中华流行病学杂志  2014, Vol. 35 Issue (8): 949-952   PDF    
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2014.08.016
中华医学会主办。
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郭万申, 徐瑾, 吴俊燏, 赵升, 何红霞, 师文俊, 于丹, 李晶, 高虹, 陈江婷. 2014.
Guo Wanshen, Xu Jin, Wu Junyu, Zhao Sheng, He Hongxia, Shi Wenjun, Yu Dan, Li Jing, Gao Hong, Chen Jiangting. 2014.
季节性流感裂解疫苗安尔来福®up>®的安全性、免疫原性及与H7N9禽流感病毒的交叉免疫研究
Safety and immunogenicity of seasonal inactivated influenza vaccine(split virion)and cross- reactive antibody responses to the H7N9 avian influenza virus
中华流行病学杂志, 2014, 35(8): 949-952
Chinese Journal of Epidemiology, 2014, 35(8): 949-952
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2014.08.016

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投稿日期:2014-3-5
季节性流感裂解疫苗安尔来福®的安全性、免疫原性及与H7N9禽流感病毒的交叉免疫研究
郭万申1, 徐瑾1, 吴俊燏2, 赵升1, 何红霞3, 师文俊3, 于丹2, 李晶2, 高虹2, 陈江婷2     
1. 450016 郑州, 河南省疾病预防控制中心;
2. 北京科兴生物制品有限公司;
3. 河南省原阳县疾病预防控制中心
摘要目的 评价季节性流感裂解疫苗(安尔来福®)的免疫原性及安全性,分析与H7N9禽流感病毒的交叉免疫反应。方法 采用临床研究开放式设计,选择6~35月龄婴幼儿(免疫接种方式:2针,0、28 d)、18~60岁成年人及>60岁老年人(1针)接种安尔来福®。所有接种者免疫后均接受安全性观察,并采集成年人和老年人免疫前后21 d的血清标本,利用血凝抑制试验(HI)检测疫苗3种(甲型流感2种和乙型流感1种)病毒株以及H7N9禽流感病毒抗体。采用欧盟流感疫苗临床研究标准(欧盟标准)评价疫苗免疫效果。结果 共202(婴幼儿65、成年人69及老年人68)人完成接种和安全性观察。不良反应发生率为12.4%(25/202),以全身不良反应为主,未见严重不良反应。有124(成年人64、老年人60)人采集到免疫前后配对血清。接种疫苗后21 d,成年组3个型别HI抗体阳转率为78.1%~90.6%,抗体保护率为92.2%~100.0%,GMT增长7.9~41.0倍;老年组HI抗体阳转率为66.7%~83.3%,抗体保护率为86.7%~100.0%,GMT增长5.7~20.4倍。均达到欧盟标准。而接种疫苗后,成年组和老年组抗H7N9抗体阳性率和阳转率仍保持为零,GMT增长仅1.2~1.4倍。结论 季节性灭活流感裂解疫苗的安全性和免疫原性良好,但对H7N9禽流感病毒无交叉免疫反应。
关键词季节性流感裂解疫苗     免疫原性     安全性     H7N9禽流感     交叉免疫反应    
Safety and immunogenicity of seasonal inactivated influenza vaccine(split virion)and cross- reactive antibody responses to the H7N9 avian influenza virus
Guo Wanshen1, Xu Jin1, Wu Junyu2, Zhao Sheng1, He Hongxia3, Shi Wenjun3, Yu Dan2, Li Jing2, Gao Hong2, Chen Jiangting2     
1 Henan Provincial Center for Disease Control and Prevention, Zhengzhou 450016, China;
2 Sinovac Biotech Co., Ltd;
3 Yuanyang Country Center for Disease Control and Prevention, Henan
Abstract: Objective To evaluate the safety and immunogenicity of seasonal inactivated influenza vaccine (split virion)and to analyze its cross-reactive antibody responses to H7N9 avian influenza virus. Methods An open-labeled clinical trial was carried out in infants aged 6-35 months,adults aged 18-60 years and the elderly aged >60 years. After vaccinations (one dose for adults and the elderly and two doses for infants),adverse events were observed. Serum samples were obtained before vaccination and 21 days after vaccination from adults and elderly subjects. Three types of antibody against seasonal influenza virus and antibody against H7N9 avian influenza virus were tested using microhemagglutination inhibition(HI) assay. Immunogenicity of the vaccine was evaluated based on the immunogenicity criteria for adults and the elderly,set by the Committee for Medicinal Products for Human Use (CHMP) for the European Medicines Agency. Results A total of 202 subjects (65 infants,69 adults and 68 elderly) were enrolled and injected for at least one dose. The overall rate of adverse events was 12.4%(25/202) and most of them were under systemic reaction. No serious adverse event was reported. Pre- and post-vaccination serum samples were collected from 124 subjects (64 adults,60 elderly). After 21 days of vaccination,the sero-conversion rate,sero-protection rate,and geometric mean titer(GMT) ratio(post-/pre-vaccination) of antibody against seasonal influenza virus were 78.1%-90.6%,92.2%-100.0% and 7.9-41.0 among adults while 66.7%-83.3%,86.7%-100.0% and 5.7-20.4 among the elderly,respectively. However,after vaccination,both sero-conversion rate and sero-protection rate of antibody against H7N9 avian influenza virus among adults and the elderly became zero,with GMT ratio between 1.2 and 1.4. Conclusion This trial vaccine appeared to have good safety and immunogenicity but inducing no cross-reactive antibody response to H7N9 avian influenza virus.
Key words: Seasonal influenza vaccine(split virion)     Immunogenicity     Safety     H7N9 avian influenza virus     Cross-reaction    

流感是首个实行全球监测的传染病[1]。流感病 毒表面抗原易发生变异,且感染一种流感病毒后产 生的免疫力不能够完全保护机体免遭同亚型或同型 的其他病毒抗原或基因型变异株侵袭。因此全球每 年均有流感暴发。接种流感疫苗是预防控制流感 最有效方法。根据WHO建议,流感病毒疫苗应含 有两种A型病毒(H3N2和H1N1)和一种B型病毒 (B/Victoria或B/Yamagata),并按照全球流感监测工 作网络提供的信息,每年两次分别对南北半球推荐 季节性流感疫苗生产用病毒株。北京科兴生物制品 有限公司根据WHO发布的2012/2013年北半球流 行病毒株生产了相应的季节性流感疫苗——三价灭 活流感病毒裂解疫苗(TIV)。为确证其免疫原性和 安全性,于2012年11-12月在河南省原阳县健康人 群中开展本研究。由于自2013年4月以来,一种新 禽流感病毒(H7N9)在我国东南部沿海及中部地区 肆虐并引起广泛关注。考虑到目前尚无针对性疫 苗,为了探索性考察季节性流感裂解疫苗免疫后能 否针对H7N9禽流感病毒产生交叉保护,本研究在 人群中也进行了交叉免疫评价。 对象与方法

1. 研究对象:本研究采取开放性设计,经河南省 疾病预防控制中心医学伦理委员会批准后,在原阳 县招募健康受试者。选择6~35月龄健康婴幼儿、 18~60岁成年人和>60岁老年人为研究对象。入 选标准为近3年内无季节性流感疫苗接种史,排除 对鸡蛋或疫苗任何成分过敏及发热或患急性疾病、 恶性肿瘤活动期或治疗后复发、免疫缺陷病、格林巴 利综合征患者。所有受试者在参与本临床研究前由 本人或监护人签署知情同意书。

按照欧盟流感疫苗临床研究标准(欧盟标准),在 评价每年新上市季节性流感疫苗安全性和免疫原性 的临床研究中,成年人和老年人受试者人数均不应低 于50人。考虑到20%的受试者脱落率,故本研究规 定入组的儿童、成年人和老年人的人数不应少于65 人。为了体现年龄层的差异,老年组中>65岁受试 者不得低于45人。婴幼儿组接种2针灭活流感裂解 疫苗,仅用于安全性评价;成年组和老年组接种1针 灭活流感裂解疫苗,用于安全性和免疫原性评价。

2.研究方法:

(1)疫苗与接种:采用WHO推荐的2012/2013 年北半球流感流行株作为毒种由北京科兴生物制品 有限公司生产的流感病毒裂解疫苗(安尔来福􀳏)。 甲 型H1N1株 为NYMC X-179A(A/California/7/ 2009),甲 型H3N2株 为IVR-165(A/Victoria/361/ 2011),B型株为NYMC BX-39。成年人剂型为每支 0.5ml,含3种抗原各15μg,1针次接种;儿童剂型为 每支0.25ml,含3种抗原各7.5μg,2针次接种,间隔 4周。疫苗接种部位均为上臂三角肌内注射。

(2)标本检测及判定标准:成年组和老年组在疫 苗 接 种 前 后21d各 采 集5ml血 样 本,分 离 血 清,-20℃保存。取上述两组受试者接种前后的配 对血清,分别针对流感疫苗3个型别病毒株和H7N9 禽流感病毒株(NIBRG-268,亲代病毒A/Anhui/1/ 2013)进行微量血凝抑制试验(HI)抗体检测[2]。计 算HI抗体阳转率(血清HI抗体免疫前<1∶ 10,免疫 后≥1∶ 40;免疫前≥1∶ 10,免疫后呈4倍增长者判 定为抗体阳转)、抗体保护率(血清HI抗体≥1∶ 40 者在人群中的率)和抗体GMT增长倍数。在接种疫 苗后第21天,该3项评价指标中任意一项达到此标 准(HI抗体阳转率:成年组>40%,老年组>30%;抗 体保护率:成年组>70%,老年组>60%;GMT增长 倍数:成年组>2.5倍,老年组>2.0倍),即判定为符 合欧盟标准。其中免疫前HI抗体滴度<1∶ 40的受 试者定义为易感人群;免疫前HI抗体滴度≥1∶ 40 定义为非易感人群。血清抗体滴度<1∶ 10按1∶ 5 进行统计学分析。

(3)安全性观察与判定标准:依据国家食品药品 监督管理总局《预防用疫苗临床试验不良反应分级 标准指导原则》(国食药监注[2005]493号)进行评 价,临床观察指标包括生命体征(发热)、局部反应 (红肿、疼痛、硬结、瘙痒等)和全身反应(皮疹、头痛、 头晕、乏力、肌肉疼痛、关节痛、恶心、呕吐、腹泻、腹 痛等)。接种疫苗后进行30min即时反应观察,并在 日志卡记录接种后0~72h发生的局部和全身不良 反应,以及用药情况。受试者在接种后第3天返回 接种点,由研究者核对回收日志卡,并问询及核实不良反应或临床症状。如试验期间发生严重不良反 应,应收集和记录药物治疗及医学处理信息,并跟踪 至不良反应缓解或痊愈。

3. 统计学分析:采用SPSS15.0软件进行统计 学分析。所有接种至少1针流感疫苗的受试者均被 纳入安全性分析集。按照方案要求完成疫苗接种且 采集配对血清样本的受试者,被纳入到符合方案分 析集(PPS)用于免疫原性评价。血清HI抗体阳转 率、抗体保护率的组间比较采用χ2检验或Fisher精确 检验,抗体GMT的组间比较采用t检验或方差分析, 以P<0.05为差异有统计学意义。 结 果

1. 基本特征:共202(婴幼儿组65、成年组69、老 年组68)人入组且接种第1针疫苗。婴幼儿组为6~ 35月龄,平均(20.1±8.6)月龄,男女性比例为1.32∶1; 成年组年龄22~60岁,平均(48.3±10.1)岁,性别比 例为0.5∶ 1;老年组年龄60~84岁,平均 (68.3±5.1)岁,性别比例为0.7∶ 1。在完成 第1针接种后,所有受试者均接受了安全性 观察。其中婴幼儿组共60人接种了第2针 疫苗并完成安全性观察。成年组和老年组 分别64人和60人完成接种前后2次血样采 集。所有脱落的受试者均为自愿退出,且 无人因与疫苗有关的不良反应而退出。

2.血清抗体水平分析: (1)免疫原性:成年组免疫前3个型别 (A/H1N1、A/H3N2和B)的抗体GMT(1∶) 分别为22.0、56.0、14.3,抗体保护率分别为 46.9%、68.8%、14.1%;老年组3个型别的抗 体GMT(1∶ )分别为8.7、43.4、18.0,抗体保 护率分别为15.0%、56.7%、23.3%。成年组 H1N1型抗体GMT和保护率均高于老年 组,差异有统计学意义(t=4.083,P<0.001; χ2=14.594,P<0.001)。接种疫苗后第21 天,成年组3个型别抗体阳转率分别为 90.6%、78.1%、78.1%,GMT增长分别为41.0 倍、13.7倍、7.9倍,保护率分别为100.0%、 100.0%、92.2%;老年组3个型别抗体阳转率 分别为83.3%、83.3%、66.7%,GMT增长分 别为20.4倍、14.3倍、5.7倍,保护率分别为 86.7%、100.0%、86.7%。成年组A/H1N1型 抗体的GMT和保护率均高于老年组,差异 有 统 计 学 意 义(t=6.206,P=0.023;χ2=7.046,P=0.008)。两年龄组3个型别HI抗体阳转率、 GMT增长倍数及保护率均超过欧盟标准(表 1~3)。 (2)易感人群与非易感人群比较:成年组3个 型别(A/H1N1、A/H3N2和B)易感人群比例分别 为53.1%、31.2%、85.9%;老年组3个型别易感人群 比例分别为85.0%、43.3%、76.7%。老年组免疫前 A/H1N1型易感率高于成年组,差异有统计学意义(老 年组免疫前保护率低于成年组,P<0.001),其他2个 型别免疫前易感率(保护率)老年组与成年组差异无统 计学意义。流感疫苗免疫后,成年组易感人群和非易 感人群3个型别抗体阳转率分别为100.0%和80.0%、 100.0%和68.2%、83.6%和44.4%;老年组易感人群和 非易感人群3个型别抗体阳转率分别为84.3%和 77.8%、96.2%和73.5%、80.4%和21.4%(表 3)。

3. 交叉免疫反应:成年组和老年组免疫前后 H7N9禽流感病毒血清抗体检测结果显示,接种前保 护性抗体阳性率均为0%,GMT(1∶)分别为2.6和2.5;接种后,两组人群抗体阳性率和阳转率仍均为0%,且 GMT也无明显改变,分别仅增长1.4倍和1.2倍。

表 1 安尔来福®免疫不同人群后3个型别流感病毒的GMT(1∶)变化

表 2 安尔来福®免疫不同人群后对3个型别流感病毒的保护率

表 3 安尔来福®免疫不同人群后3个型别流感病毒HI抗体阳转率

4. 疫苗安全性:所有入组的137名成年及老年 受试者均完成接种和安全性观察,共发生13例 (9.5%)不良反应。其中局部不良反应发生率为 1.5%(2/137),接种部位硬结和皮肤发红各1例;全 身不良反应发生率为8.8%(12/137)均为发热。两组 间不良反应发生率及各症状发生率的差异均无统计 学意义。所有入组的65名婴幼儿受试者均完成2针 接种及接种后安全性观察,共发生12例(18.5%)不 良反应。其中局部不良反应发生率为1.5%(1/65), 症状均为接种部位皮肤发红;全身不良反应发生率 为20.0%(13/65),症状为发热、腹泻和哭闹不安。整 个临床研究期间未见发生严重不良反应。 讨 论

接种流感疫苗是预防控制流感的有效方法之 一。2009-2012年广东省疾病预防控制中心连续4 年跟踪广州市数千名6~35月龄儿童流感样病例的 发病情况,发现2针流感疫苗接种的保护率分别为 51.8%、57.8%、74.4%和68.8%,1针流感疫苗接种的 保护率分别为32.4%、32.5%、69.3%和28.1% [3, 4]。 2010-2011年香港地区多家医院对1859名≥65岁 老年人全病因所致死亡率和肺炎所致死亡率监测, 结果表明接种季节性流感疫苗能显著降低老年人全 病因所致死亡率和肺炎所致死亡率。其中全病因所 致死亡,疫苗组死亡率为14.6%,非疫苗接种组死亡 率为20.2%(方差分析显示合并风险比为0.72,且差 异有统计学意义);而肺炎所致死亡,疫苗组死亡率 为9.4%,非疫苗组死亡率为12.7%(方差分析显示合 并风险比为0.80,差异有统计学意义)[5]

本研究表明2012/2013年流行季安尔来福􀳏在不 同年龄组受试者中均表现出良好的安全性,且接种 该疫苗后21d,成年组及老年组3个型别HI抗体阳 转率、GMT增长倍数以及保护性抗体阳性率均超过 欧盟标准。这与既往临床研究结果一致[2, 6, 7, 8],表明 安尔来福􀳏流感病毒裂解疫苗多年来保持一致的且 良好的安全性及免疫原性。虽然本研究未评价安尔 来福􀳏在婴幼儿人群中的免疫原性,但前期临床研究 显示,婴幼儿接种该疫苗后3个型别HI抗体阳转率 均超过40%,对H1N1和H3N2的抗体保护率超过 80%,对B型抗原的抗体保护率超过50% [9, 10, 11]

研究显示成年组和老年组在疫苗接种前,对 A/H1N1型和B型流感病毒的HI抗体阳性率分别为 46.9%和15.0%、14.1%和23.3%。表明受试人群对 A/H1N1型和B型流感病毒仍普遍易感。这与当地 的流感疫情监测数据基本一致[12, 13]

2013年3月在我国暴发的人感染H7N9型禽流 感引起全球关注。鉴于当前针对H7N9禽流感病毒 疫苗尚在研制中,本研究评价了受试人群免疫前针 对H7N9禽流感病毒的抗体水平及接种安尔来福􀳏 后对该病毒的交叉保护能力。结果表明,不论免疫 前后,成年组和老年组受试者对H7N9禽流感病毒 的抵抗力几乎为零,且季节性流感疫苗对H7N9禽 流感病毒感染未表现出任何保护效果。因此有必要 研发针对H7N9禽流感病毒的疫苗。

参考文献
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