前期研究表明，关闭活禽销售市场能减少人感染禽流感病毒(AIV)病例的发生，禽类“集中屠宰、生鲜上市”替代“活禽售卖”已成为防控H5N1、H7N9等禽流感疫情的主要策略之一^{[1, 2, 3, 4]}。广州市自2014年1月报告首例H7N9禽流感病例，曾多次采取了短期关闭活禽市场防控措施，但活禽市场一旦重新开放，市场环境H7N9病毒核酸阳性率又将快速上升，继而再次陆续出现人感染H7N9禽流感病例。为有效遏制禽流感疫情，广州市政府于2014年5月初划定中心城区部分区域为生鲜试点区，实行“集中屠宰、冷链配送、生鲜上市”，即试点区不能从事活禽经营活动，其中纯生鲜市场仅能销售政府指定的生鲜家禽加工企业加工配送的生鲜禽(0～4 ℃保存)； 在销售生鲜禽同时，也准许销售活禽批发市场集中代宰的光禽(活禽屠宰脱毛加工而成，常温保存)为光禽补充市场；而非试点区的其他区域为活禽经营区，仍维持原有的活禽售卖模式。为动态监测生鲜试点区和活禽经营区市场环境AIV变化情况，评估禽类生鲜上市减少环境中AIV污染水平，开展了本项研究。

1.调查对象：随机抽取广州市4个中心城区(越秀区、荔湾区、天河区、海珠区)的活禽经营区和生鲜试点区各20个市场，每个市场选择2个禽类交易档口。2014年7月至2015年4月每季度进行1轮调查，共进行4轮调查，调查时间分别为2014年7、10月及2015年1、4月，每轮调查监测市场和档口固定不变。

2.调查方法：

(1)市场与档口调查：走访观察市场与档口作业现况。采用自制问卷随机面对面访问市场工作人员和档口从业人员各1名，调查内容包括禽类来源、档口每日消毒，每周大扫除、每月1日休市、每日活禽零存栏等情况。

(2)市场环境监测：使用意大利Copan公司生产的病毒采样管采集市场禽类档口环境涂抹标本，每个档口采集4份，采样点依次为禽笼具(生鲜试点区市场为禽只存储冷柜)、销售台、砧板刀具和地表污水，分别代表禽类储存、售卖、宰杀和污水处理情况。采样时使用病毒采样管随管配备的医用棉拭子涂抹采样点表面或内壁，置采样管后，4 ℃ 24 h内送至广州市CDC实验室检测。

3.实验室检测：采用RT-PCR检测环境标本。AIV核酸检测使用中山大学达安基因公司检测试剂盒(PCR-荧光探针法)，阳性标本进一步检测H5、H7和H9亚型。反应体系配置及反应条件按照说明书操作。

4.统计学分析：采用EpiData 3.0软件建立数据库，核查无误后导入SPSS 17.0软件进行统计学分析。计算不同区域、不同市场AIV阳性率(病毒核酸阳性市场数/监测市场总数×100%)、标本AIV阳性率(病毒核酸阳性环境标本数/采集环境标本总数×100%)；采用 χ²分析比较不同类型市场、不同采样部位AIV核酸市场和标本阳性率；P<0.05表示差异有统计学意义。

1.基本概况：20个活禽市场位于海珠区(8个)、天河区(7个)和荔湾区(5个)的活禽经营区；20个生鲜禽市场位于越秀区(10个)、荔湾区(9个)和天河区(1个)的生鲜试点区。

40个活禽市场档口均在售卖点宰杀活禽；95.0%(38/40)档口每日活禽存栏过夜；25.0%(10/40)档口每日消毒；95.0%(38/40)档口每周大扫除；95.0%(38/40)档口每月1日休市；90.0%(36/40)档口的活禽采购于广州市郊的6所活禽批发市场。40个生鲜市场档口均未发现在售卖点宰杀活禽和存栏活禽；20.0%(8/40)档口每日消毒；90.0%(36/40)档口每周大扫除；所有生鲜档口每月不休市；所有档口的生鲜禽采购自广州市指定的3家生鲜禽加工企业；96.0%(36/40)的档口曾售卖光禽，且88.9%(32/36)档口光禽在活禽批发市场集中屠宰点进行宰杀脱毛加工。

2.市场环境AIV污染监测：40个市场禽类档口共采集1 233份环境标本。其中38个市场449份标本AIV核酸阳性，阳性率为36.4%(449/1 233)，H5、H7、H9亚型阳性率分别为0.6%(7/1 233)、2.3%(28/1 233)、22.5%(277/1 233)。见表 1。

表 1 广州市40个活禽经营区和生鲜试点区环境标本禽流感病毒核酸4轮监测分析

表选项

(1)活禽经营区与生鲜试点区比较：活禽经营区和生鲜试点区市场分别采集环境标本623份和610份。两类区域中各有19个市场检出AIV核酸，市场阳性率均为95.0%。活禽经营区环境标本AIV核酸阳性率为40.4%(252/623)，高于生鲜试点区的32.3%(197/610)，差异有统计学意义(χ²＝8.85，P＝0.003)；H9亚型阳性率为28.6%(178/623)，高于生鲜试点区的16.2%(99/610)，差异有统计学意义(χ²＝26.95，P<0.001)；H5、H7亚型阳性率差异无统计学意义。

4个季度动态监测发现，活禽经营区和生鲜试点区的环境标本AIV及其H9、H5亚型核酸标本阳性率均呈现出先上升后下降的趋势，其中第二轮(2014年10月)阳性率均为最高，而H7亚型阳性率则为第三轮(2015年1月)最高。且4个季度中，活禽经营区的环境标本AIV及其H9亚型核酸阳性率均高于生鲜经营区，其中第一轮的AIV阳性率差异有统计学意义，前三轮H9亚型阳性率差异有统计学意义(表 1)。

(2)光禽补充市场与纯生鲜禽市场比较： 生鲜试点区20个生鲜市场共采集环境标本610份，其中光禽补充市场482份，纯生鲜市场128份。监测结果显示，光禽补充市场AIV核酸阳性率为37.3%(180/482)，高于纯生鲜禽市场的13.3%(17/128)，差异有统计学意义(χ²＝26.78，P<0.001)；H9亚型阳性率为19.1%(92/482)，高于纯生鲜禽市场的5.5%(7/128)，差异有统计学意义(χ²＝13.80，P<0.001)。另外，光禽补充市场四轮次共检出2份H5、10份H7亚型AIV核酸阳性，而纯生鲜市场均未检出。

4个季度动态监测发现，生鲜试点区的光禽补充市场、纯生鲜禽市场环境标本AIV核酸阳性率也呈现先上升后下降的趋势，其中第二轮阳性率均为最高，第四轮均为最低。且光禽补充市场的环境标本AIV、H9核酸阳性率均高于纯生鲜市场，其中前两轮监测AIV阳性率差异有统计学意义(表 1)。

(3)不同环境标本阳性率比较：1 233份环境标本中，禽笼具(或冷柜)、销售展台、砧板用具和地表污水分别采集307、309、308和309份标本，AIV及其H5、H7、H9亚型核酸阳性率分别为31.6%～40.9%、0～1.0%、1.3%～3.7%和21.0%～23.3%，差异均无统计学意义。活禽经营区不同采集部位H9亚型阳性率介于26.9%～30.8%，均高于生鲜试点区同部位检出阳性率(15.0%～17.7%)，差异均有统计学意义(P<0.05)，但AIV及其H5、H7亚型核酸阳性率差异无统计学意义(表 2)。

表 2 活禽经营区和生鲜试点区不同环境标本禽流感病毒核酸阳性率比较

表选项

相关研究发现，约87%的H7N9禽流感病例有活禽或活禽市场环境暴露史^[5]，H7N9禽流感病例的增加与环境中AIV H7亚型分离率的增加一致，因此可通过市场环境监测来预测和评估人感染禽流感风险^{[6, 7, 8, 9]}。本研究在广州市生鲜上市试点期间，选择活禽经营区和生鲜试点区市场作为研究对象，通过动态监测市场禽类档口环境标本AIV核酸阳性率，评估禽类生鲜上市降低市场环境AIV污染水平。结果表明，2014年7月至2015年4月广州市活禽经营区市场环境AIV及其H9亚型核酸阳性率均高于生鲜试点区，且生鲜试点区内的纯生鲜市场一直未检出H5、H7亚型AIV，提示禽类生鲜上市措施可有效降低市场环境中AIV的污染。

调查显示生鲜试点区禽类生鲜市场也存在一定程度的AIV污染，环境标本中检出H5、H7、H9亚型AIV，同时还发现生鲜试点区的光禽补充市场环境标本AIV及其H9亚型核酸阳性率均高于纯生鲜市场，究其原因可能与生鲜试点区内多数市场混售光禽有关。据调查，生鲜试点区20个市场的40个档口中，95.0%(38个)的档口曾经售卖过光禽。溯源发现，大多数光禽来自广州市郊的6个批发市场的活禽，在批发市场集中屠宰间宰杀脱毛加工，随后运输至生鲜试点区档口售卖。由此推测，光禽可能在批发市场或集中屠宰间宰杀脱毛加工时交叉感染AIV，污染的光禽被运输至生鲜区市场后，在冲洗、分割、称重等售卖环节导致市场环境的污染^{[7, 8]}，而生鲜禽为生鲜禽加工企业直接从AIV感染率低的养殖场等场所进货屠宰包装，然后供给生鲜禽类市场销售，AIV污染风险得到较好的控制。因此，禽类纯生鲜市场AIV检测率显著低于混售光禽的生鲜市场。另外，禽类生鲜市场虽也能够检出部分AIV，但相对活禽而言，其传播AIV的风险还有待进一步评估。虽然光禽是目前市民普遍愿意接受的一种非活禽售卖方式^[10]，但对售卖光禽的生鲜试点市场仍建议加强源头监测管理，有活禽集中宰杀点的批发市场仍需定期清洗、消毒以及采样检测监管^{[11, 12]}，以控制光禽供货源头的病毒感染率，降低混售光禽污染市场环境的风险。在条件成熟的情况下，再全面禁止销售光禽，实现真正意义上的禽类生鲜上市，有效防控禽流感疫情。

无论活禽经营区还是生鲜经营区，市场环境标本AIV核酸阳性率的变化趋势均提示广州市冬春季为AIV主要流行季节，该结果与前期广东省、广州市H7N9人感染病例发病时间趋势一致 ^{[9, 11, 12, 13, 14]}，本次调查还发现，相比H5、H9等亚型，H7亚型传播的季节性稍有延后，建议根据不同亚型AIV季节变化规律，加强市场环境监测评估，有针对性做好疫情处置应急准备。

H9亚型目前仍是广州市禽类市场AIV主要流行毒株，与历年来全国以及东亚地区监测结果一致^{[8, 9]}，监测中还发现，活禽经营区市场H9核酸阳性率为28.6%，高于2006－2012年广州市禽类摊档1 368份环境标本监测结果(0.92%)^[11]，高于2013年广州市活禽市场1 397份环境标本监测结果(1.93%)^[12]，也高于广东省近年来12%的平均水平^[8]。有学者研究表明，H9N2是AIV进化变异的孵化器，目前新发的H7N9、H5N6、H10N8人感染AIV的内部基因片段均来自H9N2^{[4, 6, 9]}，提示要及时监测禽类市场H9亚型病毒变异，加强疫禽无害化处理，防止跨区流动^[15]。

本次调查发现市场外环境中禽只保存、售卖、宰杀、污水处理等部位均可检出AIV，与前期报道结果基本相似^{[7, 8, 9, 11, 16]}。但无论是活禽经营区市场还是生鲜试点区市场，不同环境样本的AIV及其H9亚型核酸阳性检出率差异均无统计学意义，表明市场一旦出现AIV传播，各环境部位均可受污染，且在屠宰等作业过程中导致病毒广泛扩散^{[7, 8]}，提示对市场有必要每日彻底清洗消毒。同时还发现同一采样部位，活禽经营区市场污染情况高于生鲜试点区，也表明禽类生鲜上市能有效降低市场各环境部位的禽流感污染。