中华流行病学杂志  2019, Vol. 40 Issue (1): 89-92   PDF    
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2019.01.018
中华医学会主办。
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薛秀娟, 闫江舟, 程栋, 刘春华, 刘佳, 刘铮, 田随安, 孙定勇, 张伯伟, 王哲.
Xue Xiujuan, Yan Jiangzhou, Cheng Dong, Liu Chunhua, Liu Jia, Liu Zheng, Tian Sui'an, Sun Dingyong, Zhang Bowei, Wang Zhe.
河南省2011-2016年HIV感染长期不进展者人类白细胞抗原基因多态性分析
Human leukocyte antigen polymorphism of HIV infected persons without disease progress for long-term in Henan province, 2011-2016
中华流行病学杂志, 2019, 40(1): 89-92
Chinese Journal of Epidemiology, 2019, 40(1): 89-92
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2019.01.018

文章历史

收稿日期: 2018-07-19
河南省2011-2016年HIV感染长期不进展者人类白细胞抗原基因多态性分析
薛秀娟1 , 闫江舟1 , 程栋2 , 刘春华1 , 刘佳1 , 刘铮3 , 田随安1 , 孙定勇1 , 张伯伟3 , 王哲1     
1. 河南省疾病预防控制中心性病艾滋病防治研究所, 郑州 450016;
2. 新乡市疾病预防控制中心 453000;
3. 河南省红十字血液中心, 郑州 450016
摘要: 目的 分析河南省HIV感染长期不进展者(LTNP)病程进展及人类白细胞抗原(HLA)基因多态性特征。方法 采用回顾性研究,对河南省2011-2016年检测及随访信息完整的48例LTNP进行分析,探讨随访期间CD4+T淋巴细胞计数(CD4)、病毒载量(VL)的变化情况。采用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针技术(PCR-SSOP)对LTNP及健康对照的HLA-A、HLA-B和HLA-DRB1基因位点多态性进行分析。结果 2011-2016年48例LTNP 6次随访检测发现,CD4的四分位数从601.00(488.50~708.72)个/μl降低至494.00(367.00~672.00)个/μl,差异有统计学意义(P < 0.05)。log10VL的四分位数从3.40(2.87~3.97)上升到3.48(2.60~4.37),差异无统计学意义(P>0.05)。HLA基因位点多态性分析显示,HLA-B*13:02、HLA-B*40:06位点多分布在LTNP中(P < 0.05),而HLA-B*46:01、HLA-DRB1*09:01在健康对照中常见(P < 0.05)。结论 河南省LTNP CD4有逐年下降的趋势,HLA-B*13:02、HLA-B*40:06等位基因位点可能与延缓本地区LTNP疾病进程有关。
关键词: 艾滋病病毒     长期不进展者     人类白细胞抗原     基因多态性    
Human leukocyte antigen polymorphism of HIV infected persons without disease progress for long-term in Henan province, 2011-2016
Xue Xiujuan1 , Yan Jiangzhou1 , Cheng Dong2 , Liu Chunhua1 , Liu Jia1 , Liu Zheng3 , Tian Sui'an1 , Sun Dingyong1 , Zhang Bowei3 , Wang Zhe1     
1. Department of AIDS/STD Control and Prevention, Henan Provincial Center for Disease Control and Prevention, Zhengzhou 450016, China;
2. Xinxiang Prefecture Center for Disease Control and Prevention, Xinxiang 453000, China;
3. Henan Red Cross Blood Center, Zhengzhou 450016, China
Fund program: Henan Province Basic and Frontier Technology Research Project (162300410123); Henan Medical Science and Technology Research Program (201602311); National Science and Technology Major Project (2018ZX10715009-003-002, 2017ZX10201101-001-010)
Abstract: Objective To understand the disease progression and human leukocyte antigen (HLA) gene polymorphism of HIV-infected persons without disease progress for long term, also known as long-term non-progressors (LTNPs), in Henan province. Methods A retrospective study was conducted in 48 LTNPs with complete detection and follow-up information during 2011-2016 in Henan. Changes of CD4+T cells counts (CD4) and viral load (VL) during follow-up period were discussed. Polymerase chain reaction-sequence-specific oligonucleotide probe (PCR-SSOP) was used for the analyses of HLA-A, HLA-B and HLA-DRB1 alleles between LTNPs and healthy controls. Results From 2011 to 2016, forty-eight LTNPs showed a decrease of the quartile (P25-P75) of CD4 from 601.00 (488.50-708.72)/μl to 494.00 (367.00-672.00)/μl, and the difference was significant (P < 0.05). The increase of the quartile (P25-P75) of log10VL from 3.40 (2.87-3.97) to 3.48 (2.60-4.37), but the difference was not significant (P>0.05). HLA polymorphism analysis revealed that HLA-B*13:02 and HLA-B*40:06 were more common in LTNPs (P < 0.05), while HLA-B*46:01 and HLA-DRB1*09:01 were more common in healthy controls (P < 0.05). Conclusions The CD4 of LTNPs in Henan showed a downward trend year by year. HLA-B*13:02 and B*40:06 might be associated with delayed disease progression for HIV infected persons in Henan.
Key words: HIV     Long-term non-progressor     Human leukocyte antigen     Genetic polymorphism    

近年来,河南省一部分经既往采供血途径感染HIV的长期不进展者(long-term nonprogressors,LTNP)不断引起关注[1],开展该人群的相关研究有助于了解艾滋病疾病进程与进展特征,为有效制定艾滋病预防控制策略提供依据。本研究在前期研究基础上[2-3],通过连续的跟踪随访,针对既往建立的HIV感染LTNP队列进行了6年的随访检测监测,以期进一步发现本地区LTNP的病程进展特征,同时采用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针技术(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probe,PCR-SSOP)从遗传学方向对该人群及健康对照的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)进行检测,以探讨河南LTNP疾病进程与HLA基因多态性的相关性。

对象与方法

1.研究对象:①LTNP:基于既往建立的LTNP队列,按照感染时间>10年、未接受抗病毒治疗、免疫状况较好、临床未出现AIDS典型症状为纳入标准进行筛选。以其中2011-2016年检测及随访信息完整的48例为研究对象,自2011年2月开始每年随访检测1次,连续随访6年。②健康对照:以49例经输血前梅毒、HIV、HBV、HCV 4项指标检测结果阴性的无偿献血者为健康对照。所有研究对象自愿接受调查并签署知情同意书。对有明显心理疾病或精神疾病影响研究对象进行排除。该研究经河南省CDC伦理委员会审核通过。

2. LTNP艾滋病相关指标检测:①CD4+T淋巴细胞计数(CD4)、病毒载量(viral load,VL):LTNP在2011-2016年,每次均被采集EDTA-K2抗凝全血10 ml,分离2 ml采用FACSCalibur流式细胞仪(美国BD公司)进行CD4检测。剩余标本于6 h内3 000 g离心10 min分离血浆后使用NucliSens® EasyQ病毒载量试剂盒(法国生物梅里埃公司)进行VL检测。②HCV抗体:对2011年采集的血浆样本使用HCV抗体诊断试剂盒(中国厦门英科新创科技有限公司)进行基线水平HCV抗体检测。③HIV-DNA:对2016年样本使用Qiagen全自动核酸提取仪(德国Qiagen公司)提取人类基因组DNA,应用荧光实时定量PCR的方法(中国广州海力特公司)在ABI 7500仪器上按照试剂盒步骤进行HIV-DNA的定量检测。

3. HLA基因多态性检测:TBG全自动核酸提取仪提取2016年所采集LTNP及健康对照的DNA样本(美国TBG公司),利用Luminex平台(美国Thermo Fisher公司),采用PCR-SSOP对HLA-A、B、DRB1基因位点多态性进行分析。

4.统计学分析:应用SPSS 19.0软件分析,计算CD4和log10VL的MP25~P75)。采用Wilcoxon-Mann-Whitney非参数检验比较48例LTNP 6次随访期间CD4、log10VL的总体变化。χ2检验或者确切概率法比较LTNP和健康对照HLA-A、B、DRB1等位基因位点分布差异。以P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.基本情况:48例LTNP,66.67%(32/48)为既往采供血途径感染,男性32例,女性16例,均为汉族,年龄(49.29±11.24)岁,具体人口学特征见表 1。49例健康对照,男性30例,女性19例,均为汉族。年龄(36.58±9.16)岁。经统计学比较分析,两组对象在性别和年龄构成的差异无统计学意义(χ2=0.311,P=0.577;χ2=0.809,P=0.420)。

表 1 2011-2016年河南省HIV感染长期不进展者人口学特征

2. LTNP艾滋病相关指标分析:①CD4、log10VL的MP25~P75)结果:48例LTNP CD4、log10VL的MP25~P75)随访基线值分别为601.00(488.50~708.72)个/μl、3.40(2.87~3.97)拷贝/ml。2011-2016年6次随访期间二者总体变化进行统计学分析,CD4变化差异有统计学意义(χ2=13.699,P=0.018);log10VL差异无统计学意义(χ2=11.025,P=0.051)。见表 2。②HCV抗体检测情况:34例(70.83%)HCV抗体阳性,14例(29.17%)HCV抗体阴性。③HIV-DNA检测结果:荧光实时定量PCR方法检测LTNP体内HIV-DNA[MP25~P75)]总体水平为750.00(337.00~1 188.00)拷贝/ml,最大值和最小值分别为56.00和1 607.00拷贝/ml。

表 2 2011-2016年河南省HIV感染长期不进展者CD4+T淋巴细胞计数与病毒载量变化情况

3. HLA基因多态性检测结果:PCR-SSOP技术分析LTNP与健康对照的HLA-A、B、DRB1基因位点多态性发现,HLA-B位点B*13:02、B*40:06在LTNP中的分布高于健康对照(χ2=3.766,P=0.042;χ2=4.990,P=0.025),而B*46:01仅出现在健康对照中(χ2=4.333,P=0.037),HLA-DRB1*09:01在健康对照中常见(χ2=4.166,P=0.041)。见表 3

表 3 2011-2016年河南省HIV感染长期不进展者(LTNP)与健康对照HLA-A、B、DRB1基因位点多态性分析
讨论

对48例LTNP的调查研究发现,该人群多为≥40岁男性农民,感染途径以既往采供血为主。CD4和VL的随访6年的数据分析显示,该人群健康状况良好,体内病毒复制水平较稳定,但CD4有逐年下降的趋势,这与先前的调查结果相一致[2-4]。有研究认为,患者的HIV-DNA、VL与HIV感染途径和CD4密切相关,长期无症状的HIV感染者,外周单个核细胞中HIV-DNA和血浆VL的量比较稳定,如此两项指标升高则提示疾病快速进展[5]。本研究进行了HIV-DNA水平的测定,发现研究对象在VL稳定的同时,机体HIV-DNA也处于较低水平。HCV与HIV均为RNA病毒,感染途径相似,因而存在相当数量的双重感染患者[6-7],本研究发现这些LTNP中HCV抗体阳性率为70.83%,在HIV和HCV双重感染的长期压力下,该人群机体状况仍保持良好,其机制有待研究,宿主体内两种病毒的进化及相互作用也未阐明[8]。部分LTNP会出现疾病进展,HCV对艾滋病病程的影响作用[9],HCV对艾滋病抗病毒治疗后免疫重建效果影响等[10],均需要长期的随访和进一步研究。

HLA-B的基因多样,由其介导的特异性免疫反应在抗HIV的过程中发挥着重要作用且与疾病进程密切相关[11-12]。本研究初步对LTNP与健康人群的HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1基因位点进行了分析,发现HLA-B*13:02和HLA-B*40:06多出现在LTNP,而HLA-B*46:01和HLA-DRB1*09:01则多出现在健康对照中。LTNP HLA-B*13:02位点分布较多可能与该编码蛋白区域与HIV Gag 429~437位点结合,产生细胞毒性T淋巴细胞反应,使VL处于较低水平有关[13],从而可能延缓疾病进展;许铭炎等[14]对维吾尔族人群的HLA-B基因与HIV感染的易感性/抵抗性相关性研究发现,HLA-B*40基因可能与抵抗HIV感染有关,本研究发现LTNP的HLA-B*40:06基因频数较高,也与前述研究的结论相印证;HLA-DRB1*09:01在健康对照组中常见,是否提示以上位点对HIV感染不敏感,仍需进一步研究。

本研究的病例数量有限,使得遗传学研究中大样本研究信息获得受限。部分指标检测数量少,尚不能明确对疾病进程的影响程度,下一步将增加相关病例的数量并添加更多指标以进行更可靠的分析。遗传背景的差异可能是导致本研究与其他研究结论差异的原因,在下一步研究中应予以考虑。

综上所述,河南省LTNP CD4有逐年下降的趋势,HLA-B *13:02、HLA-B*40:06等位基因位点可能与延缓本地区LTNP疾病进程有关。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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