云南省边境地区的艾滋病疫情较重且艾滋病流行时间长，近年来边境地区的大量外籍务工人员跨境往来频繁，给艾滋病防控工作带来挑战。云南省每年报告外籍HIV感染者近1 000例^[1]，德宏傣族景颇族自治州（德宏州）与缅甸接壤，红河哈尼族彝族自治州（红河州）与越南接壤，2个州累计报告外籍HIV感染者例数在云南省占比＞80.0%。本研究分析了云南省德宏州和红河州边境地区新报告HIV感染者HIV-1基因亚型分布特征，为加强云南省边境地区艾滋病防控工作提供参考依据。

对象与方法

1.研究对象：以云南省德宏州（芒市、瑞丽市和盈江县）和红河州（河口县）为研究现场，研究对象纳入标准为2015年11月1日至2016年10月31日年龄≥18岁的新报告HIV感染者，连续纳入233例。排除标准为不愿意参加本研究，或者未获得目的基因片段。研究对象经过知情同意后，由统一培训的当地CDC专业人员采集其血液标本，并接受面对面问卷调查，调查内容包括国籍、性别等人口学信息、感染途径等HIV感染相关信息。

2.基因分型检测：

（1）HIV-1 RNA提取：使用Qiagen公司QIAamp Viral RNA试剂盒，根据标准操作程序从140 μl中提取HIV-1 RNA。

（2）巢式PCR扩增pol和env基因区：使用TaKaRa公司One Step RNA PCR Kit（AMV）试剂盒，进行反转录及第1轮PCR扩增，反应体系25 μl。使用天根生化科技（北京）有限公司2×Taq PCR MasterMix试剂盒，进行第2轮PCR扩增反应，反应体系50 μl。引物序列和反应条件见参考文献[2]。

（3）PCR扩增产物电泳鉴定和测序：使用1%琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物条带，阳性标本送北京诺赛基因组研究中心有限公司纯化和测序。

3.序列分析：使用Gene Codes公司Sequencher 5.0软件进行序列拼接，Bioedit 7.0软件进行多序列比对和序列整理。用Mega 5.1软件构建Neighbor-joining（NJ）系统进化树，Bootstrap=1 000。利用HIV database的RIP 3.0分析工具进行重组分析（http://www.hiv.lanl.gov）。

4.统计学分析：应用SPSS 19.0软件进行统计学分析，率的比较采用χ²检验或Fisher精确概率法，检验水准α=0.05，双侧检验。

结果

1.人口学特征：233份标本进行检测后，获得pol区片段128条，env区片段160条，结合2个基因区的进化分析，146份标本获得基因亚型。146例研究对象中男性（67.1%，98/146）、年龄≤30岁（48.6%，71/146）、已婚（48.0%，70/146）、异性性接触感染（67.8%，99/146）比例较大，2个地区HIV感染者在国籍、性别、年龄、婚姻、感染途径等人口学特征的差异无统计学意义（P＞0.05）。

2. HIV-1基因分布特征：德宏州和红河州HIV-1基因亚型总体分布的差异有统计学意义（χ²=61.072，P＜0.001）。

（1）德宏州：HIV-1基因型种类复杂，有8种HIV-1基因亚型，以独特重组型（unique recombinant forms，URFs）为主（52.8%，57/108），是中国籍和缅甸籍的主要基因型，其中，中国籍的URFs占56.8%（21/37），缅甸籍的URFs占50.7%（36/71），详见表 1。中国籍有8种基因亚型，缅甸籍只有4种基因亚型。德宏州HIV- 1基因型在国籍（χ²=18.498，P=0.002）、性别（χ²=14.532，P=0.015）和感染途径（χ²=17.034，P=0.003）的差异有统计学意义。男性HIV感染者的基因亚型种类多于女性，且男性URFs比例高于女性。在HIV感染途径方面，同性性接触的感染例数少，仅比较了异性性接触和静脉注射吸毒的差异，异性性接触的基因型复杂，静脉注射吸毒的基因亚型只有URFs、C亚型和CRF01_AE。见表 1。

（2）红河州：有4种HIV-1基因亚型，以CRF01_AE为主（71.1%，27/38），其中越南籍的占81.0%（17/21），中国籍的占58.8%（10/17）。在感染途径上的差异无统计学意义（χ²=4.747，P=0.174），国籍上的差异有统计学意义（χ²=12.246，P=0.002）。越南籍的基因亚型以CRF01_AE为主（81.0%，17/21），中国籍的基因亚型以CRF01_AE（58.8%，10/17）和CRF08_BC（41.2%，7/17）为主，见表 1。

讨论

本研究发现，德宏州和红河州HIV感染者HIV-1基因型分布差异较大，德宏州以URFs为主（52.8%，57/108），有8种基因亚型，在国籍、性别和感染途径上的分布有差异；红河州以CRF01_AE为主（71.1%，27/38），有4种HIV-1基因亚型，种类相对较少，在国籍上的分布有差异，感染途径的分布差异无统计学意义。

1980年代末到1990年代初，德宏州注射吸毒人群主要流行的HIV-1亚型是泰国B亚型和印度C亚型^[3-5]。B亚型和C亚型的共同存在，产生了重组亚型，回顾性进化分析提示一些流行重组株（circulating recombinant forms，CRFs）就起源于这个时期^[6]，此外还产生大量的URFs^[7]，因此，中缅边境地区被认为是HIV-1基因重组的热点地区^[8-9]。本研究中，德宏州的URFs仍具有较高的比例（52.8%），中国籍URFs包括B/C 16例、CRF01_AE/B 2例、CRF01_AE/B/C 2例和CRF01_AE/C 1例，缅甸籍的URFs包括B/C 17例、CRF01_AE/B 3例、CRF01_AE/B/C 8例和CRF01_AE/C 8例。这与德宏州相邻的缅甸URFs的原因占比相似^[9]。造成德宏州仍有较高比例URFs的原因，一方面可能是长期流行导致的HIV-1基因库的复杂性，另一方面导致多重感染的高危因素可能持续存在。

本研究发现，德宏州的中国籍HIV-1基因亚型种类多于缅甸籍，检测到流行于深圳、广州市等地MSM人群的CRF55_01B亚型^[10-11]，原因是该基因亚型可能由国内其他地区输入。不同传播途径的HIV-1基因亚型分布也有差异，异性性传播的HIV感染者包括了HIV-1基因亚型的所有种类，说明了异性性传播的复杂性。

红河州的HIV-1基因亚型一般以CRF08_BC为主^[12]，但是，本研究发现，红河州的HIV-1基因亚型以CRF01_AE为主，越南籍CRF01_AE的比例达到81.0%，这与越南以CRF01_AE为主要流行株的研究结果相一致^[13]。但中国籍的感染者中，除CRF01_AE外，还有一定比例的CRF08_BC，这在一定程度上表明，红河州边境地区除受国内艾滋病疫情的影响外，也在受到外来疫情的影响。

本研究存在不足。纳入的HIV感染者样本偏少，分层分析受到样本数的限制。另外，有必要通过后续研究HIV感染者的社会网络和HIV-1基因亚型的关系，帮助发现更多的HIV感染者。

综上所述，云南省2个边境地区艾滋病流行受到了跨境外籍感染者的影响，新报告HIV感染者HIV-1基因亚型分布差异较大，应对中国籍和外国籍HIV感染者采取有针对性的防治措施。

志谢 本研究得到云南省德宏州CDC王继宝、瑞丽市CDC李洲林、红河州CDC张维义、河口县CDC朱志斌以及他们的同事和各项目点志愿者的支持和帮助

利益冲突 无