文章信息
- 薛秀娟, 闫江舟, 程栋, 刘春华, 刘佳, 刘铮, 田随安, 孙定勇, 张伯伟, 王哲.
- Xue Xiujuan, Yan Jiangzhou, Cheng Dong, Liu Chunhua, Liu Jia, Liu Zheng, Tian Sui'an, Sun Dingyong, Zhang Bowei, Wang Zhe.
- 河南省2011-2016年HIV感染长期不进展者人类白细胞抗原基因多态性分析
- Human leukocyte antigen polymorphism of HIV infected persons without disease progress for long-term in Henan province, 2011-2016
- 中华流行病学杂志, 2019, 40(1): 89-92
- Chinese Journal of Epidemiology, 2019, 40(1): 89-92
- http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2019.01.018
-
文章历史
收稿日期: 2018-07-19
2. 新乡市疾病预防控制中心 453000;
3. 河南省红十字血液中心, 郑州 450016
2. Xinxiang Prefecture Center for Disease Control and Prevention, Xinxiang 453000, China;
3. Henan Red Cross Blood Center, Zhengzhou 450016, China
近年来,河南省一部分经既往采供血途径感染HIV的长期不进展者(long-term nonprogressors,LTNP)不断引起关注[1],开展该人群的相关研究有助于了解艾滋病疾病进程与进展特征,为有效制定艾滋病预防控制策略提供依据。本研究在前期研究基础上[2-3],通过连续的跟踪随访,针对既往建立的HIV感染LTNP队列进行了6年的随访检测监测,以期进一步发现本地区LTNP的病程进展特征,同时采用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针技术(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probe,PCR-SSOP)从遗传学方向对该人群及健康对照的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)进行检测,以探讨河南LTNP疾病进程与HLA基因多态性的相关性。
对象与方法1.研究对象:①LTNP:基于既往建立的LTNP队列,按照感染时间>10年、未接受抗病毒治疗、免疫状况较好、临床未出现AIDS典型症状为纳入标准进行筛选。以其中2011-2016年检测及随访信息完整的48例为研究对象,自2011年2月开始每年随访检测1次,连续随访6年。②健康对照:以49例经输血前梅毒、HIV、HBV、HCV 4项指标检测结果阴性的无偿献血者为健康对照。所有研究对象自愿接受调查并签署知情同意书。对有明显心理疾病或精神疾病影响研究对象进行排除。该研究经河南省CDC伦理委员会审核通过。
2. LTNP艾滋病相关指标检测:①CD4+T淋巴细胞计数(CD4)、病毒载量(viral load,VL):LTNP在2011-2016年,每次均被采集EDTA-K2抗凝全血10 ml,分离2 ml采用FACSCalibur流式细胞仪(美国BD公司)进行CD4检测。剩余标本于6 h内3 000 g离心10 min分离血浆后使用NucliSens® EasyQ病毒载量试剂盒(法国生物梅里埃公司)进行VL检测。②HCV抗体:对2011年采集的血浆样本使用HCV抗体诊断试剂盒(中国厦门英科新创科技有限公司)进行基线水平HCV抗体检测。③HIV-DNA:对2016年样本使用Qiagen全自动核酸提取仪(德国Qiagen公司)提取人类基因组DNA,应用荧光实时定量PCR的方法(中国广州海力特公司)在ABI 7500仪器上按照试剂盒步骤进行HIV-DNA的定量检测。
3. HLA基因多态性检测:TBG全自动核酸提取仪提取2016年所采集LTNP及健康对照的DNA样本(美国TBG公司),利用Luminex平台(美国Thermo Fisher公司),采用PCR-SSOP对HLA-A、B、DRB1基因位点多态性进行分析。
4.统计学分析:应用SPSS 19.0软件分析,计算CD4和log10VL的M(P25~P75)。采用Wilcoxon-Mann-Whitney非参数检验比较48例LTNP 6次随访期间CD4、log10VL的总体变化。χ2检验或者确切概率法比较LTNP和健康对照HLA-A、B、DRB1等位基因位点分布差异。以P<0.05为差异有统计学意义。
结果1.基本情况:48例LTNP,66.67%(32/48)为既往采供血途径感染,男性32例,女性16例,均为汉族,年龄(49.29±11.24)岁,具体人口学特征见表 1。49例健康对照,男性30例,女性19例,均为汉族。年龄(36.58±9.16)岁。经统计学比较分析,两组对象在性别和年龄构成的差异无统计学意义(χ2=0.311,P=0.577;χ2=0.809,P=0.420)。
2. LTNP艾滋病相关指标分析:①CD4、log10VL的M(P25~P75)结果:48例LTNP CD4、log10VL的M(P25~P75)随访基线值分别为601.00(488.50~708.72)个/μl、3.40(2.87~3.97)拷贝/ml。2011-2016年6次随访期间二者总体变化进行统计学分析,CD4变化差异有统计学意义(χ2=13.699,P=0.018);log10VL差异无统计学意义(χ2=11.025,P=0.051)。见表 2。②HCV抗体检测情况:34例(70.83%)HCV抗体阳性,14例(29.17%)HCV抗体阴性。③HIV-DNA检测结果:荧光实时定量PCR方法检测LTNP体内HIV-DNA[M(P25~P75)]总体水平为750.00(337.00~1 188.00)拷贝/ml,最大值和最小值分别为56.00和1 607.00拷贝/ml。
3. HLA基因多态性检测结果:PCR-SSOP技术分析LTNP与健康对照的HLA-A、B、DRB1基因位点多态性发现,HLA-B位点B*13:02、B*40:06在LTNP中的分布高于健康对照(χ2=3.766,P=0.042;χ2=4.990,P=0.025),而B*46:01仅出现在健康对照中(χ2=4.333,P=0.037),HLA-DRB1*09:01在健康对照中常见(χ2=4.166,P=0.041)。见表 3。
讨论对48例LTNP的调查研究发现,该人群多为≥40岁男性农民,感染途径以既往采供血为主。CD4和VL的随访6年的数据分析显示,该人群健康状况良好,体内病毒复制水平较稳定,但CD4有逐年下降的趋势,这与先前的调查结果相一致[2-4]。有研究认为,患者的HIV-DNA、VL与HIV感染途径和CD4密切相关,长期无症状的HIV感染者,外周单个核细胞中HIV-DNA和血浆VL的量比较稳定,如此两项指标升高则提示疾病快速进展[5]。本研究进行了HIV-DNA水平的测定,发现研究对象在VL稳定的同时,机体HIV-DNA也处于较低水平。HCV与HIV均为RNA病毒,感染途径相似,因而存在相当数量的双重感染患者[6-7],本研究发现这些LTNP中HCV抗体阳性率为70.83%,在HIV和HCV双重感染的长期压力下,该人群机体状况仍保持良好,其机制有待研究,宿主体内两种病毒的进化及相互作用也未阐明[8]。部分LTNP会出现疾病进展,HCV对艾滋病病程的影响作用[9],HCV对艾滋病抗病毒治疗后免疫重建效果影响等[10],均需要长期的随访和进一步研究。
HLA-B的基因多样,由其介导的特异性免疫反应在抗HIV的过程中发挥着重要作用且与疾病进程密切相关[11-12]。本研究初步对LTNP与健康人群的HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1基因位点进行了分析,发现HLA-B*13:02和HLA-B*40:06多出现在LTNP,而HLA-B*46:01和HLA-DRB1*09:01则多出现在健康对照中。LTNP HLA-B*13:02位点分布较多可能与该编码蛋白区域与HIV Gag 429~437位点结合,产生细胞毒性T淋巴细胞反应,使VL处于较低水平有关[13],从而可能延缓疾病进展;许铭炎等[14]对维吾尔族人群的HLA-B基因与HIV感染的易感性/抵抗性相关性研究发现,HLA-B*40基因可能与抵抗HIV感染有关,本研究发现LTNP的HLA-B*40:06基因频数较高,也与前述研究的结论相印证;HLA-DRB1*09:01在健康对照组中常见,是否提示以上位点对HIV感染不敏感,仍需进一步研究。
本研究的病例数量有限,使得遗传学研究中大样本研究信息获得受限。部分指标检测数量少,尚不能明确对疾病进程的影响程度,下一步将增加相关病例的数量并添加更多指标以进行更可靠的分析。遗传背景的差异可能是导致本研究与其他研究结论差异的原因,在下一步研究中应予以考虑。
综上所述,河南省LTNP CD4有逐年下降的趋势,HLA-B *13:02、HLA-B*40:06等位基因位点可能与延缓本地区LTNP疾病进程有关。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
[1] |
刘佳, 樊盼英, 薛秀娟, 等. 河南省HIV感染长期不进展者及病毒控制者病例特征分析[J]. 中华流行病学杂志, 2016, 37(2): 227-231. Liu J, Fan PY, Xue XJ, et al. Characteristics of long-term non-progressors and HIV controllers among HIV-infections in Henan, China[J]. Chin J Epidemiol, 2016, 37(2): 227-231. DOI:10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2016.02.016 |
[2] |
薛秀娟, 孙国清, 刘春华, 等. 河南省HIV感染长期不进展者随访研究[J]. 中华预防医学杂志, 2014, 48(8): 684-687. Xue XJ, Sun GQ, Liu CH, et al. A follow-up study of HIV long-term non-progress populations in Henan province[J]. Chin J Prev Med, 2014, 48(8): 684-687. DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2014.08.007 |
[3] |
薛秀娟, 田随安, 朱谦, 等. 河南省26例HIV感染长期不进展者病程进展及耐药情况[J]. 中华预防医学杂志, 2016, 50(2): 143-147. Xue XJ, Tian SA, Zhu Q, et al. Detection and analysis of 26 cases of long-term non-progressors who infected HIV in Henan province[J]. Chin J Prev Med, 2016, 50(2): 143-147. DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2016.02.008 |
[4] |
薛秀娟, 刘佳, 田随安, 等. 河南省HIV新报告感染者和长期感染者的病程进展调查[J]. 现代预防医学, 2015, 42(8): 1495-1497. Xue XJ, Liu J, Tian SA, et al. Research of HIV progression between newly reported and chronically infected patients in Henan[J]. Mod Prev Med, 2015, 42(8): 1495-1497. |
[5] |
Avettand-Fènoël V, Hocqueloux L, Ghosn J, et al. Total HIV-1 DNA, a marker of viral reservoir dynamics with clinical implications[J]. Clin Microbiol Rev, 2016, 29(4): 859-880. DOI:10.1128/CMR.00015-16 |
[6] |
Kerkerian G, Alimohammadi A, Raycraft T, et al. Repeated spontaneous clearance of hepatitis C virus infection in the setting of long-term non-progression of HIV infection[J]. Infect Dis Rep, 2017, 9(3): 7142. DOI:10.4081/idr.2017.7142 |
[7] |
Rich KM, Bia J, Altice FL, et al. Integrated models of care for individuals with opioid use disorder:How do we prevent HIV and HCV?[J]. Curr HIV/AIDS Rep, 2018, 15(3): 266-275. DOI:10.1007/s11904-018-0396-x |
[8] |
Chen Y, Shen CL, Guha D, et al. Identification of the transcripts associated with spontaneous HCV clearance in individuals co-infected with HIV and HCV[J]. BMC Infect Dis, 2016, 16: 693. DOI:10.1186/s12879-016-2044-7 |
[9] |
Leszczyszyn-Pynka M, Ciejak P, Maciejewska K, et al. Hepatitis C coinfection adversely affects the life expectancy of people living with HIV in northwestern Poland[J]. Arch Med Sci, 2018, 14(3): 554-559. DOI:10.5114/aoms.2016.58744 |
[10] |
Gupta S, Malhotra B, Tiwari JK, et al. Cluster of differentiation 4+ T-cell counts and human immunodeficiency virus-1 viral load in patients coinfected with hepatitis B virus and hepatitis C virus[J]. J Lab Physicians, 2018, 10(2): 162-167. DOI:10.4103/JLP.JLP_37_17 |
[11] |
Kiepiela P, Leslie AJ, Honeyborne I, et al. Dominant influence of HLA-B in mediating the potential co-evolution of HIV and HLA[J]. Nature, 2004, 432(7018): 769-775. DOI:10.1038/nature03113 |
[12] |
Killian MS, Teque F, Sudhagoni R. Analysis of the CD8+ T cell anti-HIV activity in heterologous cell co-cultures reveals the benefit of multiple HLA class Ⅰ matches[J]. Immunogenetics, 2018, 70(2): 99-113. DOI:10.1007/s00251-017-1021-7 |
[13] |
Honeyborne I, Prendergast A, Pereyra F, et al. Control of human immunodeficiency virus type 1 is associated with HLA-B*13 and targeting of multiple gag-specific CD8+ T-cell epitopes[J]. J Virol, 2007, 81(7): 3667-3672. DOI:10.1128/JVI.02689-06 |
[14] |
许铭炎, 马军, 洪坤学, 等. 中国新疆维族人群HLA-B等位基因与HIV-1感染易感性或抗性[J]. 中国病毒学, 2005, 20(6): 594-599. Xu MY, Ma J, Hong KX, et al. HLA-B alleles associated with susceptibility or resistance to human immunodeficiency virus type 1 in a Xinjiang Uygur Population, China[J]. Virol Sin, 2005, 20(6): 594-599. |