胶质瘤作为最为常见的颅内原发性恶性肿瘤，恶性程度高、侵袭力强，且呈浸润性生长，致使肿瘤组织与正常脑组织界限不清^[1]，尽管现有的手术及放化疗治疗手段不断提高，但患者治疗后复发率高，总体预后依然较差^[2]。有研究指出^[3]，高侵袭和转移性是导致胶质瘤预后不佳的重要因素。因此，依靠现代分子生物学技术，寻找与胶质瘤侵袭和转移相关的敏感基因，对指导患者治疗及改善预后具有重要意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)作为一种广泛存在于机体内的长度在200个核苷酸以上的RNA，无法正常编码蛋白，但在多种生理、病理及一些疾病发生进展中发挥重要作用^[4]，近年来，越来越多的研究发现^[5-6]，LncRNA参与了恶性肿瘤发生、进展过程，与肿瘤细胞恶性生物学特性密切相关。核仁小RNA宿主基因6(small nucleolar RNA host gene 6，SNHG6)是一种重要的LncRNA，在结直肠癌组织中呈高表达^[7]，参与了结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭过程^[8]，但其在胶质瘤发生进展中的作用鲜有报道。本研究检测胶质瘤组织中LncRNA SNHG6表达，分析其在不同临床病理指标间表达差异性，并探讨其与患者预后的相关性，以期为胶质瘤机制研究提供参考资料。

1 资料与方法 1.1 一般资料

选取2009年2月—2014年2月在新乡市中心医院接受手术治疗的胶质瘤患者，纳入标准：①术前无放化疗等治疗史；②术后经病理学检查确证；③临床资料完成，均顺利完成院外随访。排除标准：①合并有其他肿瘤病史、凝血功能障碍及免疫缺陷性疾病者；②并发颅内感染、血肿等术后并发症；③心肝肾等重要脏器严重功能障碍者；④随访过程中由于其他疾病死亡者。共入选患者94例。其中，男性57例，女性37例；年龄21~75岁，平均(51.37±10.74)岁，中位年龄53岁；肿瘤位置：额部43例，颞部51例；根据2016年世界卫生组织(WHO)关于中枢神经系统肿瘤分级标准^[9]：Ⅰ、Ⅱ级41例，Ⅲ、Ⅳ级53例。同期，选取留取因颅脑外伤或癫痫而行手术治疗的正常脑组织37例；其中，男性20例，女性17例；平均年龄(52.02±11.34)岁。两组在性别、年龄等方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)，均衡可比。所有研究对象均于术中留取组织并置于液氮中，-80℃保存。

1.2 方法 1.2.1 实时荧光定量PCR检测胶质瘤和正常脑组织中LncRNA SNHG6表达

取胶质瘤和正常脑组织，切碎，研磨，加入细胞裂解液，按Trizol总RNA提取试剂盒(购自美国Invitrogen公司)说明提取总RNA，并使用紫外分光光度计检测其纯度。用反转录试剂盒(购自日本TaKaRa公司)将总RNA反转录为cDNA，使用美国ABI公司生产的StepOnePlus实时荧光定量PCR仪按PCR扩增试剂盒(购自日本TaKaRa公司)说明对引物扩增，引物合成由上海生工生物公司设计完成。LncRNA SNHG6：正向：5’-TTAGTCATGCCGGTGTGGTG-3’，反向：5’-AATACATGCCGCGTGATCCT-3’；GAPDH：正向：5’-CGAGCCACATCGCTCAGACA-3’，反向：5’-GTGGTGAAGACGCCAGTGGA-3’。反应条件：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，60℃退火30 s，76℃延伸30 s，进行38次循环。以GAPDH为参照，采用2^-△△Ct法计算SNHG6 mRNA相对表达量。

1.2.2 病例随访

所有胶质瘤患者均于院外进行随访，形式包括门诊及住院病历收集、电话随访等，随访截止时间2019年2月28日，以死亡作为终点事件，记录患者总生存时间，生存时间3~120个月，中位生存时间21个月。

1.3 统计学方法

使用SPSS 21.0软件分析，计量资料采用均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验，生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验，影响预后的风险因素分析采用Cox比例风险回归模型，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 胶质瘤和正常脑组织中LncRNA SNHG6表达水平

胶质瘤组织中LncRNA SNHG6相对表达量为(1.88±0.17)，而在正常脑组织中为(1.01±0.13)，两者比较差异有统计学意义(t=28.230，P < 0.001)。

2.2 不同临床指标胶质瘤患者组织中LncRNA SNHG6表达水平

不同年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径和肿瘤数量的胶质瘤组织中LncRNA SNHG6相对表达量比较，差异无统计学意义(P>0.05)，不同WHO分级、KPS评分和术后复发的胶质瘤组织中LncRNA SNHG6相对表达量比较差异有统计学意义(P < 0.05)，见表 1。

2.3 胶质瘤患者组织中LncRNA SNHG6表达水平与预后的相关性

以胶质瘤患者组织中LncRNA SNHG6表达量的P25为界值，将患者分为低表达组(n=24)和高表达组(n=70)，Kaplan-Meier生存分析结果显示，随访结束时，低表达组存活11例，死亡13例，高表达组存活11例，死亡59例；低表达组患者中位生存时间40.2个月，累积生存率45.8%，高表达组患者中位生存时间19.0个月，累积生存率15.7%，Log-Rank检验差异有统计学意义(χ²=9.562，P=0.002)，见图 1。

2.4 影响胶质瘤患者预后的多因素分析

结果显示，WHO分级、KPS评分、术后复发和LncRNA SNHG6表达是影响胶质瘤患者预后的风险因素(P < 0.05)，见表 2。

3 讨论

胶质瘤作为中枢神经系统恶性程度及侵袭力均较强的肿瘤，近年来发病率呈升高趋势^[10]，由于该肿瘤很难用手术的方式彻底切除，治疗后极易复发，致使患者总体预后较差，病死率较高^[11]。目前，该肿瘤发生及进展机制尚未完全清楚，特别是与该肿瘤高恶性、高侵袭性及高复发相关机制或敏感基因仍在研究探索中。LncRNA作为一类没有编码蛋白能力的长链RNA，越来越多的研究表明^[12-13]，其在染色体修饰、转录及转录后水平处理、表观遗传调控、基因组防御等方面发挥重要作用。近年来，其在肿瘤恶性生物学行为中的作用越来越受到重视，不仅与肿瘤细胞恶性增殖有关^[14]，而且参与调控了细胞侵袭转移、化疗耐药、自噬等^[15]。SNHG6是一种定位于核仁内的含有472个核苷酸长度的LncRNA，在指导转录后修饰保证产生有效和准确的核糖体中发挥重要作用^[16]，随着研究的深入，其在恶性肿瘤发生、进展中的作用越来越受到重视。有研究指出^[17]，SNHG6在肝细胞癌中表达失调，与肿瘤进展密切相关。研究发现^[18]，SNHG6促进了结直肠癌进展。且与结直肠癌细胞细胞增殖、迁移及侵袭过程密切相关^[19]。本研究结果显示，胶质瘤组织中LncRNA SNHG6表达量高于正常脑组织，说明LncRNA SNHG6在胶质瘤组织中呈高表达。本研究结果显示，WHO分级Ⅲ、Ⅳ级、KPS评分 < 80分及术后复发的胶质瘤组织中LncRNA SNHG6表达量升高，说明LncRNA SNHG6可能与胶质瘤恶性程度及预后有关，提示LncRNA SNHG6表达量越高，则预示胶质瘤恶性程度越高、患者术后易复发且预后不佳。

Yan等^[19]指出，LncRNA SNHG6在前列腺癌中上调预示预后不良。陈青^[20]指出，SNHG6高表达的结直肠患者预后更差。Zhang等^[21]指出，LncRNA SNHG6高表达可作为食管鳞癌不良预后的潜在标志物。本研究生存分析结果显示，低表达组患者中位生存时间和累积生存率均高于高表达组，说明LncRNA SNHG6与胶质瘤患者预后有关，LncRNA SNHG6高表达则患者预后较差。本研究Cox比例风险回归模型结果显示，WHO分级、KPS评分、术后复发和LncRNA SNHG6表达是影响胶质瘤患者预后的风险因素，进一步说明LncRNA SNHG6高表达是胶质瘤患者预后的风险因素，可能是评估患者预后的潜在标志物。

综上所述，胶质瘤组织中LncRNA SNHG6表达量升高，且与胶质瘤恶性程度及不良预后有关，可作为患者预后评估的风险因素。但LncRNA SNHG6在胶质瘤发生、进展、侵袭转移中的具体作用机制尚待进一步开展研究以明确。