血管性痴呆(vascular dementia, VD)常常会演变成阿尔茨海默病，因此，对VD的早期诊断及预防具有重要意义^[1]。VD根据病理及病因可分为大面积脑梗死痴呆、多发性腔隙性脑梗死痴呆、多梗死痴呆等^[2]。VD的诊断要结合患者的体征和影像学检查等，还需排除其他的可能病因^[3]。VD与变性病痴呆不同，前者发病较为突然，且会伴随脑血管事件的发生，而后者发病则较为缓慢^[4]。

microRNA(miRNA)是一类非编码RNA，由20~25个核苷酸组成^[5]。近年来有研究显示^[6]，miRNA参与多种脑血管疾病的调控，包括血管血栓的形成、动脉粥样硬化、脑缺血再灌注等，而上述脑血管疾病则是VD的主要病因，所以miRNA与VD也具有相关性。研究指出^[7]，miRNA与VD有关，miRNA通过刺激神经元及炎症的发生，导致细胞的凋亡及氧化应激，从而影响生物体的记忆。脑缺血缺氧时，大脑中有多种miRNA的表达产生改变，其中以miR-124的表达量最高。本文拟探讨血管性痴呆患者外周血miRNA的表达水平及其意义。

1 对象与方法 1.1 研究对象

选取2018年1月至2019年5月我院收治的血管性痴呆患者68例纳为观察组，再选择体检结果显示健康的患者50例纳为对照组。

纳入标准^[8]：①符合血管性痴呆的诊断：认知功能(如言语、注意力、记忆力等)明显下降；②证实患者脑血管疾病发生3个月之内出现认知障碍；③简易智力状态检查量表(Mini-mental State Examination, MMSE)评分 < 27分；(4) Hachinski缺血指数量表(Hachinski Ischemic Scale, HIS)评分>7分。

排除标准^[9]：①确诊为其他原因的痴呆、抑郁症患者或精神障碍患者；②患有严重的颅脑损伤；③患有癫痫、帕金森等疾病的患者；④患有严重的心、肝、肾等脏器疾病的患者；⑤患有恶性肿瘤、甲状腺功能异常或严重贫血的患者。

该实验已通过本院医学伦理委员会批准(批准号：HBTSFR20170218)。患者及家属均签署相关知情同意书。

1.2 主要试剂与仪器

Trizol试剂盒、反转录试剂盒(PrimeSeriptTM RT reagent Kit)、SYBR Green实时荧光定量PCR试剂盒(2×SYBR Premix Ex TaqTM II)为日本Takara公司产品。氯仿、异丙醇及75%乙醇等均为国产分析纯试剂。氯化三苯基四氮唑(TTC)购自美国Amresco公司。琼脂糖购自上海增健生物科技有限公司。梯度PCR仪(Bio.tad公司，美国)。实时定量(Real time)PCR仪(ABI 7500，美国)。超低温冰箱(Thermo公司，美国)。低温高速离心机(Heraeus，德国)。

1.3 研究方法 1.3.1 治疗方法

参照2016年修订的《中国脑血管病防治指南》对患者进行相关的治疗^[10]：①采用个体化的方法对患者进行治疗，并将患者的血压调整至正常范围内；②为防止血小板凝集，患者口服阿司匹林(0.1 g/d)；③使患者口服胞二磷胆碱以营养神经；④给予患者康复治疗及认知训练；⑤给予患者营养支持；⑥对患者进行对症治疗并防治并发症。

1.3.2 抽血及miRNA的提取^[11-12]

治疗前，对每一位研究对象抽取3 mL外周血；治疗后3个月，对观察组抽取3 mL外周血。取0.3 mL，3000 r/min离心分离血浆。采用TRlzol法，利用mirVanaPARISmiRNA提取试剂盒进行miRNA提取，进行反转录则使用TaqManmiRNA反转录试剂盒进行，最后使用TaqManmiRNA检测试剂盒，采用RT-PCR检测miR-124的表达。以U6为内参，miR-124正向引物为5'-GCTAAG-GCACGCGGTG-3'，反向引物为设计引物5'-GTGCAGGTC-CGAGGT-3'；以内参U6，正向引物为5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物为5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。通过计算-ΔCt以获得miRNA的相对表达，ΔCt=CtmiRNA-Ctu6。

1.4 观察指标

治疗前，miR-124的相对表达水平与对照组进行对比；治疗后3个月，miR-124的相对表达水平与治疗前进行对比。治疗3个月后，患者症状明显好转且无不良事件出现，即为治疗效果良好，纳入良好组；患者症状无明显好转或出现不良事件，即为治疗效果不良，纳入不良组。

1.5 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件处理研究数据。计数资料用例(%)表示，组间比较采用χ²检验；计量资料用均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用成组t检验或配对t检验。通过绘制ROC曲线来评价miR-124的诊断效能。当P < 0.05，表示差异具有统计学意义。

2 结果 2.1 一般资料比较

观察组与对照组在性别、年龄及受教育年限上差异无统计学意义(P>0.05)。见表 1。

2.2 miR-124的相对表达水平比较

治疗前miR-124的相对表达水平观察组高于对照组，差异有统计学意义(P < 0.005)。观察组治疗3个月后患者的miR-124的相对表达水平较治疗前低，差异有统计学意义(P < 0.015)。见表 2。

2.3 良好组和不良组的临床资料对比

良好组和不良组在年龄、性别、体重上差异无统计学意义(P>0.05)；而在高血压、高血脂及miR-124上差异有统计学意义(P < 0.05)。见表 3。

2.4 对血管性痴呆患者进行治疗后预后ROC曲线

根据2.3的结果，做高血脂、高血压及血清miR-124相对表达水平在预测血管性痴呆患者治疗后预后的ROC曲线分析，高血脂在预测血管性痴呆患者治疗后预后的AUC曲线面积为0.742，高血压在预测血管性痴呆患者治疗后预后的AUC曲线面积为0.705，血清miR-124相对表达水平在预测血管性痴呆患者治疗后预后的AUC曲线面积为0.821(图 1)。以最大约登指数计算得出最大AUC面积相应参数截止值，高血脂为5.220(敏感度=60.00%，特异性=85.70%)；高血压为1.965(敏感度=75.00%，特异性=69.00%)；血清miR-124相对表达水平为4.225(敏感度=80.00%，特异性=78.60%)。

3 讨论

痴呆主要特征表现为智能的缓慢减退，虽然无意识障碍，但可能伴有不同程度的人格改变^[13]。引起痴呆的原因有中枢系统疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、脑血管疾病等，而VD属于脑血管疾病引发的痴呆，表现为认知功能的损伤，并且伴有局灶性神经系统损伤^[14-15]。近年来，VD患者数量不断上升，其发病机制尚无确切共识，这是治疗VD的障碍之一^[16]。VD目前只能够用药物进行控制，而在进行治疗时，也会有一些因素影响疗效^[17]。有研究显示^[18]，miRNAs与脑神经的发育、脑细胞的发育及突触的功能有极大的关系，miRNAs的变化可能会造成脑缺血或者缺氧。miR-124作为脑部特异性的miRNA，在脑部的发育及神经的调控中发挥着重要作用，miR-124的相对表达水平可能与VD治疗的疗效有关^[19]。

本研究中，治疗前miR-124的相对表达水平观察组高于对照组，治疗3个月后观察组的miR-124的相对表达水平较治疗前低。由此可见，血管性痴呆的发生与患者外周血miR-124的相对表达水平升高有关。将治疗3个月后的患者按恢复程度分为良好组和不良组，良好组和不良组在高血压、高血脂及miR-124上差异有统计学意义，提示不良组的高血压、高血脂比例更高，miR-124水平更高。ROC曲线分析发现，在预测血管性痴呆患者治疗后预后时，高血脂敏感度为60.00%，特异性为85.70%；高血压敏感度为75.00%，特异性为69.00%；血清miR-124相对表达水平敏感度为80.00%，特异性为78.60%。

由此可见，对患者进行治疗后，患者miR-124相对表达水平虽然有所下降，但却还是未能达到正常水平，可能与VD这一疾病的不可治愈性有关，故miR-124的表达水平显著高于正常人，故即使接受治疗后，VD患者的miR-124的表达水平仍高于正常。

有研究显示^[20]，miR-124大量表达时，可以通过减少相关炎症因子的表达、对脑细胞的凋亡进行抑制等途径对脑神经与脑细胞进行保护。因此，我们可以猜测，当患者出现VD时，miR-124表达水平的升高，可认为是机体对于大脑的一种保护。而文中又发现高血压及高血脂也是影响VD预后的重要预测指标，对此，在治疗的过程中，可根据VD患者miR-124表达水平的测定结果，及时更改治疗方式，及时控制患者治疗过程不良因素的发生，提高其治疗效果。

综上所述，miR-124表达水平可作为VD患者预后不良的一个重要指标，对监测VD患者的治疗效果具有重要意义，但因患者个体原因及患者例数等因素的影响，此研究还需要进一步进行完善。