肠道病毒（EV）71型（EV71）可引起手足口病、 疱疹性咽峡炎、非特异性发热及无菌性脑膜炎、脑 炎、肺炎、心肌炎等^{[1, 2, 3, 4]}，致残及病死率较高。以往关 于EV71的研究主要是针对手足口病常规监测、重症 患者分析或手足口病暴发调查，缺乏对EV71感染所 致疾病的全面系统了解。为此本研究对江苏省赣榆 县、射阳县、泰兴市、东海县、邳州市、宝应县及北京 市朝阳区部分6～35月龄儿童进行EV71感染所致 疾病的监测，了解EV71感染所致疾病的流行情况， 为综合防治提供依据。 对象与方法

1.样本来源：本研究是在EV71灭活疫苗Ⅲ期临 床试验监测阶段的基础上进行^{[5, 6]}，在研究现场建立 了涉及15个县/市级医院、64个镇卫生院、1115个村 卫生室的EV感染疾病监测系统，采取监护人主动报 告和被动就医相结合的方式，自2012年3月至2013 年2月对同期入组的10158名6～35月龄安慰剂组 受试者进行为期1年的队列随访，以研究人群的观 察人年以及确诊EV71感染所致疾病的病例数，计算 发病密度作为主要研究指标，系统调查EV71所致疾 病及其流行病学特征。本研究经江苏省疾病预防控 制中心伦理审查委员会审查批准，并经研究对象监 护人知情同意。

2. 标本采集：由于EV所致疾病临床表现复杂， 为保证检测的灵敏度，采用排除诊断方法，即在监测 期间，凡监测对象出现除外科疾病、先天性疾病、肿 瘤、精神行为障碍等有明确诊断的疾病外，其他未能 明确诊断或病因的症状、体征或疾病者均作为筛查 对象。由专业人员及时采集咽、肛拭子，进行EV71、 柯萨奇病毒A组16型（CA16）和肠道病毒通用型 （EV-G）特异性核酸检测。对于检测为EV71阳性病 例，采集症状期内粪便标本1份，症状期内每3天采 集1次咽拭子和肛拭子，症状结束后每7天采集1次 咽拭子和肛拭子，进行EV71特异性核酸检测，至连 续2次检测EV71均为阴性；同时收集该次病程观察 期内所有发病资料和流行病学资料。

3.实验室检测：

（1）病毒核酸检测：使用江苏默乐生物科技有限 公司提供的EV71、CA16及EV-G核酸检测试剂盒 （荧光PCR法）[注册证号：国食药监械（准）字2010 第3401300号]提取、检测病毒RNA。按说明书进行 操作及结果判定。

（2）病毒分离与鉴定：选择EV敏感细胞系RD 细胞（来源于人横纹肌肉瘤细胞）和Hep-2细胞（来 源于人喉癌上皮细胞），应用MEM生长液进行细胞 传代及培养。记录接种管和对照管细胞发生特征 性的细胞病变（CPE），对出现CPE标本，进行病毒 鉴定。

4. EV71病例定义：EV71感染所致疾病包括手 足口病、疱疹性咽峡炎、呼吸系统疾病、消化系统疾 病以及其他。病例诊断参照我国卫生部《手足口病 诊疗指南（2010版）》和《肠道病毒71型（EV71）感染 重症病例临床救治专家共识（2011年版）》，以及 WHO《Guidance for the clinical management of HFMD》和相关文献^[7]。分类及临床诊断依据见表 1。在临床诊断的基础上各类病例确诊至少满足以 下条件之一：①EV71特异性核酸检测阳性；②分离 出EV，并鉴定为EV71。

表 1 EV71感染病例分类及临床诊断依据

表选项

5. 统计学分析：采用EpiData3.1软件进行数据 双录入，SPSS18.0软件进行统计学分析，分类资料 的比较采用χ²检验或Fisher确切概率法，非正态分布 的计量资料比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异 有统计学意义。 结 果

1. 病例概况：在1年的随访中，10158名监测对 象有566人存在不同程度的失访，累积观察9885.24 人年，共计报告150例EV71感染病例，其发病密度 为15.17/千人年（150/9885.24人年），其中手足口病 123例（82.00%，123/150）、疱疹性咽峡炎4例 （2.67%，4/150）、呼吸系统疾病20例（13.33%，20/ 150）、消化系统疾病2例（1.33%，2/150）、其他疾病1 例（0.67%，1/150），见表 2。报告重症病例9例，占总 发病儿童的6.00%（9/150），均为手足口病病例。

表 2 EV71感染不同分类病例的构成及累积发病密度

表选项

2. 临床特征：呼吸系统疾病主要包括上呼吸道 感染、流涕、咳嗽、咽痛，比例分别占65.0%（13/20）、 15.0%（3/20）、15.0%（3/20）、5.0%（1/20）；消化系统疾 病主要包括腹泻、呕吐，比例分别占50.0%（1/2）、 50.0%（1/2）；其他疾病包括单纯发热1例。EV71所 致疾病的病程为1～42（M=9）d；其中手足口病病 程为3～42（M=9）d，非手足口病病程为1～29（M= 6）d。手足口病与非手足口病病程的M值差异有统 计学意义（Z=-4.000，P＜0.001），见表 3。

表 3 EV71感染手足口病与非手足口病病程比较

表选项

3. 流行病学特征：4、5、6月EV71感染所致疾 病的累积发病密度较高，分别为29.94/千人年（50/ 1669.84人年）、36.37/千人年（91/2501.98人年）、 33.91/千人年（113/3332.48人年），见图 1。所有的重 症病例均发生在此期间，分别占当月发病儿童的 5.88%（2/34）、12.20%（5/41）、9.09%（2/22）。EV71感 染所致疾病男童88例，女童62例，发病密度分别为 16.23/千人年（88/5422.69人年）、13.89/千人年（62/ 4462.55人年），差异无统计学意义（χ²＝0.885，P= 0.347）；6～、12～、24～35月龄3个年龄段儿童感染 EV71所致疾病分别为32、88、30例，发病密度分别 为13.53/千人年（32/2364.94人年）、18.56/千人年 （88/4740.21人年）、10.79/千人年（30/2780.09人 年），差异有统计学意义（χ²＝7.789，P=0.020），见 表 4。重症病例男童7例，女童2例，分别占男女发 病儿童的7.95%（7/88）、3.23%（2/62），差异无统计学 意义（χ²＝1.442，P=0.230）。3个月龄段重症病例分 别为1、7、1例，分别占各月龄段发病儿童的3.13% （1/32）、7.95%（7/88）、3.33%（1/30），差异无统计学意 义（χ²＝1.443，P=0.486）。

图 1 EV71感染发病风险的时间分布

图选项

表 4 EV71感染病例人群分布特征

表选项

4. 排毒周期：所有病例排毒周期为1～51（M= 8）d。其中手足口病病例为1～51（M=9）d，非手足 口病病例1～24（M=11）d，两者排毒周期M值的差 异无统计学意义（Z=-1.647，P=0.103），见表 5。

表 5 手足口病与非手足口病病例排毒周期比较

表选项

Chang等^[8]和Liu等^[9]发现：EV71感染疾病以手 足口病（50%）、疱疹性咽峡炎（10%）、中枢神经系统 疾病（25.0%～45.0%）为主。Chen等^[10]的研究显示， EV71感染疾病主要包括手足口病（78.4%）、疱疹性 咽峡炎（16.5%）和呼吸系统疾病（3.1%），与广东地 区的研究结果相似^[11]。本研究发现EV71感染所致 疾病除大部分（82%）为手足口病外，还包括疱疹性 咽峡炎、呼吸系统疾病、消化系统疾病及其他疾病， 所占比例分别为2.67%、13.33%、1.33%、0.67%。据 此推测目前国家传染病网络报告和监测系统仅报告 手足口病可能会低估EV71所致疾病的发病风险。

本研究EV71感染所致疾病的发病密度为 15.17/千人年，6～11、12～23、24～35月龄3个年龄 段儿童发病密度分别为13.53/千人年、18.56/千人 年、10.79/千人年，以前2个年龄段儿童发病风险较 高，与台湾、广东、香港地区的报道类似^{[8, 12, 13, 14]}。 EV71感染所致疾病的高发期为4～6月，与其他研 究报告相似^{[13, 14]}，重症病例的流行高峰与EV71感染 所致疾病的流行高峰基本一致。3个年龄段重症病 例在患儿中构成比的差异无统计学意义，但大部分 重症病例均出现在中低年龄组，与台湾地区报道 75%的重症病例发生在2周岁以下儿童的结论基本 一致^[15]。因此，在EV71感染流行季节其防控重点应 关注中低年龄儿童及重症病例。

本研究EV71感染所致疾病的病程为1～42 （M=9）d，与台湾^[16]、广东^[13]及西安地区^[17]报告的病 程有较大差异。手足口病与非手足口病病例病程的 M值差异有统计学意义，提示手足口病临床症状较 为严重，且所有重症病例均为手足口病，因此临床诊 疗过程中应重点关注手足口病，特别是重症病例。

本研究EV71感染所致疾病最长排毒周期与相 关文献报告相似^{[18, 19, 20]}。Han等^[21]随访观察34例 EV71感染的手足口病患儿排毒周期，发现在发病后 37～40d，20%的患儿粪便标本病毒核酸检测仍呈阳 性，粪便最长排毒时间为42d。潘浩等^[22]报道EV71 临床感染病例的粪便排毒最长周期为8周，与张慎 荣等^[23]的观察相似。手足口病与非手足口病病例排 毒周期M值的差异无统计学意义，提示除了手足口 病病例外，非手足口病病例同样也是EV71感染重要 传染源之一，目前尚未给予足够的重视。