丙型肝炎（丙肝）是由HCV感染引起的一系列以肝脏疾病和肝外疾病为特征的慢性进展性疾病，在全球范围内感染者超过1.85亿人^[1]。不同的个体感染HCV的易感性以及清除病毒的能力受到了宿主因素和环境因素的影响^[2]。

核转录因子κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NF-κB）是一组核转录因子蛋白，通过和特定的核苷酸序列相结合，从而控制DNA的转录过程并调节免疫应答^[3]。机体感染HCV后，HCV激活NF-κB通路，广泛的影响了细胞因子的转录和表达，从而影响了机体对HCV的免疫能力，对HCV的结局产生了至关重要的影响^[4]。NF-κB家族NF-κB1和REL基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点和许多免疫相关疾病存在关联，其中NF-κB1上的rs72696119 GG基因型显著提升了溃疡性结肠炎的患病风险^[5]，而位于REL上的rs13031237和系统性红斑狼疮以及类风湿性关节炎等相关^[6-7]。NF-κB信号通路在HCV免疫应答方面具有重要作用，且NF-κB1和REL基因的变异对HCV感染、免疫及转归可能产生影响。然而目前在中国人群中，NF-κB基因多态性与HCV感染相关性的研究还未有报道。

丙肝通过危险血液暴露（包括不安全输血/献血行为）、危险性行为和母婴传播等^[8]。据估计全球范围内，吸毒人群的HCV患病率高达50%以上，并且合并较高的HIV感染^[9-10]。本研究选取了吸毒及血源性暴露人群的NF-κB1上的rs72696119和REL上的rs13031237位点，拟探索该高危人群感染丙肝的遗传因素及环境因素。

1.研究对象：2008年10月至2012年5月纳入的南京市公安局强制戒毒所吸毒人员，2015年10月至2016年5月纳入的江苏某地区既往不安全输血或有偿献血比例较高的自然行政村居民。江苏某地区自然行政村居民指的是自然村户籍居民，连续居住≥5年。将所有研究对象分为两组，对照组为HCV抗体阴性，HCV RNA阴性；病例组为HCV抗体阳性，HCV RNA阴性或阳性。研究对象具有以下任意一项即予以排除：①年龄 < 18岁或 > 80岁；②合并HBV或HIV感染；③患有自免疫性、酒精性、药物性肝脏疾病；④患有其他严重疾病（肿瘤、代谢异常等）；⑤入组前接受过抗-HCV药物治疗。所有的血清学结果基于12个月的随访，重复检测3次HCV抗体及HCV RNA。研究对象均签署知情同意书。

2.流行病学调查：采用结构化问卷，由统一培训的调查员对参与者进行问卷调查，收集人口学（年龄、性别、婚姻状况等）和环境暴露（感染途径、吸毒方式、吸毒时间、文化程度等）信息。质量控制贯穿整个调查之中，保证数据的完整性和准确性。参与者完成调查问卷后，抽取5 ml静脉血备用。

3. HCV抗体检测：HCV抗体用第三代ELISA检测。

4.位点筛选：从千人基因组数据库、NCBI dbSNP数据库、以及相关文献中进行NF-κB家族基因SNP位点筛选。筛选标准：①在中国汉族人群中最小基因频率（minor allele frequency，MAF） > 5%；②有相关文献报道。由此筛选出2个SNP位点，即REL基因的rs13031237和NF-κB1基因的rs72696119。

5.标本提取和基因分型：采用真空抗凝管采集空腹EDTA抗凝静脉血5 ml，4 000 r/min离心10 min，分离血浆、红细胞及白细胞；采用苯酚/氯仿抽提法提取DNA。应用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术对rs13031237和rs72696119位点进行基因分型。PCR反应体系总量为5 μl，经历40个循环。PCR反应后在ABI QuantStudio7荧光定量PCR仪上读取荧光信号，提取相关信息后以备进一步分析。rs13031237的引物序列：正向为5′-GCC TTT CCT TAC AAC TGA AAA CTT AAA-3′，反向为5′-GCT TCG AAA ACT CTG ACT GCA ATA A-3′。rs72696119的引物序列：正向为5′-GAA ACC TCC TCT TCC TGC CC-3′，反向为5′-GTC TGT CTG TAT GCT CTC TCG AC-3′。

6.统计分析：使用EpiData 3.10软件建立数据库，应用SPSS 20.0软件进行相关统计分析。对照组和病例组的年龄、性别和感染途径采用χ²检验，对ALT和AST采用Mann-Whitney U检验。对吸毒人群和高危血源性暴露人群感染丙肝的相关因素采用单因素和逐步logistic回归模型分析，并计算OR值及其95%CI，双侧检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

1.一般情况：共纳入1 679名研究对象，其中吸毒人群503人、血源性暴露人群1 176人，不同感染途径人群的平均年龄差异有统计学意义（吸毒人群：32.48岁，血源性暴露人群：62.64岁，P < 0.001）。按HCV暴露情况分为对照组与病例组，组间年龄、感染途径、ALT、AST水平差异有统计学意义（P < 0.001）（表 1）。

表 1 研究总人群的一般情况

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2.吸毒人群感染HCV相关环境因素分析：单因素logistic回归分析结果表明，性别、吸毒方式和吸毒时间是吸毒人群感染HCV的相关因素。将单因素分析有意义的变量纳入逐步回归后，女性（OR=0.408，95%CI：0.308~0.767）是HCV感染的保护因素，而静脉注射吸毒（OR=8.817，95%CI：5.577~13.937）以及吸毒时间 > 5.5年（OR=2.891，95%CI：1.824~4.583）则是危险因素（表 2）。

表 2 吸毒人群感染HCV逐步logistic回归分析

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3.既往血源性暴露人群感染HCV相关环境因素分析：单因素logistic回归分析结果显示，年龄、性别、文化程度以及BMI是既往血源性暴露人群感染HCV的相关因素。将单因素分析有意义的变量纳入逐步回归后，结果显示小学以上文化程度（OR=0.613，95%CI：0.429~0.876）是感染HCV的保护因素，而女性（OR=3.431，95%CI：2.360~4.988）则是危险因素（表 3）。

表 3 血源性暴露人群感染HCV逐步logistic回归分析

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4. NF-κB基因多态性与高危人群感染HCV的相关性：将rs13031237和rs72696119的基因型在对照组和病例组中的分布进行比较，采用多因素logistic回归分析，校正年龄、性别和感染途径，并采用相加、显性和隐性模型进行分析，结果表明携带rs72696119 GG基因型的个体更易感染HCV（OR=1.412，95%CI：1.035~1.927），且在相加和隐性模型中仍有统计学意义（P < 0.05），而rs13031237基因型与HCV易感性不相关（P > 0.05）。在总人群中的交互作用分析表明，rs72696119与HCV感染途径及性别之间不存在交互作用（表 4）。

表 4 rs13031237和rs72696119基因型在对照组、病例组中的分布

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本研究结果表明，与NF-κB1基因rs72696119 CC基因型携带者相比，GG基因型的个体感染HCV风险更高。rs72696119位点位于NF-κB1基因5′-非翻译区（untranslated regions，UTR）区域。5′-UTR始于基因转录起始位点，终于起始密码子AUG之前，位于编码区上游，不能翻译为蛋白质，但包含基因调控序列。5′-UTR可通过对前起始复合物的调控、闭环调控、铁蛋白调控等多种机制调控基因的表达^[11]。因此，位于5′-UTR区域的位点突变可能影响NF-κB1基因的表达调控，从而影响了NF-κB信号通路相关的免疫功能，继而与HCV易感性相关。

本研究还发现，在吸毒人群中，静脉注射吸毒方式和长时间吸毒是感染HCV的危险因素；而在高危血源性暴露人群中，小学以上文化程度是感染HCV的保护因素。HCV感染在吸毒人群中通常会在较短的时间内产生流行，尤其是静脉注射吸毒者中，HCV患病率高达50%~90%^{[9, 12]}，长时间吸毒也会带来更高的HCV暴露风险。此外，性别也是感染HCV的相关因素，本研究的吸毒人群中的女性人群不易感染HCV，既往研究也表明女性HCV患者更易发生病毒的自限清除^[13]，但高危血源性暴露人群中的女性反而更易感染HCV。提取该部分人群献血次数的数据发现，在高危血源性暴露人群（1 176人）中，仅有248人有献血次数的记录，献血次数为男性（6.31±10.91）次，女性（9.02±20.58）次，差异无统计学意义。推测高危血源性暴露人群中女性成为感染HCV的危险因素，可能与该部分人群中女性性别与献血次数正相关，HCV暴露风险更高，从而感染HCV风险更大。但由于该部分人群有献血次数记录的较少，结果差异无统计学意义。

综上所述，高危人群中的相关因素和NF-κB1基因rs72696119多态性与HCV感染易感性之间存在一定的关联。本研究结果有利于对高危人群进行针对性的预防和治疗，达到有效控制丙肝感染和传播的目的。