2018, Vol. 39
文章信息
- 韩志刚, 张亚丽, 吴昊, 程伟彬, 梁彩云, 钟斐, 高凯, 徐慧芳.
- Han Zhigang, Zhang Yali, Wu Hao, Cheng Weibin, Liang Caiyun, Zhong Fei, Gao Kai, Xu Huifang.
- 广州市2008-2015年男男性行为人群HIV-1亚型分布特征及变化趋势
- Characteristic and dynamic of HIV-1 subtype distribution in men who have sex with men in Guangzhou, 2008-2015
- 中华流行病学杂志, 2018, 39(1): 67-71
- Chinese journal of Epidemiology, 2018, 39(1): 67-71
- http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2018.01.014
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文章历史
收稿日期: 2017-06-28
2. 510440 广州市疾病预防控制中心艾滋病预防控制部;
3. 510310 广州, 广东药科大学公共卫生学院
2. Department of AIDS Control and Prevention, Guangzhou Center for Disease Control and Prevention, Guangzhou 510440, China;
3. School of Public Health, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510310, China
HIV-1至少经过4次独立的从动物到人的跨物种传播，形成了M、N、O和P群[1]。其中M群是引起全球范围HIV-1大流行的元凶[2]。根据基因差异，HIV-1 M群被分成A~D、F~H、J和K共9个亚型(subtype)和若干流行重组形式(circulating recombinant forms，CRFs)[3-4]。多项HIV-1分子流行病学的研究表明，毒株之间常发生重组，特别是在亚型种类繁多、传播途径多样、疫情不断上升的地区，各种独特重组形式(unique recombinant forms，URFs)持续产生，给HIV-1的防治带来新的问题[5-8]。
近年来，我国HIV-1流行模式发生了转变，性传播取代静脉吸毒和血液传播成为主要的传播途径，其中男男性行为途径感染的比例上升较快[9]。新的HIV-1重组亚型CRF55_01B、CRF59_01B、CRF67_01B和CRF68_01B在我国MSM人群HIV-1感染者(MSM感染者)中相继被发现[10-12]，该人群已经成为HIV-1新型重组亚型的“孵化器”[9]。对2006－2007年广州市MSM感染者的研究表明，CRF01_AE为主要流行亚型(64.71%)，其次为B亚型(23.53%)和CRF07_BC(11.76%)[13]。此后，广州市MSM人群HIV感染率快速上升，从2008年的5.0%达到2013年的11.4%[14]，但是，广州市MSM感染者中HIV-1亚型分布的情况及变化趋势缺乏全面系统的报道，本研究目的是了解2008－2015年广州市MSM感染者HIV-1亚型分布特征及变化趋势。
资料与方法1.研究对象和样本采集：研究对象为2008－2015年确证的、男男性行为途径感染、现住址为广州的HIV-1抗体阳性者(不包括港澳台及外籍病例)。血清样本来自广州市CDC艾滋病检测确证实验室，采自研究对象的HIV-1抗体确证阳性血清。其中未能获得目的基因序列片段的样本不纳入本研究。样本的人口学信息和接触史、性伴数等流行病学资料来自中国疾病预防控制信息系统艾滋病综合防治信息系统。
2. HIV-1抗体检测：样本均经过HIV-1 ELISA法(北京华大吉比爱生物技术有限公司和上海梅里埃生物工程有限公司)和免疫印迹法(HIV Blot 2.2，MP生物医学亚太私人有限公司)确证为HIV-1抗体阳性。
3. HIV-1 RNA提取和基因片段的扩增：使用商业化核酸提取试剂盒(QIAamp Vrial RNA Mini Kit，德国Qiagen公司)，按说明书操作，从病例血清样本中提取HIV-1 RNA，-80 ℃保存。采用巢式PCR法扩增HIV-1 pol区基因片段(第一轮PCR试剂为PrimeScriptTM One Step RT-PCR Kit，大连宝生物公司；第二轮PCR试剂为TaKaRa Ex Taq，大连宝生物公司)。PCR引物和反应条件参见文献[15]。
4.序列拼接及比对：PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定无误后交公司测序。使用Chromas 1.7.6软件将每个样本测得的多个序列片段进行编辑、校正，最终拼接成一条序列。使用Mega6.06软件中的Align by Muscle(Codons)方法将拼接好的样本序列与从美国Los Alamos实验室HIV核酸序列库下载的国际参考序列进行比对[16]，建立数据集用于构建系统进化树。
5.样本亚型的确定：使用FastTree 2.1.10软件，基于GTR+CAT替代模型构建最大似然法(Maximum-likelihood，ML)系统进化树。根据样本序列与国际参考序列在进化树上的拓扑关系确定样本的亚型。对于拓扑关系不明确或怀疑有重组的样本，使用RIP软件查看重组情况。
6.统计学分析：应用SPSS 21.0软件进行统计学分析，各项构成比的比较使用χ2检验，当理论频数＜5时，采用蒙特卡罗模拟方法计算确切概率及P值的99%CI。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果1.样本人口学特征：从2 473份样本中成功获得2 210份(89.37%)的pol区基因片段作为本研究的样本。2 210份样本人群年龄16~84(30.19±8.22)岁；未婚为主，占73.39%；汉族占90.81%；大专及以上文化程度最多，占48.37%；职业以服务业最多，占35.66%。见表 1。
2.样本总体亚型分布：2 210份样本中HIV-1亚型分布以CRF07_BC(38.10%)和CRF01_AE(34.84%)为主；其次为CRF55_01B(14.62%)、B(6.06%)、URFs(3.58%)、CRF59_01B(2.17%)；以及少量其他亚型(0.63%)，包括A1、C、F1、CRF08_BC、CRF54_01B各1例，CRF67_01B 7例和CRF68_01B 2例。见表 1。
3.不同特征样本病毒亚型分布：不同年龄组、婚姻状况、文化程度、职业和性伴数水平间亚型分布的差异有统计学意义(表 1)。进一步分析发现，年龄越大的人群中CRF01_AE的构成比越低(χ2＝11.546，P＝0.001)，而CRF55_01B的构成比越高(χ2＝59.859，P＝0.000)。未婚人群中CRF01_AE的构成比高于已婚和离异或丧偶人群(χ2＝8.634，P＝0.013)，而CRF55_01B的构成比较低(χ2＝43.078，P＝0.000)。文化程度越高的人群中CRF01_AE的构成比越高(χ2＝8.114，P＝0.004)，而CRF55_01B的构成比越低(χ2＝15.589，P＝0.000)。工人、农民及农民工、家政家务及待业人群中，CRF01_AE的构成比较低(χ2＝13.966，P＝0.030)，而CRF55_01B的构成比较高(χ2＝18.168，P＝0.006)。农民及农民工人群中URFs的构成比高于其他人群(蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.017，99%CI：0.014~0.020)。性伴数越多的人群中CRF01_AE的构成比越低(χ2＝5.745，P＝0.017)、URFs的构成比越高(χ2＝5.733，P＝0.017)。
4.各亚型的时间分布及变化趋势：不同年份样本中B、CRF07_BC、CRF55_01B和URFs构成比的差异有统计学意义(B：蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.000，99%CI：0.000~0.000；CRF07_BC：χ2＝14.965，P＝0.036；CRF55_01B：χ2＝18.161，P＝0.011；URFs：蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.001，99%CI：0.000~0.001)，其中B亚型的构成比呈下降趋势(蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.000，99%CI：0.000~0.000)，URFs的构成比呈上升趋势(蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.000，99%CI：0.000~0.000)。见图 1。
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| 图 1 2008－2015年广州市男男性行为人群HIV-1亚型时间分布及变化趋势 |
5. ≤25岁样本中各亚型的时间分布及变化趋势：样本733例，HIV-1亚型以CRF07_BC(40.52%)和CRF01_AE(37.24%)为主，不同年份间URFs构成比的差异有统计学意义(蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.008，99%CI：0.005~0.010)，且呈上升趋势(蒙特卡罗模拟精确概率P＝0.000，99%CI：0.000~0.001)。见图 2。
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| 图 2 2008－2015年广州市男男性行为人群≤25岁样本HIV-1亚型时间分布及变化趋势 |
随着HIV-1在MSM感染者中快速流行，其亚型分布变化趋势和重组情况备受关注。本研究结果显示，2008－2015年广州市MSM感染者中HIV-1除主要流行亚型CRF07_BC和CRF01_AE外，还存在CRF55_01B、CRF59_01B、CRF67_01B和CRF68_01B等近年在我国MSM感染者中新发现的HIV-1重组亚型，以及多个URFs。
对我国13个省和深圳市MSM感染者的研究显示，不同地区HIV-1在MSM感染者中的主要流行亚型存在差异，如北京、山东、江苏、浙江、新疆维吾尔自治区、云南省以CRF01_AE为主，重庆、四川、贵州省以CRF07_BC为主，湖南、广西、深圳市以CRF01_AE和CRF07_BC为主[17-18]。广州市MSM感染者中HIV-1主要流行亚型与邻近的省或市相同，在构成比上与深圳市的报道更为相似，可能与广州市和深圳市地理接近、联系密切、人员流动便利有关。与深圳、湖南和广西相似，广州市MSM感染者中CRF55_01B的构成比超过了B亚型排在第三位，其中广州市和深圳市超过了10%，提示该亚型在广州市和深圳市MSM感染者中已达到了一定的流行强度。
早期研究显示，MSM感染者中HIV-1主要流行亚型是B亚型[19]。但近期研究显示，2007年以后我国MSM感染者中B亚型的构成比在下降，而CRF01_AE和CRF07_BC的构成比在上升[20-21]。本研究结果也显示B亚型构成比呈下降趋势，与上述研究结果一致。不同的是，广州市CRF01_AE的构成比在2008－2015年间差异无统计学意义，CRF07_ BC的构成比虽有差异，但未表现出趋势性，差异是由于2009年(25.22%)和2011年(45.00%)的波动所致。本研究还发现，在广州市MSM感染者中URFs的构成比呈上升趋势，提示HIV-1在该人群流行过程中在不断发生重组。此外，还发现了≤25岁样本不同年份亚型分布的差异，一般认为，≤25岁感染者经性途径暴露HIV-1的时间较短，可以近似地代表新近感染，本研究进一步证实了广州市MSM感染者中URFs构成比在增长。此外，农民及农民工人群中URFs的构成比高于其他人群，性伴数越多的人群中URFs的构成比越高，提示对这些亚人群加强行为干预，对防止新的重组亚型在广州市产生和流行具有重要的流行病学意义。
本研究存在不足。由于亚型分析使用的是pol区基因片段，而不是HIV-1全长基因，重组尤其是URFs的构成比可能被低估。
综上所述，2008－2015年广州市MSM感染者HIV-1亚型分布表现为CRF07_BC和CRF01_AE为主、多个亚型共存的特点。URF亚型的构成比呈上升趋势，提示HIV-1在MSM感染者中在不断发生重组。应针对MSM感染者中的农民及农民工、多性伴者加强干预。
利益冲突: 无
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