中华流行病学杂志  2019, Vol. 40 Issue (5): 580-584   PDF    
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2019.05.017
中华医学会主办。
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曹志强, 杨文敏, 朱秋映, 蓝光华, 沈智勇, 梁淑家, 李剑军, 陈欢欢, 冯毅, 何翔, 廖玲洁, 邢辉, 阮玉华, 邵一鸣.
Cao Zhiqiang, Yang Wenmin, Zhu Qiuying, Lan Guanghua, Shen Zhiyong, Liang Shujia, Li Jianjun, Chen Huanhuan, Feng Yi, He Xiang, Liao Lingjie, Xing Hui, Ruan Yuhua, Shao Yiming.
柳州市1998－2012年新发现HIV基因亚型变化及HIV感染者首次CD4+T淋巴细胞计数比较
HIV genetic subtypes and comparison of the first CD4+ T cell counts in newly diagnosed HIV infected patients in Liuzhou, 1998-2012
中华流行病学杂志, 2019, 40(5): 580-584
Chinese Journal of Epidemiology, 2019, 40(5): 580-584
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2019.05.017

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收稿日期: 2018-11-14
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曹志强, 杨文敏, 朱秋映, 蓝光华, 沈智勇, 梁淑家, 李剑军, 陈欢欢, 冯毅, 何翔, 廖玲洁, 邢辉, 阮玉华, 邵一鸣. 柳州市1998－2012年新发现HIV基因亚型变化及HIV感染者首次CD4+T淋巴细胞计数比较[J]. 中华流行病学杂志, 2019, 40(5): 580-584
Cao Zhiqiang, Yang Wenmin, Zhu Qiuying, Lan Guanghua, Shen Zhiyong, Liang Shujia, Li Jianjun, Chen Huanhuan, Feng Yi, He Xiang, Liao Lingjie, Xing Hui, Ruan Yuhua, Shao Yiming. HIV genetic subtypes and comparison of the first CD4+ T cell counts in newly diagnosed HIV infected patients in Liuzhou, 1998-2012[J]. Chinese Journal of Epidemiology, 2019, 40(5): 580-584.
柳州市1998－2012年新发现HIV基因亚型变化及HIV感染者首次CD4+T淋巴细胞计数比较
曹志强1 , 杨文敏2 , 朱秋映2 , 蓝光华2 , 沈智勇2 , 梁淑家2 , 李剑军2 , 陈欢欢2 , 冯毅1 , 何翔3 , 廖玲洁1 , 邢辉1 , 阮玉华1 , 邵一鸣4     
1. 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心, 北京 102206;
 2. 广西壮族自治区疾病预防控制中心, 南宁 530028;
 3. 广东省公共卫生研究院, 广州 511430;
 4. 北京大学医学部 100191
收稿日期: 2018-11-14
基金项目: 广西医药卫生自筹经费计划课题（Z20170126）；广西壮族自治区科学技术厅（桂科AB16380213）；国家自然科学基金（81460510，81360442）；广西八桂学者艾滋病防控关键技术岗位专项
曹志强和杨文敏对本文有同等贡献
通信作者: 阮玉华, Email:ruanyuhua92@163.com; 邵一鸣, Email:yshao@bjmu.edu.cn
摘要: 目的 分析柳州市1998－2012年新发现HIV基因亚型变化，比较HIV感染者首次CD4+T淋巴细胞计数（CD4），为艾滋病防治提供参考依据。方法 选取我国艾滋病综合防治信息系统中1998－2012年柳州市新发现HIV感染者，对其血浆进行RNA提取、扩增、测序和分型。采用Coharan-Armitage趋势检验法分析HIV基因亚型变化的趋势，采用Wilcoxon秩和检验法分析比较HIV感染者的首次CD4。结果 研究对象共有1 877例HIV感染者。1998－2012年，CRF01_AE、CRF01_AE（Cluster 1）和CRF07_BC亚型构成比分别从78.4%（76/97）上升至91.5%（1 441/1 574）、63.9%（62/97）上升至74.0%（1 164/1 574）和17.5%（17/97）下降至4.6%（72/1 574），趋势性检验差异均有统计学意义（Z=4.632，P < 0.001；Z=2.455，P=0.014；Z=-5.943，P < 0.001）。CRF01_AE（Cluster 1）、CRF01_AE（Cluster 2）、CRF07_BC和CRF08_BC亚型HIV感染者首次CD4的中位数及四分位数间距分别是230（83~375）、215（48~351）、365（254~503）和334（206~479）个/μl。CRF01_AE（Cluster 1）和CRF01_AE（Cluster 2）亚型HIV感染者的首次CD4均＜CRF07_BC亚型（Z=-4.795，P < 0.001；Z=-4.238，P < 0.001）。结论 1998－2012年柳州市新发现HIV感染者以CRF01_AE亚型为主并呈上升趋势，其首次CD4较低，且新发现CRF01_AE亚簇的种类在增加，其亚簇构成比存在变化趋势。
关键词: HIV-1     基因亚型     CD4+T淋巴细胞计数    
HIV genetic subtypes and comparison of the first CD4+ T cell counts in newly diagnosed HIV infected patients in Liuzhou, 1998-2012
Cao Zhiqiang1 , Yang Wenmin2 , Zhu Qiuying2 , Lan Guanghua2 , Shen Zhiyong2 , Liang Shujia2 , Li Jianjun2 , Chen Huanhuan2 , Feng Yi1 , He Xiang3 , Liao Lingjie1 , Xing Hui1 , Ruan Yuhua1 , Shao Yiming4     
1. National Center for ADIS/STD Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China;
 2. Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Control and Prevention, Nanning 530028, China;
 3. Guangdong Provincial Institute of Public Health, Guangzhou 511430, China;
 4. Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China
Cao Zhiqiang and Yang Wenmin contributed equally to the article
Corresponding author: Ruan Yuhua, Email:ruanyuhua92@163.com; Shao Yiming, Email:yshao@bjmu.edu.cn
Fund program: Guangxi Medical and Health Topics of Self-financing Project (Z20170126); Guangxi Science and Technology Bureau (Guike AB16380213); National Natural Science Foundation of China (81460510, 81360442); Guangxi Bagui Honor Scholarship
Abstract: Objective To analyze the change trend of HIV genetic subtypes and compare the first CD4+T cell counts of newly diagnosed HIV infected patients in Liuzhou from 1998 to 2012, and provide a reference for AIDS prevention and control. Methods Newly diagnosed HIV-infected patients from 1998 to 2012 in Liuzhou were selected through national HIV/ADIS comprehensive response information management system. Their plasma samples were used for RNA gene extraction, amplification, sequencing and genotyping. Coharan-Armitage trend test was used to analyze the ratio trend of genetic subtypes and phylogenetic clusters of HIV and Wilcoxon Rank Sum Test was used to compare the first CD4+T cell counts (CD4) of the different subtype HIV infected patients. Results A total of 1 877 newly diagnosed HIV infected patients were included in the study. From 1998 to 2012, the proportions of CRF01_AE and CRF01_AE (Cluster 1) increased from 78.4% (76/97) to 91.5% (1 441/1 574), from 63.9% (62/97) to 74.0% (1 164/1 574), and the proportion of CRF07_BC decreased from 17.5% (17/97) to 4.6% (72/1 574), respectively (Z=4.632, P < 0.001; Z=2.455, P=0.014; Z=-5.943, P < 0.001). The median and interquartile range of the first CD4 of the patients infected with subtype CRF01_AE (Cluster 1), CRF01_AE (Cluster 2), CRF07_BC and CRF08_BC were 230 (83-375), 215 (48-351), 365 (254-503) and 334 (206-479) cell/μl, respectively. The first CD4 levels of the patients infected with subtype CRF01_AE (Cluster 1) or CRF01_AE (Cluster 2) were significantly lower than those of CRF07_BC (Z=-4.795, P < 0.001; Z=-4.238, P < 0.001). Conclusion The genetic subtypes of HIV were mainly CRF01_AE in newly diagnosed HIV-infected patients and this subtype proportion was in increase and the first CD4 levels of the patients were low in Liuzhou during 1998 to 2012.
Key words: HIV-1     Genetic subtypes     CD4+T cell counts    

广西壮族自治区（广西）于1996年在吸毒人群中发现首例广西籍HIV感染者[1-2]。相关研究表明，广西早期发现的HIV流行株有A、B’、C、E、CRF01_ AE、CRF07_BC和CRF08_BC亚型，主要通过注射吸毒和有偿献血在各地传播[2-4]。自2005年开始，HIV疫情呈现从静脉吸毒人群向性传播人群快速扩散的态势[5]，2006年异性性传播已成为当地HIV主要传播途径[6]。揭示HIV亚型亚簇的变化趋势对于了解传播途径的改变和疫情防控有重要意义，国内少有基因亚型亚簇变化趋势的报道。此外，研究表明，CRF01_AE亚型与其他亚型相比，其HIV感染者CD4+T淋巴细胞计数（CD4）下降更快，疾病进展更快[7-8]。HIV感染者抗病毒治疗前，如果基线CD4水平较低，不利于抗病毒治疗后CD4的恢复和人体免疫系统重建[9]。目前少有不同亚型亚簇HIV感染者确诊后首次CD4比较的相关研究报道。柳州市是广西艾滋病流行最严重地区之一，本研究分析1998-2012年柳州市新发现HIV基因亚型亚簇变化情况并比较其HIV感染者首次CD4细胞计数，为艾滋病防控工作和相关科研提供参考依据。

对象与方法

1.研究对象：选取柳州市艾滋病综合防治信息系统1998-2012年全部新发现HIV感染者。纳入标准：①HIV感染者的社会人口学信息完整准确；②HIV感染者的基因亚型检测结果完整准确。排除标准：母婴传播途径的HIV感染者。本研究通过中国CDC性病艾滋病预防控制中心伦理学委员会的审批（批号：X140617334）。

2.研究方法和内容：本研究为多时间点的横断面研究，调查变量包括年龄、性别、文化程度、职业、婚姻状况、民族、传播途径、HIV发现报告年份、随访次数、随访日期、CD4水平、CD4检测日期、是否进行抗病毒治疗、开始抗病毒治疗日期等。

（1）样品采集：2008-2012年研究对象的血样是在当时确诊时获得的，来自免疫印迹试验确认后的剩余血样；1998-2007年研究对象的血样是2008- 2012年随访期间获得的。样品-80 ℃冻存备用。

（2）基因扩增、测序和分型：提取病毒RNA，采用巢式PCR扩增gag基因片段（p17、p24，HBX2：781~1861）和env基因片段（V3、V4，HBX2：7002~7541），所用引物和条件参见已发表文献[10-11]。序列测序后使用Gene Codes公司的Sequencher 4.9软件进行拼接，然后用Bioedit软件进行序列比对和清理。获得的gag和env基因序列与HIV-1国际参考株比对后，用Mega 6.0软件构建Neighbor-joining进化树。其中CRF01_AE亚簇的划分和判定参考已发表文献介绍的方法[12]，将我国流行的CRF01_AE划分为7个亚簇（Cluster 1~Cluster 7）。亚型判别主要以gag基因为主，env基因为辅。Bootstrap校验共计500次，当与标准株形成进化簇且校验值＞80%时确定为相应的亚型或亚簇。用Figtree 1.4.2软件展示进化树结果。

（3）首次CD4：从柳州市艾滋病综合防治信息系统疫情随访库中，选取每1例HIV感染者确证后、未进行抗病毒治疗、首次检测的CD4作为首次CD4[13-14]。

3.统计学分析：应用SAS 9.4软件分析。采用Coharan-Armitage趋势检验，分析不同基因亚型感染者人数占当年新发现人数的比例在1998-2006、2007-2010年和2011-2012年3个时间段变化的趋势。采用Wilcoxon秩和检验，将2011-2012年CRF01_AE（Cluster 1）、CRF01_AE（Cluster 2）和CRF08_BC亚型HIV感染者的首次CD4分别与CRF07_BC亚型HIV感染者的首次CD4进行两两比较，采用Bonferroni法对P值进行调整。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1.样品扩增及基因型判定结果：1998-2012年柳州市共报告2 114例HIV感染者，全部进行抽样，共获得2 114份样本。其中gag基因扩增成功且测序合格率为81.8%（1 730/2 114）（有效比对长度＞950 bp）。env基因扩增成功且测序合格率为72.3%（1 529/2 114）（有效比对长度＞530 bp）。判别亚型以gag基因为主、env基因为辅，共判别获得1 889个亚型。见图 1。

图 1 1998-2012年柳州市HIV-1 gag基因和env基因系统进化树
图选项

2.研究对象基本情况：将1 889例有基因序列的研究对象与2 114例全样本的社会人口学信息对比，差异无统计学意义。排除社会人口学信息和基因亚型信息不完整样本，最后纳入1 877例研究对象（88.79%，1 877/2 114）。

研究对象年龄为（47.2±15.7）岁。男性为71.4%（1 341/1 877），农民为60.7%（1 139/1 877），小学或初中文化程度为82.7%（1 552/1 877），已婚为61.5%（1 155/1 877），汉族为56.8%（1 066/1 877），异性性传播为86.9%（1 631/1 877）。见表 1。

表 1 1998-2012年柳州市新发现HIV感染者基本情况
表选项

3.新发现HIV感染者基因亚型亚簇变化：与1998-2006年相比，2007-2010、2011-2012年新发现HIV感染者确证血样中，依次新检出了CRF01_ AE亚型Cluster 3、Cluster 4、Cluster 5和Cluster 7共4种亚簇。经Coharan-Armitage趋势检验发现，在1998-2006、2007-2010和2011-2012年3个时间段，CRF01_AE、CRF01_AE（Cluster 1）和CRF07_BC亚型感染者数占各时间段新发现数的比例随时间分别从78.4%（76/97）上升至91.5%（1 441/1 574）、63.9%（62/97）上升至74.0%（1 164/1 574）和17.5%（17/97）下降至4.6%（72/1 574），趋势性检验结果显示，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表 2。

表 2 1998-2012年柳州市新发现感染者HIV亚型构成比的趋势性分析
表选项

4.主要HIV亚型感染者首次CD4比较：2011-2012年CRF01_AE（Cluster 1）、CRF01_AE（Cluster 2）、CRF07_BC和CRF08_BC的4种亚型HIV感染者共1 380例，其中有首次CD4值共1 031例，将两者的社会人口学信息进行比较，差异无统计学意义，提示有首次CD4值的研究对象是全样本的无偏代表。首次CD4的中位数及四分位数间距分别是230（83~375）、215（48~351）、365（254~503）和334（206~479）个/μl。采用Wilcoxon秩和检验对4种基因型感染者的首次CD4进行两两比较，采用Bonferroni法调整P值。CRF01_AE（Cluster 1）和CRF01_AE（Cluster 2）亚型HIV感染者的首次CD4均＜CRF07_BC亚型，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；CRF08_BC亚型感染者首次CD4与CRF07_ BC亚型相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 3。

表 3 2011-2012年柳州市不同HIV亚型感染者的首次CD4+T细胞计数（个/μl）比较
表选项
讨论

本研究发现，柳州市1998-2006、2007-2010和2011-2012年3个阶段新发现HIV基因亚型以CRF01_AE为主，并呈上升趋势，成为该地区主要的HIV流行株。该HIV亚型在广西多见于异性性传播人群[6]，提示CRF01_AE亚型的HIV毒株通过异性性传播途径迅速扩散，成为当地构成比最大的流行株。CRF07_BC亚型的HIV感染者构成比呈下降趋势，该HIV亚型在当地主要是注射吸毒传播途径[2-3]，其下降趋势可能与政府打击毒品交易有关，也可能与该重组株复制能力较低有关[15]。本研究还发现，柳州市1998-2012年的A、B和B’亚型构成比低，CRF01_AE和CRF07_BC亚型构成比高；CRF01_AE亚簇的种类在增加，2007-2010、2011-2012年新发现HIV感染者确证血样中，新检出了CRF01_AE亚型的Cluster 3、Cluster 4、Cluster 5和Cluster 7共4种亚簇。其中，Cluster 7是第1次在广西2011-2012年新发现HIV感染者确证血样本中检出，未见其他文献报道。对2011-2012年不同HIV基因亚型亚簇的HIV感染者首次CD4进行两两比较，CRF01_AE（Cluster 1）亚簇感染者和CRF01_AE（Cluster 2）亚簇感染者首次CD4均低于CRF07_BC亚型感染者。CRF01_AE亚型含有较高比例的X4趋化因子受体，可导致感染者CD4快速下降[7]，这可能是导致该亚型HIV感染者首次CD4较低的原因。CRF01_AE亚型新发现HIV感染者首次CD4较低，这会直接影响其抗病毒治疗前基线CD4，较低的基线CD4不利于HIV感染者接受抗病毒治疗后CD4恢复和免疫水平重建[9]。本研究选取2011-2012年新发现HIV基因亚型作为分析亚组，避免不同报告年份的HIV确诊与首次CD4检测时间间隔分布不平衡造成混杂偏倚。

研究对象的HIV基因序列和首次CD4均存在缺失数据，但本研究的样本量较大，样本主要来自免疫印迹试验确认后的剩余血样，抽样代表性较好，抽样偏倚较小。此外，HIV基因序列的缺失比例很低，各亚型的HIV感染者首次CD4的缺失比例接近，而且有基因序列和首次CD4的研究对象与全样本人群的社会人口学特征的差异无统计学意义，故可视为随机缺失，缺失不会对研究结果产生很大影响。

综上所述，1998-2012年柳州市新发现HIV感染者以CRF01_AE亚型为主并呈上升趋势，其首次CD4较低，且新发现CRF01_AE亚簇的种类在增加，其亚簇构成比存在变化趋势，为今后该地区艾滋病防治工作和相关研究提供参考依据。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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