HIV和HCV具有相似的传播途径，均可经静脉注射、使用血液制品传播，亦可通过性途径、母婴等方式传播。世界流行病学调查数据表明，HIV 感染者合并HCV 感染的现象普遍，HIV/HCV 共感染已经成为全球性问题。全世界的HIV/AIDS 感染者中约23%～75%为HIV/HCV共感染^[1]，然而，在全国流调统查报道HIV 感染者中HIV/HCV 共感染率为56.9%^[1]，经有偿献血途径感染HIV 的人群中，HIV/HCV 共感染率高达86.3%^[2]，明显高于其他国家。国内外研究报道HIV/HCV 共感染影响丙型肝炎的病情进展^{[3, 4]}，但是其免疫机制尚不清楚。研究表明，肝内调节性T 细胞（regulatory T cell，Treg）在慢性丙型肝炎中起着重要作用^[5]。因此，本研究通过对HIV/HCV共感染患者及HCV单独感染患者外周血Treg的分析，从而探讨Treg的变化及临床意义。

1. 研究对象：以2013 年12 月到北京佑安医院进行随访的河南籍28 例HIV/HCV共感染患者以及12例HCV单独感染患者为研究对象，采集患者病史及外周血，进行HIV对HIV/HCV共感染患者病情进展影响分析及免疫机制研究。28 例HIV/HCV 共感染患者均进行了抗-HIV治疗，所有研究对象均未进行抗-HCV治疗。入组病例一般情况，见表 1。两组患者年龄、性别、HCV 感染时间及感染方式均具有可比性。

表 1 HIV/HCV 共感染患者及HIV单独感染患者一般情况

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2. 诊断标准：AIDS及HIV感染诊断参照美国疾病预防控制中心（CDC）修订，于1993 年1 月1 日起实行的青年和成年人HIV/AIDS 分类和扩大的AIDS定义^[3]。所有病例均经免疫印迹试验（WB）确定为HIV 感染。丙型肝炎诊断参照文献^[4]。所有丙型肝炎病例均为HCV RNA（＋）和/或抗HCV（＋），并选取HAV、HBV、HDV、HEV 抗体阴性者，以排除HAV、HBV、HDV、HEV 及其他原因引起的急慢性肝损害。

3. 抗-HIV 抗体检测：抗-HIV 抗体检测采用HIV 1＋2 型抗体检测试剂盒（WB，新加坡MP 公司），严格按照说明书进行实验操作。

4. HCV载量及抗-HCV抗体检测：外周血HCV载量检测采用丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法，湖南圣湘生物），使用ABI7500荧光PCR 仪，严格参照试剂操作规程进行。抗-HCV抗体检测采用罗氏Cobas e601 全自动电化学发光免疫分析仪。

5. 血生化检测：采用富士700 全自动干生化分析仪，操作按说明书进行。

6. 肝脏纤维化评估：采用瞬时弹性扫描仪FibroScan 测定肝脏硬度值，以评估患者肝纤维化程度。评估标准参照瞬时弹性成像技术诊断肝纤维化专家意见^[6]。

7. Treg 百分率检测：CD4^＋CD25^＋CD127dim/- Treg 检测^{[7, 8]}，试剂采用BD 公司CD₃-PE-Cy7 抗体、CD₄-Alexa Fluor 488 抗体、CD₂₅-AmCyan 抗体及CD₁₂₇-DAPI 抗体，仪器采用BD公司LSRFortessa 流式细胞仪。实验方法严格参照仪器及试剂规程操作。采集患者肘静脉血，肝素抗凝，取100 μl 置于待检管，同时加入5 μ l CD₃-PE-Cy7 抗体、5 μ lCD₄-Alexa Fluor 488 抗体、5 μl CD₂₅-AmCyan 抗体及5 μl CD₁₂₇-DAPI 抗体荧光抗体，充分混匀，室温，避光30 min。加入1 ml 溶血素，室温，避光15 min。加入1 ml PBS，1 500 r/min，离心5 min，弃上清，加入300 μl PBS，上机。

8. 统计学分析：数据录入SPSS 13.0 统计软件包，图像处理采用GraphPad Prism 5.0 专业软件。两组计量资料经Kolmogorov-Smirnov 检验，正态分布资料以x±s 表示，比较采用独立样本t 检验，非正态分布计量资料以中位数和四分位数间距表示，采用MannWhitney U 检验，两组计数资料比较采用χ²检验，相关性分析采用Spearman 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

1. HIV/HCV 共感染患者与HCV单独感染者肝功能指标比较：ALT、总胆红素（TBil）、直接胆红素（DBil）、白蛋白（ALB）、ALP及谷氨酰转移酶（γ-GT）水平在HIV/HCV共感染组患者中与在HCV单独感染组患者中的两组比较，HIV/HCV共感染患者ALT及ALP 水平明显高于HCV 单独感染组，AST/ALT比值低于HCV 单独感染组，P 值分别为0.012、0.009、0.024，见表 2。

表 2 HIV/HCV共感染组与HCV单独感染组 肝功能生化指标

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2. HIV/HCV 共感染患者与HCV单独感染者肝脏纤维化指标比较：采用FibroScan 无创评估HIV/HCV共感染患者及HCV单独感染者肝脏纤维化程度。HIV/HCV 共感染组患者肝脏纤维化指标E 值为5.950 0～5.825 0 Kpa，高于HCV单独感染患者E值为5.150 0～1.050 0 Kpa，两者比较，差异无统计学意义（P＝0.117）。

3. HIV/HCV 共感染对HCV 复制及清除的影响：HIV/HCV 共感染组及HCV单独感染组HCV载量分别为6.476 8～5.343 4 lg copy/ml 及1.699 0～2.681 46 lg copy/ml，两组病毒载量比较，HIV/HCV共感染组高于HCV单独感染组，差异有统计学意义（P＝0.012）。HIV/HCV 共感染组HCV 清除率为32.14%（9/28），低于HCV单独感染组[75%（9/12）]，差异有统计学意义（P＝0.032）。

4. HIV/HCV 共感染患者与HCV 单独感染者Treg 百分率比较：HIV/HCV 共感染组与HCV 单独感染组CD3^＋CD4^＋CD25^＋CD127dim/-Treg 百分率分别为7.460 0%～2.287 5%、5.965 0%～2.105 0%，HIV/HCV共感染组Treg 百分率高于HCV单独感染组，差异有统计学意义（P＝0.019），见图 1。

图 1 HIV/HCV共感染患者与HCV单独感染者Treg百分率比较

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5. Treg 百分率与HCV载量相关性、HCV载量与肝脏纤维化指标E 值相关性分析：在HIV/HCV共感染者及HCV 单独感染者中，Treg 百分率与HCV 载量呈显著正相关（ρ＝0.350，P＝0.027），HCV载量与肝脏纤维化程度E 值存在相关性（ρ＝0.487，P＝0.001），如图 2 所示，而Treg 百分率与肝脏纤维化指标E值不具有明显相关性（ρ＝0.228，P＝0.158）。

图 2 ⒶTreg百分率与HCV载量相关性分析； ⒷHCV载量与肝纤维化指标E值相关性分析

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目前，普遍认为在HIV/HCV 共感染者中，HIV感染加速丙型肝炎的病情进展，促进肝硬化及并发症的进程^[9]。既往研究表明，与HCV单独感染者相比，HIV/HCV共感染者由急性丙型肝炎发展为慢性肝炎的概率更高^[10]，HCV载量更高，进展为失代偿性肝病及肝硬化的危险性更高^[11]。上述研究发现与本研究结果一致，与HCV 单独感染组相比，HIV/HCV 共感染组肝功能指标ALT、ALP 水平明显增高，而ALB 水平降低，肝脏纤维化指标E 值有增高趋势，提示HIV/HCV 共感染者肝脏受损更加严重。HIV/HCV 共感染组HCV 载量高于HCV 单独感染组，而HCV 清除率明显低于HCV 单独感染组，即HIV/HCV 共感染者进展为慢性丙型肝炎的概率更高。可见，HIV/HCV 共感染促进HCV病毒繁殖，抑制HCV清除，加重肝脏纤维化，从而加速丙型肝炎病程进展。因本研究病例数偏少，为进一步确证结论，将扩大样本量继续后续研究。

研究结果发现，HIV/HCV共感染组Treg 百分率高于HCV单独感染组，并且Treg 百分率与HCV载量具有显著正相关性，HCV载量与肝脏纤维化指标E 值呈正相关，而Treg 百分率与肝脏纤维化没有明显相关性。可见，HCV载量影响肝脏纤维化程度，而Treg 促进HCV复制，但是目前数据不支持Treg 直接影响肝脏纤维化程度。Treg 是不同于Th1 和Th2细胞的一种CD4^＋T 淋巴细胞亚群，可抑制CD4、CD8效应T 细胞及自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）功能。既往研究表明，在慢性丙型肝炎中，Treg 抑制HCV特异性CD8^＋T淋巴细胞增殖^[12]，细胞免疫反应受损，HCV特异性CD8^＋T 淋巴细胞增殖能力、细胞因子分泌及细胞毒性效应功能受损^[13]，从而抑制HCV 清除，进展为慢性丙型肝炎。研究发现，在HIV感染者中，Treg/CD4^＋T淋巴细胞百分率增高^[14]，HIV 感染导致CD4^＋T 淋巴细胞减少，Treg 增殖能力增强，从而Treg 百分率增高^[15]。因此，HIV/HCV 共感染者Treg百分率增高与HIV感染有关。

1995 年在小鼠模型中第一次发现，表达IL-2 受体α链分子（CD25）的CD4^＋T淋巴细胞，下调T细胞免疫反应，保持自身免疫耐受^[16]。随后，在人体中发现，CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞具有抑制性T细胞亚群即Treg 特性^{[17, 18]}。但是，T 细胞激活过程中也表达CD25，因此，CD25 分子不能作为Treg 特异性标记分子。Hori 等^[19]发现，在小鼠中，Foxp3（forkhead boxP3）转录因子是鉴定Treg必要及特异性分子。但是，在人体中，CD4^＋CD25-T淋巴细胞也表达Foxp3^[20]。研究发现，CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋细胞低表达CD127 分子（IL-7 受体α链分子），CD25及CD127共表达可用于鉴定CD4^＋ Treg。

综上所述，HIV/HCV 共感染加速丙肝病程进展，Treg 促进HCV 繁殖，而HCV 载量影响肝脏纤维化程度。Treg 影响HCV复制的免疫机制有待深入研究。但抑制Treg 可能为丙型肝炎治疗提供新思路。