新生儿由于其生理特点以及生活环境，机体抵抗能力较弱，比成年人更容易受到细菌耐药的困扰。大肠埃希菌是人和动物肠道内大量存在的正常菌群，多数菌株是共生的，但某些致病菌株可在机体抵抗力降低时引起感染，新生儿更易被感染^[1]。此外大肠埃希菌极易被诱导产生β-内酰胺酶，成为近年来临床上主要耐药菌^[2-3]。肠球菌也广泛存在于人和动物肠道内，对免疫力低下者可致严重感染。近年来，器械诊疗广泛应用及免疫抑制剂使用的增多使肠球菌感染增加^[4]，且出现多重耐药菌。为了解新生儿重症监护室（NICU）新生儿肠道内定植的大肠埃希菌和肠球菌耐药情况，对分离的199株大肠埃希菌和243株肠球菌进行定植和耐药情况分析，期望为临床合理用药提供数据。

1.样本来源：采集2014年5月至2015年5月在北京妇幼保健院NICU新生儿科住院患儿572份粪便标本。采用一次性肛拭子取新鲜粪便置半固体保存试管中，常温运至实验室，24 h内完成接种。

2.菌株分离和鉴定：将肛拭子少量涂布在大肠埃希菌显色平板（法国科玛嘉公司）和血平板（法国生物梅里埃公司）上，37 ℃过夜培养，挑选可疑菌落，用VITEK-2型全自动微生物分析仪（法国生物梅里埃公司）鉴定菌种。

3.药敏试验：使用大肠埃希菌、肠球菌药敏卡片分别为AST-GN14、AST-GP69（均为法国生物梅里埃公司产品）。采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2型全自动微生物分析仪进行菌种药敏试验，结果按2015年CLSI药敏试验执行标准判断敏感、中介、耐药。

1.耐药分析：在选取的199株大肠埃希菌中，耐药菌株169株，总耐药率为84.92%。90株（45.23%）产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）。药敏试验显示，大肠埃希菌对氨苄西林、四环素、复方甲基异恶唑、头孢唑啉耐药率较高，分别为84.92%、64.82%、59.80%、54.27%。对美罗培南敏感率为100.00%，对亚胺培南、厄他培南、阿米卡星、呋喃妥因耐药率较低，分别为0.50%、1.01%、1.51%、3.52%（表 1）。243株肠球菌耐药菌株有223株，总耐药率为91.77%。对氨苄西林、青霉素、环丙沙星、四环素、庆大霉素、红霉素、左氧氟沙星耐药率较高，分别为91.77%、91.36%、90.95%、76.54%、71.19%、70.78%、69.14%。对链阳霉素、呋喃妥因、链霉素耐药率较低，分别为0.41%、0.82%、4.53%（表 2）。对替加环素、万古霉素敏感率为100.00%。

表 1 新生儿重症监护室内199株患儿肠道定植的大肠埃希菌耐药率分布

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表 2 新生儿重症监护室内243株患儿肠道定植的肠球菌耐药率分布

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2.多重耐药分析：199株大肠埃希菌多重耐药率达到68.34%（136/199）。其中对3类抗菌药物同时耐药有32株，占多重耐药菌株的23.53%（32/136），主要对青霉素类、磺胺类和四环素类耐药；对4类抗菌药物耐药有47株，占34.56%（47/136），主要同时对青霉素类、头孢菌素类、四环素类、磺胺类或者同时对青霉素类、头孢菌素类、单酰胺环类、磺胺类耐药；对5类抗菌药物耐药有21株，占15.44%（21/136），主要对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类和磺胺类耐药；对6类抗菌药物耐药有33株，占24.26%（33/136），主要对青霉素类、头孢菌素类、单酰胺环类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类耐药；同时对青霉素类、头孢菌素类、单酰胺环类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类、磺胺类或呋喃妥因耐药有3株，占2.21%（3/136）。243株肠球菌多重耐药率达到76.13%（185/243）。其中对3类抗生素耐药有20株，占多重耐药菌株的10.81%（20/185），主要对氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类耐药；对4类抗生素耐药有5株，占2.16%（4/185），主要对氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类和四环素类耐药；对5类抗生素耐药有160株，占86.49%（160/185），主要对青霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类和四环素类耐药（表 3）。

表 3 新生儿重症监护室内患儿肠道定植的199株大肠埃希菌和243株肠球菌多重耐药分布

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近年来，以头孢菌素为代表的β-内酰胺类抗菌药物广泛和不规范使用，使得大肠埃希菌产ESBL率不断升高且对多种抗菌药物高度耐药和多重耐药^{[1, 5]}。本研究选取的199株大肠埃希菌中产ESBL有90株（45.23%）。另外，169株耐药大肠埃希菌中对β-内酰胺类抗生素耐药有134株（79.29%），对此类抗生素的耐药性可能除产ESBL介导机制外，还可能有其他机制原因引起。本研究中大肠埃希菌对氨苄青霉素、复方甲基异恶唑、庆大霉素、四环素耐药率较高，对亚胺培南、厄他培南、阿米卡星、呋喃妥因耐药率较低，与孙巧英等^[6]研究结果相似。张辉等^[7]调查显示大肠埃希菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、复方甲基异恶唑耐药率较高，耐药率分别为93.18%、92.00%、90.00%、93.33%，其耐药情况更严重。本文多重耐药大肠埃希菌共有136株（68.34%，136/199），其中同时对4类抗生素表现耐药性的数量最多，甚至还发现同时对7类抗生素耐药的菌株。杜艳等^[8]研究发现，大肠埃希菌大多对≥3种抗生素耐药，以氨苄西林、阿莫西林、环丙沙星耐药最为常见，与本研究结果一致，但对氨基糖苷类抗生素的耐药菌株高于本文。

本研究分离的243株肠球菌对氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素、红霉素、左氧氟沙星耐药率较高，对链阳霉素、呋喃妥因、链霉素耐药率较低，未发现对替加环素、万古霉素、利奈唑胺耐药菌株。瞿婷婷等^[9]报道肠球菌对氨苄西林、庆大霉素、红霉素、左氧氟沙星耐药率较高，分别为93.8%、67.9%、75.7%、86.2%，与本研究结果基本一致。但与本文结果不同的是对万古霉素和利奈唑胺表现出极低的耐药性。吕萍等^[10]的分析显示，肠球菌对氨苄西林、环丙沙星、庆大霉素、红霉素耐药率较高，分别为96.8%、84.1%、84.1%、98.4%，对庆大霉素和红霉素表现出更高的耐药性；而对万古霉素和替考拉宁完全敏感，与本文结果相近。本研究肠球菌多重耐药菌株有185株（76.13%），其中以对青霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类和四环素类耐药菌株为主。因此考虑该医院内可能有主要以上述多重耐药类型的肠球菌流行。吕萍等^[10]的研究中，对≥3种抗菌药物耐药的菌株占92%，主要对氨苄西林、红霉素、环丙沙星和利福平耐药，但对＞6种抗菌药物耐药的肠球菌占48%，而本文未发现对6类抗生素同时耐药的肠球菌。

总之，本文结果显示NICU内患儿肠道定植的大肠埃希菌和肠球菌耐药情况较严重，耐药情况与之前报道的新生儿感染大肠埃希菌和肠球菌的情况一致，但应特别注意大肠埃希菌对亚胺培南耐药，以及肠球菌以青霉素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类和四环素类多重耐药类型为主的问题。