云南省德宏傣族景颇族自治州（德宏州）HIV流行严重^[1]，更由于其与缅甸等其他东南亚国家的人员流动和交流，呈现出较为独特的亚型分布表现^[2]。持续的HIV亚型分布监测有利于了解HIV传播动态和流行趋势。本研究探讨2016年德宏州新报告的中国籍和缅甸籍HIV感染者HIV基因亚型分布特征，为有效防控HIV和提高干预措施效果评估质量提供科学依据。

对象与方法

1.研究对象：以德宏州2016年新报告HIV感染者（即首次HIV抗体检测结果阳性）为研究对象，取其参加抗病毒治疗前血浆标本，进行病毒pol、gag、env基因扩增。

2.方法：

（1）扩增HIV pol、gag以及env基因区：3个基因均使用TaKaRa One RNA PCR Kit（AMV）进行各基因的反转录，并用TIANGEN 2×Taq PCR MasterMix进行第二轮PCR扩增。各条基因引物见参考文献[5]、PCR体系配置见文献[3-4]。第二轮PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，所有阳性者送北京诺赛基因组研究中心有限公司测序。

（2）基因亚型分析：首先使用软件LaserGene 7.1对原始序列进行序列拼接处理，然后提交至美国Los Alamos国家实验室HIV核酸序列库（http://www.hiv.lanl.gov），并使用网站在线软件HIV-Blast将上传的序列与数据库的参考序列进行比对，初步判定亚型。使用MEGA 7软件将样本的所有序列与国际参考株进行排列和比对，并使用其Phylogeny模块中的Neighbor-Joining（N-J）法构建系统进化树，根据进化树上样本的序列与国际参考株的亲缘关系进一步确认亚型。然后将相关序列上载至jpHMM网站（http://jphmm.gobics.de/）进行重组分析，得到基因组嵌合结构。根据亚型及其断点和基因组嵌合结构与HIV sequence database（https://www.hiv.lanl.gov/content/sequence/HIV/CRFs/CRFs.html）提供的目前已公布的90例CRFs（Circulating recombinant forms）进行比较，确认样本的CRFs和URFs（Unique recombinant forms）。

3.统计学分析：使用Excel 2013软件整理数据，SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计数资料采用χ²检验；当其中有至少一个格子理论频数＜5，使用Fisher确切概率法。P＜0.05为差异有统计学意义，双侧检验。

结果

1.一般情况：2016年德宏州新报告1 112例HIV感染者，中国籍有395例（35.5%），缅甸籍有717例（65.5%），对其全部进行病毒pol、gag、env基因扩增，最终分型成功的病例共860例（77.3%），包括中国籍346例（40.2%），缅甸籍514例（59.8%）。见表 1。

2.基因亚型分布：成功分型的感染者中，C（33.6%）、URFs（28.4%）以及CRF01_AE（18.6%）为两国新发感染者最多的3种亚型。在244例URFs中，CRF01_AE与C亚型重组48例（5.6%），BC亚型重组46例（5.3%），CRF01_AE与B和C亚型重组30例（3.5%），8例CRF01_AE与B亚型重组（0.9%）。151个标本有1个基因片段分型结果，310个标本有2个基因片段分型结果，399个标本有3个基因片段分型结果。见表 2。

3. HIV亚型分布的影响因素：根据国籍进行分层分析发现，在中国籍的346例已知亚型的感染者中，亚型的分布与感染者的性别、年龄、民族、传播方式并无显著关联，但是傣族（16.4%）和汉族（18.6%）拥有相对较高比例的CRF01_AE，而景颇族有较高比例的其他亚型（32.9%），其他民族的URFs所占比例是最高的（40.7%）。在缅甸籍感染者中，HIV亚型与民族和传播方式有着显著关联，傣族和汉族拥有较高比例的CRF01_AE，而景颇族有较高比例的其他亚型，但是傣族是URFs比例最多的民族：异性传播以C亚型的比例最高，因静脉吸毒感染HIV的新报告病例以C亚型和URFs为最多的两种亚型。见表 3。

讨论

2016年分型成功的860例感染者中，人口学分布和2015年基本一致^[5]。云南省德宏州经异性传播的亚型分布特点与我国其他地区相同^[6-7]，CRF01_AE在异性性传播中比较常见；但是整体而言、B、C亚型重组分布较少^[8-9]，可能与云南省德宏州本身的HIV流行特点有关。而在缅甸籍感染者中可以发现，民族和传播方式是影响亚型分布的重要因素。与2015年相似，异性传播主要是以C亚型为主，而经静脉吸毒传播的亚型分布则有更高比例的URFs，一方面说明多人多次静脉吸毒共用针具可能会导致较多的新型HIV亚型重组的出现；同时，除共用针具外的其他传播途径也可能是URFs产生的原因。

2016年德宏州新报告HIV感染者亚型分布与2015年大体一致^[5]，依然复杂多样，C、URFs和CRF01_AE是分布最多的3个亚型。不同于我国内陆其他省份^{[2, 6-7]}，URFs毒株始终在德宏州HIV亚型分布中占有较大比例，显示出该地区HIV的流行复杂性和重组多样性。但2016年度HIV感染者亚型分布也呈现出新的变化，与2015年相比^[5]，2016年URFs的分布比例小于C亚型，位于第二位。而且对于已知亚型和CRFs而言，2016年新报告感染者的分布更为集中，主要集中在C和CRF01_AE型。位于东南亚的柬埔寨、缅甸和泰国主要是以B、C和CRF01_AE亚型为主；越南是以CRF01_AE亚型为主^[10-11]；而在中国内陆地区，主要是以B、C亚型重组和CRF01_AE为主^[2]。本次研究中未发现CRF07_BC亚型，但13例有相似断点和基因组嵌合结构样本的pol、env区与CRF07_BC的断点和基因组嵌合结构相似，仅gag区不同，疑似为CRF07_BC变异产生的新型CRFs。2016年HIV亚型分布变化提示云南省德宏州受到东南亚其他国家HIV疫情较大影响，尤其是已知亚型分布趋于以东南亚其他国家流行特点。

2016年德宏州新报告HIV感染者860例，占当年全部新报告病例的77.3%（860/1 112），代表性较好，基本反映德宏州HIV流行亚型分布现状。在860个已分型标本中，有151个标本只有1个基因片段，其中有50个标本的亚型是由pol基因确定，该基因片段长，所含信息量大，既往文献也有单独使用pol基因判断亚型^[12-13]；由于HIV是RNA病毒，其基因变异大且较难获得完整的核酸片段，虽然使用一个基因判断的亚型可能不够全面，但是可以作为标本的初步分型结果。建议未来可以使用全基因组测序的方法准确得到HIV的分型结果。本研究分型成功率为77.3%，仍有提升的空间。

综上所述，云南省德宏州HIV亚型分布复杂多样，有＞50%的新发HIV感染者均为缅甸籍，缅甸籍感染者可能作为传染源，使HIV的亚型分布呈现复杂化发展，有必要对德宏州新报告HIV感染者开展持续的亚型监测，为未来更好地检测和控制HIV疫情提供科学依据。

利益冲突: 无