随着HIV检测覆盖面不断扩大，样本来源更加复杂，HIV抗体不确定检出率越来越多^[1]。这不仅给实验室检测和疫情管理带来困扰，而且也给受检者带来沉重的心理负担，甚至会延误治疗。产生HIV抗体不确定反应性条带大致可分为两大类：①特异性反应条带：主要与HIV感染有关，包括HIV感染早期（窗口期）、艾滋病终末期、病毒变异、机体免疫严重缺陷导致机体对HIV产生免疫逃逸等；②非特异性反应条带：主要与其他生物学因素有关，包括其他病毒或细菌感染、自身免疫性疾病、特殊生理状态、接种疫苗等^[2]。根据《全国艾滋病检测技术规范》（2015年修订版）建议对HIV抗体不确定者进行HIV-1核酸试验或2~4周后随访^[3]。如果HIV-1核酸试验结果阴性且2~4周后随访免疫印迹法（WB）条带无进展或更少，可推断该不确定结果可能是由非特异性反应引起的。国内外已有相关文献报道^[4-7]，感染人T淋巴细胞白血病病毒（human T-cell leukemia virus，HTLV）、梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP）、HCV、HBV以及体内抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）升高等因素有可能会引起HIV抗体不确定非特异性反应的产生。本研究对福建省2015-2016年各艾滋病确证实验室检出的HIV抗体不确定样本进行了相关生物学因素研究，旨在发现引起HIV抗体不确定结果非特异性反应的相关影响因素，为HIV鉴别诊断和防治策略提供参考依据。

1.研究对象：①HIV抗体不确定组：来源于2015-2016年福建省各艾滋病确证实验室，经WB确证为HIV抗体不确定样本，HIV核酸检测阴性，且经过2~4周随访WB条带无进展。排除HIV核酸检测阳性或经过2~4周随访WB条带有进展，最终判为HIV抗体阳性的不确定样本。②普通人群对照组：同期福建省经HIV抗体筛查检测为阴性的普通人群样本。排除HIV抗体筛查结果阳性或不确定的样本。③确证阴性对照组：为HIV抗体初筛阳性，但确证阴性的样本。排除HIV抗体确证阳性、不确定或经随访抗体转阳的样本。

2.研究方法：

（1）研究设计：采用病例对照研究设计，将HIV抗体不确定组和普通人群对照组按照性别、年龄进行成组匹配，以消除其可能引起的混杂因素的影响。为了进一步消除受检人群类型及构成可能对结果的影响，将HIV抗体不确定组和确证阴性对照组按照性别、年龄、受检人群类型及构成进行匹配。样本量估计根据相关文献[7]，TP等影响因素在不确定人群中估计暴露率为8.02%，在普通人群中估计暴露率为0.20%，估算病例组和对照组的最少样本量分别为68例和136例。病例组110例，对照组226例，符合本研究所需的样本量。

（2）实验室检测方法：HIV抗体确证试验：所有送检样本均使用HIV抗原抗体检测试剂（北京万泰生物药业股份有限公司）进行复检，复检试验有反应的样本，进行WB确证试验（MP生物医学亚太私人有限公司），按照全国艾滋病检测技术规范要求和试剂说明书操作。结果判断标准：①HIV抗体阳性诊断标准：检测出2条env带（gp160/gp41和gp120）及1条gag带（p17、p24、p55）或pol带（p31、p51、p66）；②HIV抗体阴性诊断标准：无HIV抗体特异条带；③HIV抗体不确定诊断标准：出现HIV抗体特异条带，但是不满足HIV抗体阳性诊断标准。HIV核酸检测：采用HIV-1核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法，中山大学达安基因股份有限公司），具体操作参照试剂盒说明书。

其他指标检测：采用ELISA法分别检测HBsAg（北京万泰生物药业有限公司）、抗-HCV抗体（北京万泰生物药业有限公司）、TP抗体（厦门英科新创科技有限公司）、ANA（美国宙斯科技公司）、HTLV抗体（北京万泰生物药业有限公司）、AFP（郑州安图生物工程股份有限公司）的含量。操作步骤和结果判断按照各试剂盒说明书。

3.统计学分析：应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，采用χ²检验和多因素非条件logistic回归分析引起HIV抗体不确定结果的非特异性反应的影响因素。检验水准α=0.05，双侧检验。

1.样本基本特征：共收集HIV抗体不确定样本210例，经HIV核酸检测为阴性且经过随访WB条带无进展者共110例，占52.38%，其中男性占51.82%（57/110），女性占48.18%（53/110），年龄（35.50±12.56）岁。样本主要来源于无偿献血者、孕产妇、其他就诊者、检测咨询者、术前检查和其他受检者，占全部样本来源的92.73%（102/110）。普通人群样本共226例，其中男性占51.77%（117/226），女性占48.23%（109/226），年龄（37.07±15.11）岁。对HIV抗体不确定组与普通人群对照组在年龄、性别构成进行均衡性检验，两组间均衡可比，差异无统计学意义（P > 0.05）。

2. HIV抗体不确定样本WB带型模式：110例HIV抗体不确定样本，共出现13种WB带型模式，最常见的是p24单条带占58.18%（64/110），其次是gp160单条带占17.27%（19/110），p17单条带占7.27%（8/110），其余10种带型呈散在分布，所占比例较小。见表 1。

表 1 HIV抗体不确定样本的WB带型模式分布情况

表选项

3.引起HIV抗体不确定的非特异性反应影响因素：HIV抗体不确定组中TP抗体阳性率为10.91%（12/110），高于普通人群对照组1.77%（4/226），两组差异有统计学意义（χ²=13.627，P < 0.001）；HIV抗体不确定组中AFP阳性率为18.18%（20/110），高于普通人群对照组0.44%（1/226），两组差异有统计学意义（χ²=39.736，P < 0.001）。而ANA、HBsAg、抗-HCV抗体、HTLV抗体在HIV抗体不确定组和普通人群对照组间差异无统计学意义（χ²值分别为1.087、0.086、0.967，Fisheri’s确切概率法，P值均 > 0.05）。见表 2。

表 2 引起HIV抗体不确定非特异性反应的单因素分析

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对各影响因素进行多因素非条件logistic回归分析，结果显示，TP抗体阳性人群引起HIV抗体不确定结果的非特异性反应的风险是TP抗体阴性人群的11.76倍，AFP阳性人群引起HIV抗体不确定非特异性反应的风险是AFP阴性人群的58.49倍。见表 3。

表 3 引起HIV抗体不确定结果的非特异性反应的多因素logistic回归分析

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分析HIV抗体不确定样本中不同带型与各影响因素的关系结果显示：HIV抗体不确定样本中TP抗体、AFP、ANA、抗-HCV抗体或HBsAg阳性检出率在不同带型样本分布中差异均无统计学意义。见表 4。

表 4 HIV抗体不确定样本中不同带型与各影响因素的关系

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进一步分析HIV抗体不确定样本中不同受检人群与各影响因素的关系，HIV抗体不确定样本中TP抗体、AFP、HBsAg阳性检出率在不同受检人群的差异有统计学意义（Fisheri’s确切概率法，P值均 < 0.05），其中来自其他就诊者的HIV抗体不确定样本TP抗体阳性检出率最高，达到28.00%（7/25）；孕产妇的HIV抗体不确定样本AFP阳性检出率最高，达到85.00%（17/20）。ANA、HCV和HTLV抗体阳性检出率在不同受检人群中差异无统计学意义（Fisheri’s确切概率法，P值均 > 0.05）。见表 5。

表 5 HIV抗体不确定样本中不同受检人群与各影响因素的关系

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本研究发现，有统计学意义的两个影响因素TP抗体和AFP阳性检出率在不同受检人群中有差异。为排除受检人群类型和构成的混杂因素可能影响，本研究按照HIV抗体不确定样本性别、年龄、受检人群类型及构成进行优化匹配，筛选110例HIV抗体确证阴性样本作为确证阴性对照组，同时进行TP抗体和AFP检测。见表 6。经过受检人群类型和构成匹配后，HIV抗体不确定组的TP抗体阳性率（10.91%）仍高于确证阴性对照组（3.64%），两组差异有统计学意义（χ²=4.314，P < 0.05）；然而HIV抗体不确定组的AFP阳性率（18.18%）略低于确证阴性对照组（23.64%），两组差异无统计学意义（χ²=0.990，P > 0.05）。由此可见，来自孕产期检查的HIV抗体不确定样本AFP阳性检出率高，主要与其本身特殊生理状况有关，而与HIV抗体不确定非特异性反应无关。

表 6 经优化匹配后两组样本中TP抗体和AFP阳性检出率

表选项

近年来，HIV抗体不确定结果检出率越来越多，据报道4%~20%的样品经过HIV初筛和复检阳性后WB确证为“HIV抗体不确定”，影响不确定结果的因素复杂且尚不清楚，转归以实验室出现非特异反应为主^[8]。本研究收集210例HIV抗体不确定样本，排除HIV核酸检测阳性或2~4周随访HIV-1抗体转阳后，共发现110例（占52.4%）HIV抗体不确定者。由非特异性反应所引起的HIV抗体不确定结果比例相当大，实验室检测者和临床医生对于HIV抗体不确定结果解读应非常慎重，必要时可进行HIV-1核酸试验加以排除，避免给受检者造成不必要的心理负担。

HIV抗体不确定样本出现的WB条带模式不尽相同，带型不同其预示着转归结局也不同。一些研究显示，WB单条带尤其是gag带其非特异性反应可能性较大，而出现env带预示HIV感染可能性大^[9-11]。本研究结果显示HIV抗体不确定样本中共出现13种WB带型模式，不管gag带还是env或pol带均有可能出现非特异性反应，但是gag带出现非特异性反应的概率比较大。值的注意的是，各国家/国际组织推荐的HIV-1抗体阳性判定标准不同，如WHO推荐至少出现2条env带^[12]，美国CDC推荐出现p24、gp41、gp120、gp160中任何2条带^[13]，美国红十字会推荐出现env、gag、pol各1条带^[13]。如按照上述各类标准判定，本研究就有少数病例会被误判为HIV-1抗体阳性，这将给受检者带来身心伤害或者不必要的医疗纠纷。为慎重起见，HIV-1抗体阳性判定标准除了要严格按照试剂盒说明书规定的判定标准外，对于临界阳性条带的样本需结合流行病学史或HIV核酸补充试验或进一步随访复检等结果谨慎判定，以免造成假阳性。

引起HIV抗体不确定非特异性反应的原因十分复杂，不同研究得出的结论也不一样，这可能与每个研究所选择的研究对象、对照组选择及研究设计不同有关。有些研究显示HIV抗体不确定的出现与其他反转录病毒、分枝杆菌、疟原虫等感染、自身免疫相关疾病、特殊情况如怀孕或疫苗接种等有关，此外，如果实验操作或判读不当以及试剂盒质量有问题均有可能引起HIV抗体不确定^[14]。本研究最初结果显示HIV抗体不确定样本中TP抗体阳性率和AFP水平高于对照人群。但进一步分析发现HIV抗体不确定样本中TP抗体、AFP、HBsAg阳性检出率在不同受检人群中结果不一样，其中20例孕产妇检查就有18例AFP检出阳性，经查阅文献发现孕产妇本身体内AFP就比正常人高，尤其是到了孕中期或孕晚期^[15]。为此，本研究通过对受检人群类型和构成进行优化匹配后，发现两组中AFP阳性检出率差异并无统计学意义，提示应注意对照组的选择偏倚。

经过受检人群类型和构成优化匹配后HIV抗体不确定样本组中TP抗体阳性率仍高于确证阴性对照组，提示TP抗体阳性可能是HIV抗体不确定非特异性反应发生的影响因素，但仍需加大样本进一步进行证实。另外，本研究发现HBsAg、HCV抗体、ANA、HTLV抗体在两组样本间检出率差异并无统计学意义，这提示HBV、HCV、HTLV感染或ANA抗体水平升高不一定是引起HIV抗体不确定非特异性反应的影响因素。此外，进一步分析发现，HIV抗体不确定样本中TP抗体、AFP、ANA、HCV抗体和HBsAg阳性检出率在不同带型样本分布中差异均无统计学意义，该结果预示这些影响因素不会与特定的WB条带发生反应。

本研究存在不足。对象类型和构成可能存在混杂因素，应注意对照组的选择偏倚，避免研究结果受到研究样本量和对照组人群选择的影响。下一步研究可加大样本量，优化对照组的选择，以便获取更为可靠的信息。

综上所述，引起WB非特异性反应的影响因素较为复杂，TP抗体阳性可能是HIV抗体不确定非特异性反应发生的影响因素，其参与非特异性反应的具体成分及反应机制尚不清楚，有待于进一步研究。孕妇中AFP阳性检出率高主要与其本身特殊生理状况有关，而与HIV抗体不确定非特异性反应无关。