沙门菌1，4，[5]，12：i：-是鼠伤寒沙门菌变种的单相沙门菌，其O抗原和H抗原第一相均与鼠伤寒沙门菌相同，但缺少H抗原第二相。广东省从2007年起在全省选择哨点医院开展腹泻病例沙门菌监测，发现血清型4，5，12：i：-沙门菌的数量逐年增多，现已成为广东省人源沙门菌中最主要的血清型。为此本研究对2007－2016年广东省腹泻病例沙门菌监测中分离的沙门菌1，4，[5]，12：i：-进行分析，以了解该血清型沙门菌在广东省的流行现状及其病原学特征。

1.菌株：来自广东省东莞、佛山、广州、河源、惠州、江门、揭阳、茂名、韶关、阳江、湛江、中山、珠海13个市的沙门菌监测哨点医院2007－2016年检测到的沙门菌1，4，[5]，12：i：-。

2.仪器与试剂：药敏纸片为英国OXOID公司产品；革兰阴性菌药敏板为赛默飞公司和上海星佰公司产品；XbaⅠ酶购自美国Promega公司；SeaKem Gold Agarose琼脂糖为美国Cambrex公司生产；蛋白酶K为MERCK公司产品。

3.研究方法：①药敏试验：2009－2014年采用纸片法，抗菌药物包括氨苄西林(10 μg)、头孢他啶(30 μg)、环丙沙星(5 μg)、氯霉素(30 μg)、头孢噻肟(30 μg)、头孢吡肟(30 μg)、庆大霉素(10 μg)、萘啶酸(30 μg)、磺胺甲二唑(200 μg)、链霉素(10 μg)、四环素(30 μg)和甲氧苄啶(5 μg)共12种；2015－2016年采用微量肉汤稀释法，包括氨苄西林(2~64 μg/ml)、氨苄西林/舒巴坦(2~64/1~32 μg/ml)、头孢唑林(0.5~16.0 μg/ml)、头孢噻肟(0.25~8.00 μg/ml)、头孢他啶(1~32 μg/ml)、头孢西丁(2~64 μg/ml)、亚胺培南(0.25~8.00 μg/ml)、萘啶酸(2~64 μg/ml)、环丙沙星(0.03~8.00 μg/ml)、阿奇霉素(4~64 μg/ml)、四环素(1~32 μg/ml)、氯霉素(2~64 μg/ml)、复方新诺明(0.25~8.00 μg/ml)、庆大霉素(1~32 μg/ml)。②菌株分子检测：fljB、fljA、hin、iroB、STM2740、STM2757基因检测方法见文献[1]，PFGE操作见文献[2]。

1.流行概况：从2007年起广东省腹泻病例沙门菌监测中每年均检出沙门菌1，4，[5]，12：i：-，且呈逐年增多(表 1)，至2015年已成为沙门菌中最主要的血清型(42.95%)。2007－2016年共分离到2 960株沙门菌1，4，[5]，12：i：-。其中男性1 780例，女性1 126例(54例性别不详)，性别比例为1.58 : 1。发病年龄以婴幼儿为主，0~6岁组占总病例数的79.27%。病例分别来自广州市612例(20.68%)，中山市463例(15.64%)，珠海市370例(12.50%)，阳江市355例(11.99%)，东莞市342例(11.55%)，江门市204例(6.89%)，茂名市191例(6.45%)，河源市140例(4.73%)，佛山市124例(4.19%)，揭阳市103例(3.48%)，韶关市51例(1.72%)，湛江市3例(0.10%)和惠州市2例(0.06%)。47.23%(1 398/2 960)的菌株分离自住院病例，其余分离自门诊病例。

表 1 2007－2016年广东省腹泻病例沙门菌1，4，[5]，12：i：-菌株数分布

表选项

2.耐药情况：2 689株沙门菌1，4，[5]，12：i：-对18种抗生素药物敏感试验中除对亚胺培南100%敏感外，对其他17种抗生素均有不同程度耐药(表 2)。2011－2016年沙门菌1，4，[5]，12：i：-对头孢他啶、头孢噻肟和环丙沙星的耐药总体呈上升趋势，耐药菌株占3.05%(82/2 689)，并产生严重的多重耐药现象，具有ASSuT(即同时对氨苄西林、磺胺甲二唑、链霉素、四环素耐药)多重耐药菌株占70.62%(435/616)，具有ACSuGSTTm(即同时对氨苄西林、氯霉素、链霉素、庆大霉素、磺胺甲二唑、四环素和甲氧苄啶耐药)多重耐药菌株占27.11%(167/616)。

表 2 2007－2016年广东省腹泻病例沙门菌1，4，[5]，12：i：-药敏试验

表选项

3.菌株分子特征：选取2013－2016年187株沙门菌1，4，[5]，12：i：-检测STM2740、STM2757、fljA、fljB、hin和iroB 6个基因，全部实验菌株均保留了STM2740和STM2757基因，而fljA、fljB、hin、iroB基因均有不同方式的缺失。根据fljA、fljB、hin和iroB基因缺失的组合，共有8种不同的缺失方式(表 3)。其中以缺失方式1(缺失fljA、fljB和hin基因)为主(75.9%)，有9株菌(4.8%)保留了全部6个基因。

表 3 沙门菌1，4，[5]，12：i：-基因缺失方式

表选项

对2 347株沙门菌1，4，[5]，12：i：-用XbaⅠ酶切进行PFGE分子分型。沙门菌1，4，[5]，12：i：-的PFGE型别分布多样，共有934种不同PFGE谱型别，表现出较大的指纹图谱多态性。934种谱型中有637种(68.20%)只有1株菌。最主要的优势PFGE谱型为JPXX01.GD0226型，排在前20位的优势谱型见表 4。优势谱型均分散在全省各地，如JPXX01.GD0226型分布于广州、佛山、东莞、珠海、中山、河源、江门、茂名、阳江、揭阳10个市。沙门菌1，4，[5]，12：i：-的聚集性病例追踪调查均未发现病例间有共同的饮食暴露史。与广东省CDC的PFGE数据库中鼠伤寒沙门菌PFGE图谱比对，发现有168种沙门菌1，4，[5]，12：i：-的PFGE图谱与鼠伤寒沙门菌PFGE图谱一致。

表 4 沙门菌1，4，[5]，12：i：-的PFGE分子分型前20位优势谱型

表选项

在20世纪90年代以前一直将沙门菌1，4，[5]，12：i：-归为鼠伤寒沙门菌，称为鼠伤寒变种沙门菌，很少有沙门菌1，4，[5]，12：i：-的报道。近20年来沙门菌1，4，[5]，12：i：-在全球各地检出大幅度增加。如泰国和美国，该血清型沙门菌已被列为引起人类沙门菌病的6种最主要的血清型之一^[3-4]；在西班牙，沙门菌1，4，[5]，12：i：-是猪体最常见和猪肉制品中第二常见的血清型^[5]。该型菌自2007年在我国广东省监测中检出后，每年检出率不断上升，至2015年已成为人源沙门菌中第一常见的血清型，且从广东省牛肉制品中也有检出^[6]。但我国其他省份沙门菌1，4，[5]，12：i：-检出较少，未见报道，福建省虽有报道，但检出仅占0.45%^[7]。

近20年，欧洲地区存在两种主要的沙门菌1，4，[5]，12：i：-MDR菌株。一种是20世纪90年代末出现的以质粒介导的ACSuGSTTm耐药特性的1，4，[5]，12：i：-菌株^[8-9]，即西班牙株系(Spanish clone)，主要是噬菌体U302型；另一种是21世纪以来，在欧洲地区多国出现染色体介导的ASSuT耐药特性1，4，[5]，12：i：-菌株^[10-11]，为欧洲株系(European clone)，主要是DT193型和一些DT120型。本研究发现我国广东省人源沙门菌1，4，[5]，12：i：-多重耐药菌株中，西班牙株系占70.62%，欧洲株系占27.11%，说明多重耐药现象严重。

多项研究显示，沙门菌1，4，[5]，12：i：-具有和鼠伤寒沙门菌相同或相似的PFGE图谱^{[1, 3]}、MLST序列型^{[1, 12]}及MLVA图谱^[13]。根据这些研究结果推测，1，4，[5]，12：i：-菌株属于鼠伤寒沙门菌的一个变种，且起源于鼠伤寒沙门菌的进化发展。本研究也发现有168种沙门菌1，4，[5]，12：i：-的PFGE图谱与广东省鼠伤寒沙门菌PFGE图谱完全相同。

沙门菌的H抗原主要由fliC和fljB基因编码，fliC基因编码H第一相抗原，fljB基因编码H第二相抗原。fljA基因的表达产物可以与基因fliC操纵子结合，抑制fliC表达。沙门菌鞭毛相变是由一段可逆倒转的DNA序列(H片段)引起的。H片段上的hin基因编码的DNA转化酶反式作用于H片段，使位于两端的倒转重复序列发生倒位^[14]。iroB基因是编码葡萄糖转移酶同系蛋白；STM2740基因是编码整合酶；STM2757基因是编码与细胞质相关的蛋白^[1]。因此，在fljB、fljA、hin、iroB、STM2740、STM2757任何一个位点发生的缺失、插入和突变都可能导致第二相鞭毛蛋白不表达。本研究发现广东省人源沙门菌1，4，[5]，12：i：-不表达第二相鞭毛蛋白主要(75.53%)是缺失fljA、fljB和hin基因，但保留了iroB、STM2740、STM2757基因，这种缺失方式与意大利菌株相同^[2]。有7.45%菌株的缺失方式与西班牙菌株^[15](丢失fljA、fljB、hin、iroB基因，保留了STM2757)相同，没有和美国菌株(丢失fljA、fljB、STM2757基因，hin、iroB基因仍存在)一样的缺失方式。本研究还发现有9株菌是保留全部检测的6个基因，这可能是还存在其他基因的缺失或突变，还有待进一步用全基因组测序的方法分析。