近年来梅毒发病率呈增长趋势，各期梅毒的临床表现复杂多样，可造成人体多器官和神经的损害，产生多种症状与体征，梅毒抗体血清学检测已成为临床上诊断梅毒感染的主要依据之一^[1]。通过梅毒抗体检测，可及早发现和控制潜在传染源，对患者采取必要的隔离与防护措施，建立以切断传播途径为主的预防控制措施，控制感染与交叉感染^[2]。人体感染梅毒螺旋体后产生两种抗体，一是非特异反应素（抗脂质抗体），可通过快速血浆反应素环状卡片试验（Rapid plasma reagin，RPR）或甲苯胺红不加热血清试验（Toluidine red unheated serum test，TRUST）等检测；二是梅毒螺旋体特异性抗体（Treponema pallidum antibody，TP-Ab），可用明胶颗粒凝集试验（Treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）、ELISA和化学发光微粒子免疫分析法（Chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）等检测；快速筛检法有梅毒螺旋体抗体胶体金法和乳胶法（TP-AD）等检测^[3]。本研究旨在比较ELISA、CMIA、TPPA、TP-AD和TRUST 5种方法对梅毒抗体检测的结果，评价其临床应用价值。

1. 研究对象：2014年1月至2015年5月在安徽医科大学第一附属医院就诊的皮肤科患者、住院输血前、手术前感染性疾病筛查患者，均为临床确诊的梅毒患者，共计160例，其临床诊断标准和分期参照原卫生部的《梅毒诊断标准（中华人民共和国卫生行业标准） WS 273-2007》。其中男性93例，女性67例，年龄15～87岁，一期梅毒患者32例，二期梅毒患者57例，三期梅毒患者8例，隐性梅毒感染者63例，选取同期来本院就诊的非梅毒患者共200例作为对照组，其中男性109例，女性91例，年龄18～85岁。对研究对象空腹采集静脉血进行试验室检测。

2. 仪器和试剂：瑞士Tecan公司Infinite F50酶标仪，郑州基波新科技有限公司全自动快速立式洗板机JB-Ⅰ型，全自动微粒子化学发光仪i2000及配套的梅毒螺旋体抗体试剂盒购自美国雅培公司，ELISA梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒购自上海科华试剂有限公司，TPPA试剂盒购自日本富士瑞必欧株式会社，TP-AD试剂盒购自杭州艾博生物有限公司，TRUST试剂盒购自上海荣盛生物有限公司。

3. 检测方法：采集研究对象清晨空腹静脉血，分离血清（3 000 r/min，离心5 min），均严格按照试剂盒说明书方法用ELISA、TPPA、TP-AD和TRUST分别于24 h内检测，部分血清-20 ℃冰箱保存，解冻后进行CMIA试验。① TPPA：血清样品25 μl在微孔板样品稀释液倍比稀释，加入试剂，混匀、加盖，室温2 h后判定结果。阳性判定标准：加入致敏粒子产生凝集反应出现环状粒子环最大稀释度（最终稀释倍数≥1：80）的反应图像判定为阳性。ELISA法：样品吸光度与临界值比值，即S/CO 值≥1.0 判定为阳性。CMIA法：标本化学发光反应物的相对光强度（RLU）和临界值（cut off RLU）比值，即S/CO 值≥1.0 判定为阳性，CMIA 从测试到结果判读均为仪器全自动完成，④ TP-AD阳性判定：检测区（T）和质控区（C）均出现红色条带，0～30 min内判断。⑤ TRUST定性试验：血清和试剂各50 μl混合以呈现明显红色凝聚物为阳性反应；定量实验：将待检血清用生理盐水做倍比稀释，加入试剂，以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。ELISA、CMIA和TP-AD分别联合TRUST法，3组实验中2组阳性则为联合实验阳性。敏感度=梅毒患者真阳性例数/梅毒患者总例数；特异度=非梅毒患者真阴性例数/非梅毒患者总例数。

4. 统计学分析：采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，5种方法比较采用R×C表的 χ²检验，两两比较采用R×C表的分割 χ²检验，ELISA、CMIA法的S/CO 值计量资料以（x±s）表示，采用t检验，治疗前后TRUST及滴度分组分析采用 χ²检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。ELISA梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（上海科华试剂有限公司），TPPA试剂盒（日本富士瑞必欧株式会社），TP-AD试剂盒（杭州艾博生物有限公司），TRUST试剂盒（上海荣盛生物有限公司）。

1. 5种方法的敏感度、特异度分析：160例确诊梅毒病例组用5种方法的敏感度和特异度：TPPA为100.00%和99.50%、CMIA为99.38%和99.00%、ELISA为98.12%和99.00%、TP-AD为94.38%和94.50%、TRUST为85.62%和95.50%。约登指数依次为TPPA＞CMIA＞ELISA＞TP-AD＞TRUST，见表 1。

表 1 5种方法检测梅毒螺旋体的敏感度及特异度

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2. 不同分期梅毒患者梅毒螺旋体阳性率：TRUST对潜伏期和一期梅毒患者梅毒螺旋体抗体检测的阳性率低于TPPA、ELISA、CMIA和TP-AD，差异有统计学意义（均P＜0.05）。5种方法对二期、三期梅毒患者检测的阳性率差异无统计学意义（均P＞0.05）。TPPA、ELISA、CMIA对各期梅毒患者检测的阳性率差异无统计学意义（均P＞0.05），见表 2。

表 2 5种方法对不同分期梅毒患者进行检测的梅毒螺旋体阳性率

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3. TRUST与3种方法联合对不同梅毒分期患者检测的阳性率：ELISA或CMIA联合TRUST法对各期梅毒患者阳性率均为100.00%，TP-AD联合TRUST法阳性率为96.82%，见表 3。

表 3 TRUST与3种方法联合对不同分期梅毒患者检测的梅毒螺旋体阳性率

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4. 5种方法对梅毒患者治疗前后检测的阳性率：对121例梅毒患者治疗前和临床规范治疗3个月后的患者用5种方法进行血清学检测，TRUST滴度试验在治疗前后中位数分别为1：16和1：1，阳性率分别是100.00%和26.45%，治疗前后阳性率的差异有统计学意义（χ²=137.626，P=0.000）；TPPA、ELISA、CMIA、TP-AD 在治疗前后检测结果的差异无统计学意义（P＞0.05），阳性率均为100.00%；ELISA和CMIA在治疗前后检测的S/CO值数据均符合正态分布（Z值分别为0.878、1.017、0.843和0.847，P值分别为0.424、0.252、0.476和0.470），方差齐同（F值分别为0.089和0.001，P值分别为0.766和0.979），ELISA和CMIA在治疗前后检测的S/CO值差异无统计学意义（P值分别为0.081和0.237），见表 4。

表 4 5种检测方法对治疗前后梅毒患者检测的梅毒螺旋体阳性率

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5. 梅毒患者治疗监测的TRUST滴度分析：TRUST滴度1：1时治疗前后检测结果的差异无统计学意义（P=0.053），其余滴度治疗前后检测结果的差异有统计学意义（P＜0.01），见表 5。

表 5 121例梅毒患者治疗监测的TRUST滴度分析

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TPPA是公认的梅毒确认试验^[1]。本研究显示，其敏感度和特异度分别为100.00%和99.50%，与既往研究一致^[4]。老年人由于慢性病史等其他口腔螺旋体感染可出现1.00%的假阳性，梅毒在低危人群中可有0.10%的假阳性，与已有研究结果相符^[5]。但TPPA检测需多步稀释，价格昂贵，操作较繁琐，耗时较长（至少2 h），结果依赖肉眼判断而存在主观判断的误差且不易保存，对操作人员要求也高，不适合批量样品的筛选，限制其临床广泛应用^[6]。

ELISA可利用酶标仪判读S/CO值、原始结果易于保存和查询、重复性好等优点，适用于临床批量标本的梅毒抗体筛查，是临床实践中广泛应用的确认方法^[7]。本研究中梅毒患者经ELISA检测假阴性率为1.88%，血清经稀释后重新检测仍为阴性，但经其他4种方法检测为阳性，提示不是钩状效应的影响。ELISA虽对仪器要求不高，但耗时较长（至少2.5 h）及操作较繁琐，且血清中存在非特异性抗体、窗口期、钩状效应等导致假阳性或假阴性^[8]。本研究显示，如采用ELISA初筛可漏检，采用TRUST和ELISA两种方法联合检测可提高梅毒检出率，其任一试验阳性标本通过TPPA检测，可提高检测的可信度。

CMIA能自动、快速检测血清TP-Ab，为高通量检测（每小时可测200个标本），适合大批量样本筛查，与已有研究结果一致^[9]。与ELISA法相比，CMIA更为可靠、灵敏、准确、快速，将来有可能取代ELISA^[10]。

TP-AD快速检测法操作简单，但受温度和时间的影响较大，敏感性和特异性较低，且无法实现自动化，可用作临床急诊手术、输血前等快速初筛，但仍需确认试验^[11]。

TP-Ab阳性不能作为观察临床疗效的指标和判定梅毒活动与否，本研究显示4种TP-Ab试验治疗前后阳性率差异均无统计学意义。TP-Ab产生早，一般在潜伏期或在感染2周左右产生，其阳性包含有感染过梅毒后已恢复的人群中IgG抗体和隐性梅毒感染人群，梅毒感染后3～4周后产生抗类脂质抗体，在梅毒感染的不同时期阳性率差异较大，需要联合TRUST定量滴度试验，判定患者是否处于梅毒活动期及疗效监测。本研究提示，非梅毒者经TRUST检测4.50% 呈阳性，已有研究也显示，在孕妇、老年人、自身免疫性疾病患者中，有TRUST生物学假阳性反应^[12]。TRUST对潜伏期梅毒和一期梅毒患者检测的阳性率低于其他4种检测方法，5种方法对二期梅毒和三期梅毒检测结果的差异无统计学意义，与相关研究结果一致^[4]。梅毒患者经过3个月规范治疗后，71.55%患者体内的梅毒螺旋体会受到抑制甚至清除，但仍有28.45%的患者中非特异反应素可以持续低滴度阳性，称为“血清固定”，可能为患者细胞免疫功能受到抑制，从而影响梅毒螺旋体的彻底清除^[13]。

梅毒螺旋体血清学检测应考虑成本、易用性、适用性、样本量因素^[14]。为提高临床检出阳性率，最好采用2种以上方法检测，ELISA或CMIA联合TRUST可作为梅毒初筛试验的可靠方法。为提高临床可信度，二者中任一阳性需经TPPA复检，TRUST结合临床症状以确诊梅毒活动期、疗效观察，TP-AD法可用作急诊的筛查，但需作确诊试验。