重指数与SAA正相关。这与相关的报道一致^[1]。SAA对血脂影响的机理，目前认为SAA除了对胆固醇的代谢和转运产生影响外^[7]，它还直接对脂肪细胞产生影响^[8]，在急性应答阶段，脂肪组织储存的游离脂肪酸(FFAs)减少，这种减少是由SAA直接对脂肪细胞以下几种作用导致的：①引起参与脂肪细胞储存的重要的转录因子如PPARγ₂, C/EBPα和SREBP-1c的基因表达下降；②主要参与脂肪形成的一些酶如G₃PDH、FAS的基因表达下降；③通过激活ERK通路增加脂肪分解^[9]。而SAA参与炎症的机理目前有人认为^[9]，SAA和SAA-HDL复合体可以诱导促炎症蛋白MCP-1, IL-6和IL-8的分泌和表达，抑制脂联素的产生，SAA还通过激活NF-κB通路导致炎症的产生。

人SAA基因定位于11号染色体p15.1，包含了四个相关的基因，分别为SAA1-4，但只有SAA1和SAA2编码急性时相蛋白SAA (包括SAA1和SAA2)，因此，目前主要研究围绕它们展开。已有研究发现SAA1基因多态性与血脂有关^[2]，但对SAA1基因多态性与肥胖儿童血脂关系的研究报道不多，我们此次研究发现SAA1基因中rs12218和rs4638289单核苷酸多态性的基因型分布在重度肥胖儿童中明显不同于正常儿童。rs12218 CC基因型和rs4638289 TT基因型在重度肥胖儿童中较正常儿童中常见。进一步的研究发现rs4638289基因型与SAA水平有关，而rs12218基因型与SAA水平无明显相关。出现这种结果的原因目前尚不清楚，需要更深入的研究，同时我们的样本量较小，也需要更大样本的研究来进一步支持我们的结论。

总之，我们的研究至少可以说明SAA1基因多态性与重度肥胖儿童的血脂密切相关。