2019, Vol. 40
文章信息
- 巫晶晶, 黄鹏, 岳明, 汪春晖, 吴超, 邵建国, 薛红, 符祖强, 卓凌云, 喻荣彬, 张云.
- Wu Jingjing, Huang Peng, Yue Ming, Wang Chunhui, Wu Chao, Shao Jianguo, Xue Hong, Fu Zuqiang, Zhuo Lingyun, Yu Rongbin, Zhang Yun.
- TNFRSF11A和TNFRSF11B基因多态性与HCV感染转归的关系
- Association between TNFRSF11A and TNFRSF11B gene polymorphisms and the outcome of hepatitis C virus infection
- 中华流行病学杂志, 2019, 40(10): 1291-1295
- Chinese Journal of Epidemiology, 2019, 40(10): 1291-1295
- http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2019.10.022
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文章历史
收稿日期: 2018-11-09
2. 南京医科大学第一附属医院感染科 210029;
3. 东部战区疾病预防控制中心, 南京 210002;
4. 南京大学医学院附属鼓楼医院感染科 210008;
5. 南通大学附属南通市第三人民医院消化科 226001;
6. 南通大学附属南通市第三人民医院四病区 226001
2. Department of Infectious Diseases, The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China;
3. Eastern Theater Command Center for Disease Prevention and Control, Nanjing 210002, China;
4. Department of Infectious Diseases, Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing University Medical School, Nanjing 210008, China;
5. Department of Gastroenterology, The Third People's Hospital of Nantong Affiliated to Nantong University, Nantong 226001, China;
6. Fourth Ward, The Third People's Hospital of Nantong Affiliated to Nantong University, Nantong 226001, China
丙型肝炎（丙肝）病毒（HCV）感染是重要的全球公共卫生问题之一，据估计全球约有7 100万例HCV慢性感染者[1]。但是HCV感染及进展中的具体机制尚不清楚，目前研究发现这一过程除涉及病毒因素、环境因素外，不同个体之间遗传差异导致的不同细胞免疫应答反应在HCV感染过程中有着重要作用[2]。在参与病毒感染细胞免疫调节的分子中，肿瘤坏死因子超家族（tumor necrosis factor superfamily，TNFSF）/肿瘤坏死因子受体超家族（tumor necrosis factor receptor superfamily，TNFRSF）逐渐引起关注，两者相互作用参与的生理和病理过程在炎症免疫性疾病发生、发展过程中起着重要作用[3]。研究发现，HCV感染慢性化的机制可能同TNFSF/TNFRSF介导的异常信号传导有关，通过HCV核心蛋白与两种受体的结合，引起复杂的细胞凋亡及抗凋亡信号，导致感染慢性化[4-5]。TNFRSF的两个成员：TNFRSF11A位于18号染色体，编码核因子κB受体活化因子（receptor activator of NF-κB，RANK）；TNFRSF11B位于8号染色体，编码诱导受体骨保护素（osteoprotegerin，OPG）。RANK和OPG都是RANK配体（RANKL）的受体，三者形成的RANKL/RANK/OPG通路在细胞死亡和增殖、炎症和免疫中起重要作用[6]。本研究选取了TNFRSF11A基因的rs1805034位点和TNFRSF11B基因的rs2073617位点，探讨其基因多态性与HCV感染易感性及感染慢性化的关系。
对象与方法1.研究对象：2008－2016年从血液透析人群、吸毒人群和既往有偿献血人群中纳入2 729例研究对象，均为汉族，其中包括723例血液透析者（江苏省9家医院血液透析中心肾透析人群）、455例吸毒者（南京市公安局强制戒毒所吸毒人群）以及1 551例有偿献血者（江苏省镇江某地区6个自然行政村的既往有偿献血人群）。根据血清学检查结果对研究对象进行分组，其中抗-HCV阳性者作为HCV感染组（1 243例），抗-HCV阴性者作为对照组（1 486例）。HCV感染组根据HCV RNA浓度可进一步分组，RNA阴性作为自限清除组（494例），RNA阳性者作为持续感染组（749例）。所有分组结果均是基于6个月的随访所确定的。纳入研究的HCV感染病例均未经任何抗病毒药物治疗，且未联合感染其他类型肝炎病毒。
2.研究方法：
（1）流行病学调查：由经过专门培训的调查人员对调查对象进行问卷调查。针对有偿献血者，采用《江苏省某地区既往有偿献血人群丙肝状况调查表》；针对透析人群，采用《丙肝肾透析病例健康状况相关因素调查表》；针对吸毒人群，采用《药物滥用者丙肝感染相关因素调查表》。调查内容包括一般人口学资料和相应的环境暴露资料。本研究通过解放军南京军区军事医学研究所伦理委员会审查（2017012）。所有研究对象均签署知情同意书。
（2）血清学检测和基因DNA的提取：调查后由专业医护人员抽取各研究对象静脉血5 ml，EDTA抗凝，在24 h内分离血浆、白细胞和红细胞，分装1.5 ml冻存管，置-20 ℃冷冻贮存待检。取适量血浆用于检测HCV抗体、乙肝五项及肝功能生化指标。HCV抗体检测采用北京金豪制药股份有限公司ELISA国产第三代HCV抗体检测EIA-1试剂盒进行初筛，采用雅培公司Abbott HCV EIA3.0试剂盒进行复检。基因DNA的提取采用传统的酚-氯仿抽提法。所有操作步骤严格按照说明书进行。
（3）基因多态性位点筛选和基因分型：从NCBI、HapMap等数据库中寻找和确认TNFRSF家族基因单核苷酸多态性（SNP）位点，选取在汉族人群中的最小等位基因频率（MAF）＞5%的SNP，并结合国内外文献报道，最终选取了rs1805034和rs2073617两个位点。应用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术对位点进行基因分型。引物和探针由南京骥骜生物技术有限公司设计，引物和探针序列见表 1。
3.统计学分析：采用EpiData 3.10软件建立数据库，采用Stata 15.0软件进行相关统计学分析。对照组、自限清除组和持续感染组之间一般人口学特征比较采用χ2检验；拟合优度χ2检验用于计算对照组的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。根据4种遗传模型运用logistic回归分析两个位点与HCV感染转归的关系。分层分析用于控制混杂因素对分析结果的影响；采用Q检验确定亚组之间的异质性。以P＜0.05为差异有统计学意义。
结果1.一般特征：对照组、自限清除组和持续感染组年龄和性别构成差异无统计学意义，3组AST、ALT水平、不同感染途径和基因型差异有统计学意义。位点rs1805034和rs2073617的基因型频率在对照组中符合Hardy- Weinberg平衡定律（P值分别为0.587和0.185），提示对照组人群具有代表性。见表 2。
2.候选基因位点与HCV感染转归结局的关系：在对照组和HCV感染组（包括自限清除组和持续感染组）之间比较候选等位基因频率，进行HCV遗传易感性分析。结果显示rs1805034和rs2073617与HCV易感性的关联均无统计学意义。在自限清除组和持续感染组之间进行比较，分析宿主感染HCV后对病毒的清除能力。共显性模型结果显示，与携带TNFRSF11B rs2073617 TT基因型的个体相比，携带CC基因的个体易发生HCV感染慢性化（OR＝1.517，95%CI：1.055~2.181，P＝0.024）。隐性模型结果显示，与携带rs2073617 TT或TC基因型的个体相比，携带CC基因的个体易发生HCV感染慢性化（OR＝1.435，95%CI：1.033~1.996，P＝0.032）；相加模型显示，随着携带C等位基因个数的增加，个体发生HCV感染慢性化的风险亦可增加（OR＝1.204，95%CI：1.013~1.431，P＝0.035）。未发现TNFRSF11A rs1805034与HCV感染慢性化存在关联。见表 3。
3. TNFRSF11B基因rs2073617位点多态性与HCV感染慢性化关联分层分析：分别以年龄、性别、ALT、AST、感染途径和HCV基因型作为分层因素，对rs2073617位点的基因型与HCV感染慢性化的关联进行分层分析，采用上一阶段分析中关联较明显的隐性模型进行关联性分析，结果见表 4。携带rs2073617位点CC基因型的年龄≥50岁者发生HCV感染慢性化的风险增加（OR＝1.540，95%CI：1.018~2.328，P＝0.041）；携带rs2073617位点CC基因型的男性发生HCV感染慢性化的风险增加（OR＝1.889，95%CI：1.075~3.318，P＝0.027）；在HCV非1b基因型人群中，携带rs2073617位点CC基因型的个体发生HCV感染慢性化的风险亦增加（OR＝3.808，95%CI：1.291~11.237，P＝0.015）。异质性检验结果显示各组之间均不存在显著异质性（P＞0.05）。
丙肝作为感染慢性化程度较高的感染性疾病，研究TNFRSF11A、TNFRSF11B基因多态性与HCV感染及转归的关系有助于更好地阐明HCV感染遗传学的生物学机制。本研究发现携带TNFRSF11B rs2073617 C等位基因的病例更易发生感染慢性化。
研究发现，TNFRSF11A/TNFSF11/TNFRSF11B通路的表达和分泌可以调控免疫细胞的生长、分化，在免疫过程中发挥着重要作用，例如TNFRSF11A/TNFSF11/TNFRSF11B系统可以调控TNFRSF11A的表达水平，进而影响体内淋巴结的形成、T、B细胞的生长成熟过程和激活以及树突状细胞的生存、凋亡[7]。因此，我们推测，当HCV侵入机体后，TNFRSF11A/TNFSF11/TNFRSF11B系统参与重要的免疫调节，进而影响HCV感染转归的结局。
位于8号染色体上的TNFRSF11B基因，全长29 kb，是包含5个外显子的单拷贝基因[8]。目前研究已经发现TNFRSF11B基因SNPs与炎症性疾病的发展密切相关[9-11]。rs2073617位点位于TNFRSF11B基因启动子区域，既往的研究表明，rs2073617位点的SNP与炎症性肠病和类风湿性关节炎等炎症相关疾病有关[6, 12]。本研究结果显示，TNFRSF11B基因rs2073617位点突变基因型C是HCV慢性感染的危险基因型，其基因多态性可能在HCV感染的进展中起重要作用。在分层分析中，我们发现携带rs2073617位点突变基因型的≥50岁、男性和HCV非1b型人群更易形成HCV的慢性感染。进一步通过生物信息学预测发现，rs2073617的RegulomeDB评分为1d，表明该位点可以影响表达数量性状基因座（expression Quantitative Trait Loci，eQTL）、转录因子结合、结合模体和脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease，DNase）活性峰值（http://www.regulomedb.org/results）。这些结果为进一步阐明rs2073617位点潜在的功能机制提供了一定的帮助。rs2073617可能通过影响TNFRSF11B基因的转录和表达功能，从而影响宿主免疫功能，最终影响HCV感染慢性化结局。
TNFRSF11A基因表达产物是内在造血细胞表面受体，可以刺激NF-κB受体激活，对T细胞和树突细胞有重要的调控作用，同时也可促进淋巴结发展[13]。本研究中调整年龄、性别和感染途径后，未发现rs1805034与HCV感染转归结局有统计学关联。
本研究存在局限性。因为选取了既往有偿献血、吸毒和肾透析3种高危人群作为研究对象，使研究结果缺乏代表性。其次，本研究仅研究了两个SNP位点，需要开展更多的关联性和功能性研究来证明这一结论。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
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