自20世纪80年代以来，通过静脉注射毒品以及不安全性行为导致了HIV在云南省的流行^[1]。云南省德宏傣族景颇族自治州(德宏州)HIV流行情况较为严重，其HIV感染率达到5%^[2]。由于其与缅甸交界地理特殊性，作为我国西南与东南亚国家交流的窗口，德宏州HIV亚型检测研究不仅有助于掌握当地HIV传播动态，还有助于对HIV在我国的流行进化做出分析判定^[3-5]。本研究主要探讨2015年1－11月德宏州新报告的中国籍和缅甸籍HIV感染者的HIV亚型分布规律及其分布特征。

对象与方法

1.研究对象：在德宏州2015年1－11月新报告HIV感染者(首次HIV抗体检测为阳性)中选择HIV病毒载量≥100拷贝/ml的标本，全部进行病毒pol、gag、env基因扩增。

2.实验方法：

(1) HIV病毒载量检测：使用Nuclisens EasyQ HIV-1，V2.0试剂盒(法国Biomerieux公司)，在Nucliaens EasyQ分析仪上检测。具体操作严格按照说明书。

(2) 扩增HIV pol、gag以及env基因区：3个基因均使用TaKaRa One RNA PCR Kit(AMV)进行各基因的反转录，并用TIANGEN2×Taq PCR MasterMix进行第2轮PCR扩增。各条基因引物见表 1，PCR体系配置，如其他文献所述^{[4, 6]}。第2轮PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，阳性者送北京慧华晨科技有限公司测序。

(3) 基因亚型分析：使用LaserGene 7.1软件对原始序列进行拼接处理，然后提交至美国Los Alamos国家实验室HIV核酸序列库(http://www.hiv.lanl.gov)，使用网站在线软件HIV-Blast将上传的序列与数据库的参考序列比对后初步判定亚型归属。使用Mega 7软件将样本的所有序列与国际参考株一起进行排列和比对，并使用其Phylogeny模块中的Neighbor-Joining(N-J)法构建系统进化树，根据进化树上样本的序列与国际参考株的亲缘关系进一步确认亚型。将相关序列上载至jpHMM网站(http://jphmm.gobics.de/)进行重组分析，得到基因组嵌合结构。根据亚型及其断点和基因组嵌合结构与HIV sequence database (https://www.hiv.lanl.gov/content/sequence/HIV/CRFs/CRFs.html)提供的目前已公布的88例CRFs(circulating recombinant forms)进行比较，确认样本的CRFs和URFs(unique recombinant forms)。

3.统计学分析：使用Excel 2013软件整理数据及作图，使用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计数资料采用χ²检验；当其中有至少1个格子理论频数＜5，使用Fisher确切概率法。以P＜0.05判断具有统计学意义。

结果

1.一般情况：2015年1－11月德宏州新发现963例HIV感染者，中国籍有360例(37.4%)，缅甸籍有598例(62.1%)，5例户籍不详。在确证阳性后未经抗病毒治疗的862例血浆标本中，血浆量在200 μl以上且HIV病毒载量≥100拷贝/ml的标本共有744例，全部进行病毒pol、gag、env基因扩增，最终成功得到基因片段扩增以及获得HIV亚型的病例共499例(67.1%)，包括中国籍217例(43.5%)，缅甸籍277例(55.5%)，国籍不详5例(1.0%)。比较499例成功分型者与464例未获分型者的特征，发现成功分型者中除了性别(P＝0.008) 和民族(P＝0.001) 与未获分型者有差异外，成功分型者的年龄、传播方式以及来源均与未获分型者无差异。

除5例国籍不详者外，494例成功分型的HIV感染者中，男性占66.8%，25~45岁占67.8%；汉族、景颇族和傣族为主；异性传播为主。缅甸籍感染者中，男性、＜35岁、少数民族、经注射毒品传播的构成比均高于中国籍感染者。见表 2。

2. HIV基因亚型分布：105个标本有1个基因片段分型结果，145个标本有2个基因片段分型结果，249个标本有3个基因片段分型结果(表 3)。在499例成功分型者(含5例国籍不详者)中，364例(72.9%)为目前国际上已确认亚型或CRFs，其中以C亚型居多，133例(26.7%)，其他依次为CRF01_AE(19.2%)，CRF07_BC(8.8%)等亚型；其余135例(27.1%)为URFs，其中BC亚型重组66例(13.2%)，CRF01_AE与C亚型重组33例(6.7%)，CRF01_AE与B和C亚型重组25例(5.0%)，11例CRF01_AE与B亚型重组(2.2%)。未知国籍5人的亚型分别为URFs(1)、C(2)、CRF08_BC(1) 和B亚型(1)。见表 4。

2例样本的gag、pol及env基因片段镶嵌图，见图 1。图 1是B亚型和C亚型重组，且与已知流行重组型不同；图 1是B亚型、C亚型以及CRF_01AE重组得到的独特复杂重组。

中国籍与缅甸籍感染者的HIV亚型分布有显著差异，见表 2。其中中国籍感染者URFs所占比例最大；缅甸籍感染者以C亚型最多。BC亚型重组在中国籍感染者更多见，而缅甸籍感染者中有较多其他相对少见的亚型。

3. HIV亚型分布的影响因素：无论中国籍还是缅甸籍感染者，其HIV亚型分布与其性别、年龄和民族构成没有显著关联，但不同传播途径的HIV感染者亚型分布显著不同(表 4)。在中国籍感染者中，注射吸毒感染者中C亚型所占比较最高，而经异性传播的感染者中URFs、C和CRF01_AE所占比例较为接近；在缅甸籍感染者中，注射吸毒的感染者中URFs和C亚型所占比例接近，而经异性传播的感染者中URFs、C和CRF01_AE 3种亚型所占比例接近。

讨论

本研究发现德宏州2015年1－11月HIV亚型复杂多样，以URFs、C、CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC相对占多数。与当地2011年监测结果相比^[4]，URFs所占比例显著扩大，独特重组形式已经成为该地占比最大的HIV亚型，非URFs的亚型种类也有所增多，提示德宏州HIV亚型分布向着愈加复杂的态势发展。在URFs中，BC重组亚型最多，与2011年结果一致；其余主要是CRF01_AE与BC亚型的交互重组。

尽管中国籍感染者与缅甸籍感染者在亚型分布上有差异，但是总体来说URFs、C以及CRF01_AE都是作为所占比例最大的3个亚型。我国南部周边国家，印度以C亚型为主，泰国主要以B亚型以及CRF01_AE为主^[7]；而我国内陆其他地区HIV亚型主要为CRF01_AE^[8-12]，以及BC亚型重组的CRF08_BC和CRF07_BC等亚型为主。说明德宏州作为与缅甸等东南亚国家毗邻的边境地区，与相邻国家尤其是紧邻的缅甸之间存在较为密切的HIV传播关系；而中国籍感染者相比缅甸籍，CRF08_BC和CRF07_BC等亚型所占比例又较高，则可能与内陆省份之间的HIV传播有关。

传播方式与HIV亚型分布之间存在关联。泰国是较早报道B亚型主要在注射吸毒者中流行，而CRF01_AE亚型则主要在性传播HIV感染者中流行的国家^[7]。本研究发现，注射吸毒的中国籍感染者中有较高比例的C亚型，注射吸毒的缅甸籍感染者则以C亚型和URFs并重，反映了当前德宏州注射吸毒人群中HIV传播特征。但由异性传播的感染者中则显示具有更为广泛的亚型分布，包括一些罕见亚型，说明异性间传播的毒株来源更为广泛，与Yuan等^[13]关于中国地区经性传播感染HIV的亚型分布Meta分析结果一致。此外，德宏州经同性性行为传播的感染者人数较少，但中国籍感染者中有较多的CRF07_BC亚型，与全国MSM人群中HIV亚型分布较为一致^[14]。

本研究由于血液样本量不足和病毒载量低等原因，最终只有499例感染者得以成功分型，一定程度上影响了研究结果的代表性。但分析显示，成功分型者与未分型者中仅在缅甸籍感染者的性别和民族分布上存在差异，而在其他特征特别是与HIV亚型分布有显著关联的传播方式上并无差异；本研究是基于德宏州2015年1－11月所有新发现HIV感染者进行的较大样本的研究，由此可以认为能够较好地反映当前德宏地区HIV亚型分布特点，尤其是中国籍和缅甸籍HIV感染者的分子流行病学特征上的差异。

综上所述，中国籍和缅甸籍HIV感染者在德宏州HIV亚型分布复杂，URFs首次居分布首位。两国HIV感染者亚型分布有差异，但主要受HIV传播方式的影响。德宏州应该针对不同国籍人群，采取更具针对性的艾滋病防控措施和策略。

利益冲突: 无