不规则抗体 (irregular antibodies) 是指ABO血型系统抗A、抗B以外的血型抗体，正常情况下血液中不存在不规则抗体，主要是经输血、妊娠等免疫刺激产生，多为IgG抗体，是引起免疫溶血性输血反应、血型鉴定困难以及疑难交叉配血的主要原因之一。孕妇体内的IgG类不规则抗体可通过胎盘进入胎儿体内引起胎儿或新生儿溶血病 (haemolytic disease of the foetus and the newborn，HDN)。因此，对孕妇群体开展不规则抗体筛查具有非常重要的临床意义。现回顾性的对66 013例孕妇进行血不规则抗体筛选和鉴定结果报告如下。

选取2010年1月1日-2014年12月31日期间在本院待产孕妇66 013例，年龄18-45岁。采用回顾性调查、分析方法。

2010-2011年采用瑞士DiaMed检测系统：DiaMed IgG卡、卡式离心机和37 ℃恒温孵育器等；2012-2014年采用聚戴安娜检测系统：戴安娜专用孵育器和戴安娜专用离心机。

2010-2011年瑞士DiaMed公司提供微柱凝胶卡、Ⅰ-Ⅲ号筛选细胞均由。2012-2014年抗人球蛋白微柱凝胶卡 (DG Gel-Coombs)、Ⅰ-Ⅲ号筛选细胞由斑珀斯技贸有限公司提供；广谱抗人球试剂和1-11谱细胞均由上海血液生物医药有限公司提供。微柱凝胶卡和试剂均在有效期内使用。

所有标本均用输血科提供的无抗凝试管抽取患者血液3-5 ml, 充分离心后进行实验。微柱凝胶试验：向标记好的微柱凝胶卡内加入抗筛Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞悬液各50 μl，接着又向对应孔内加入受检血清各25 μl，放置于各自专用的孵育器槽内，37 ℃恒温孵育15 min，取出卡后立即置于各自专用的离心机 (Diana的离心机转速为1 100 r/min离心9 min; DiaMed的则为1 000 r/min离心10 min), 离心后直接在白色背景下肉眼观察结果。结果判定：-，+/-，1+，2+，3+，4+，dp，双群和Hemo依据各自试剂说明进行判断。

将不规则抗体筛查阳性结果的血清分别与自身红细胞和谱红细胞 (11人份，均为0.8%) 加在微柱中反应, 与自身红细胞不凝集，而与谱红细胞中1至数人份凝集者为特异性抗体，根据与谱红细胞的反应结果判定抗体的特异性^[1]。

分别取不规则抗筛阳性者血清和2-Me (0.2 mol/L)0.2 ml混合后密封 (37 ℃孵育30 min)，经过生理盐水倍比稀释加入到微柱中与具有相应血型抗原的红细胞反应，2-Me处理后与具有相应血型抗原的红细胞无反应者为IgM类抗体效价；效价与2-Me处理前相比无变化者为IgG类抗体，效价与2-Me处理前有所降低、但仍有反应者为IgG加IgM抗体。

实验数据用SPSS Version 11.5统计软件分析。

66 013例受血者血清中共检测出不规则抗体阳性230例，阳性率为0.35%，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 2010-2014年筛查不规则抗体孕妇例数、阳性例数及阳性率 项目 2010年 2011年 2012年 2013年 2014年 合计 例数 8 253 10 779 12 533 16 638 17 826 66 013 阳性数 24 39 38 72 57 230 阳性率 (%) 0.29 0.36 0.30 0.43 0.32 0.35

表 1 2010-2014年筛查不规则抗体孕妇例数、阳性例数及阳性率

230例不规则抗体分别为抗-E 91例、抗-M 31例、抗-D 19例、抗-Lea 15例、抗-c 13例、抗-Ec 5例、抗-Fya 2例、抗-s 2例、抗-A1 1例、其他抗体 (含自身抗体)51例。230例不规则抗体特异性、免疫球蛋白类型、效价见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 本地区230名不规则抗体分布情况 特异性 例数[n(%)] 不规则抗体类型 效价 抗-E 91(40) 以IgG为主 4-512 抗-D 19(8.3) IgG 4-512 抗-c 13(5.7) IgG 2-8 抗-Ec 5(2.2) 以IgG为主 2-8 抗-M 31(13.5) IgM及IgG混合 2-256 抗-Lea 15(6.5) 以IgM为主 2-8 抗-Fya 2(0.87) IgG 2-4 抗-s 2(0.87) IgG 2 抗-A1 1(0.43) IgM及IgG混合 16 其他抗体 (含自身抗体) 51(22.2) IgM及IgG混合 -

表 2 本地区230名不规则抗体分布情况

不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，即抗-A、抗-B以外的血型抗体，其中多为IgG类抗体，在正常人群中检出率为0.3%-2%^[2]，主要通过注射、输血、母婴血型不合的妊娠或血液制品的免疫刺激和一些无觉察的刺激产生。在临床上多可引起交叉配血困难及免疫溶血性输血反应。随着输血技术的发展与提高，由ABO血型不合引起的溶血反应已非常少见，而不规则抗体成为引起溶血性输血反应的主要原因。据报道，每输一次血产生抗体的几率约为4%，大多数抗体均在输血1-2次后产生^[3]。

在妊娠过程中，由于胎儿与母体之间存在着复杂的免疫反应和胎盘屏障的透通性，若胎儿血型与母体血型不一致时容易产生免疫不规则抗体，当这些不规则抗体通过胎盘进入新生儿体内引起新生儿溶血病 (HDN)。因此, 不规则抗体检测对孕妇来说就显得尤为重要，不仅可以预防溶血性输血反应，还可有效防治新生儿溶血病的发生。

本研究共筛查了66 013例孕妇，从表 1可以看出虽然每年孕妇筛查人数在不断增加，但各年份间不规则抗体阳性率却相近。5年间检出不规则抗体阳性者230例，总阳性率为0.35%, 与本地区的报道0.33%-0.42%^{[4, 5]}基本一致，但稍低于南京地区孕妇阳性率 (0.49%)^[6]，而明显低于山东东营孕妇阳性率 (1.18%)^[7]，这种差异可能与其研究的对象主要是当地疑难血型配血的孕妇有关，也可能与标本数量、来源、地域差别等有一定关系，具体原因有待进一步探讨。本研究的阳性率与一些血站报道的阳性率0.032%-0.166%^[8]相比明显偏高：其原因可能是研究对象不同，血站的研究人群大多是无输血史的健康人群。通过本研究我们发现孕妇不规则抗体阳性率和以往文献有所降低，这些变化是否与预防保健提升、方法更换、实验环境不同等有关，都需要进一步做相关的实验来验证。

在本调查结果中，230例不规则抗体中有128例为Rh血型系统抗体，其发生频率在红细胞各血型系统中最多，占总阳性率的55.6%，这一结果与高志峰^[5]报道的63.86%相近。Rh血型系统是红细胞血型系统中最复杂的血型系统之一，其不规则抗体在临床上常引起溶血性输血反应和新生儿溶血症^[9]。本次研究中抗-E在Rh系统中发生频率最高，为40%，其次分别为抗-D (8.3%)、抗-c (5.7%) 和抗-Ec (2.2%)。Rh系统中不规则抗体，特别是抗-E抗体是目前临床最易出现血型不规则抗体，几乎都存在有输血史或妊娠史的患者中^[10]。各种血型抗原相应不规则抗体产生频率大小主要取决于其抗原性强弱和抗原表达率：Rh系统抗原性强弱顺序为D＞E＞C＞c＞e，及在汉族人群抗原表达率分别为D 99.66%、C 87.45%、c 56.31%、e 52.12%、E 47.88%^[11]。临床上已开展D抗原的常规检测，并进行同型输血，E、C、e、c一般没有开展抗原的常规检测也未同型输血。同时由于D抗原分布频率高达99.66%，而E抗原分布频率为47%，这样必然会出现抗-D的降低和抗-E、抗-C、抗-e、抗-c等抗体上升。研究表明，抗原阳性与阴性的百分率越接近，产生抗体的机会也越多^[12]。综合以上各种因素，虽然D抗原抗原性最强，其表达率也最高，但在汉族人群中抗-E出现的概率最高，本调查研究结果也充分地验证了这一点。

其次是MNSs系统抗体，共33例, 占总阳性率的14.3%。其中只有2例为抗-s，其余均为抗-M。抗-M比较常见，以IgM形式存在为多，大部分属于天然抗体, 仅在抗球蛋白试验阳性或37 ℃时才有临床上实际意义^[13]。本研究中Lewis系统抗体检出最多的为抗-Lea, 这与文献报道一致^[8], 抗-Lea是最为常见的IgM类自然发生抗体，在37 ℃一般没有活性，其临床意义不大。因此，对于以上这些不规则抗体阳性的孕妇应进一步检测抗体效价、特异性及免疫球蛋白类型，然后进行综合分析评估其引起配血困难、出现免疫溶血性输血反应及发生HDN的可能性。

综上所述，临床输血前对孕妇，特别是有多次妊娠史和输血史者进行不规则抗体筛查和鉴定, 可发现具有临床意义的不规则抗体，对孕妇再次怀孕, 及时为孕妇寻找相合血液，预防和减少新生儿溶血病的发生，保护母婴健康, 提高人口素质有着重要的意义。