刘寄奴为菊科植物奇蒿Artemisia anomala S. Moore的干燥地上部分，又名南刘寄奴、六月霜、九牛草、野马兰头等^[1]，主要分布于华东、中南及西南各省区，主产于江苏、浙江、广西、湖南等地。奇蒿始载于《雷公炮制论》，其性温，味苦^[2]，具有清热解暑、破血通经、散瘀止痛、消食化积的功效^[3]，用于治疗血漏经闭、产后阏阻腹痛^[4]、食积不化^[5]、炎症^[6]、金黄色葡萄球菌感染^[7]、局灶性脑缺血^[8]等症。有文献报道，从刘寄奴中分离得到倍半萜内酯、黄酮和香豆素类等化合物，其中包括槲皮素、柚皮素、山柰酚、芒柄花素和异泽兰黄素5个成分^[9-13]，本文采用HPLC法对刘寄奴中上述5个成分的含量进行同时测定，为刘寄奴质量评价提供参考依据。

1 材料 1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪(Agilent公司)；KQ-100DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声波仪器有限公司)；BP211D万分之一电子分析天平(赛多利斯公司)；Millipore Simplicity-185超纯水仪(密里博公司)等。

1.2 试药

对照品槲皮素(批号100081-201610)购于中国食品药品检定研究院；对照品柚皮素(批号3457，HPLC法测得纯度≥98.5%)、山柰酚(批号3532，HPLC法测得纯度≥98.0%)、芒柄花素(批号3524，HPLC法测得纯度≥98.0%)、异泽兰黄素(批号3670，HPLC法测得纯度≥98.0%)购于上海诗丹德标准技术服务有限公司。

刘寄奴药材(批号18020601，产于广西，购于南宁市宾阳县万润本草有限责任公司中药饮片厂；批号150501，产于浙江，购于南宁市万药堂药业有限公司；批号160701，产于浙江，购于南宁市万药堂药业有限公司；批号160301，产于江苏，购于广西贵港市缘之源种养发展有限公司中药饮片厂)，经广西中医药大学赛恩斯新医药学院药用植物学教研室苑敏副教授鉴定均为菊科植物奇蒿Artemisia anomala S. Moore的干燥地上部分；甲醇为色谱纯，Fisher科学世界公司；其余试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱为Syncronis C₁₈柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(40:60)，检测波长260 nm，流速1.0 mL·min^-1，柱温25 ℃，进样量为10 μL。

2.2 混合对照品溶液的制备

精密称取槲皮素、柚皮素、山柰酚、芒柄花素、异泽兰黄素的对照品适量，加甲醇制成每1 mL分别含槲皮素0.062 mg、柚皮素0.031 mg、山柰酚0.034 mg、芒柄花素0.022 mg、异泽兰黄素0.027 mg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取刘寄奴药材粉末(过40目筛)约1 g，精密称定，精密加入甲醇20 mL，称量，回流提取1 h，放冷，用甲醇补足减失的量，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4 专属性试验

分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL进样分析，色谱图见图 1。

2.5 线性关系考察

精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液1、4、8、12、16 μL，按“2.1”项下色谱条件进样分析，以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标绘制标准工作曲线，结果见表 1。

2.6 检测下限与定量下限

取“2.2”项下混合对照品溶液，用甲醇逐级稀释后进样测定，测得槲皮素、柚皮素、山柰酚、芒柄花素和异泽兰黄素的检测下限(S/N=3)分别为0.22、0.35、0.32、0.42和0.36 ng，定量下限(S/N=10)分别为0.75、1.20、1.10、1.40和1.20 ng。

2.7 精密度试验

精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，计算槲皮素、柚皮素、山柰酚、芒柄花素和异泽兰黄素峰面积的RSD分别为0.37%、1.0%、0.90%、1.2%、0.92%。表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

取同一批样品(广西18020601)，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，通过回归方程计算槲皮素、柚皮素、山柰酚、芒柄花素和异泽兰黄素平均含量分别为0.315 7、0.216 7、0.172 6、0.118 4、0.248 5 mg·g^-1，RSD分别为0.45%、0.97%、1.4%、1.4%、0.58%。表明方法重复性良好。

2.9 稳定性试验

取同一份供试品溶液(广西18020601)，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、12 h进样测定，计算槲皮素、柚皮素、山柰酚、芒柄花素和异泽兰黄素峰面积的RSD分别为0.39%、0.76%、0.93%、1.5%、1.0%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.10 加样回收率试验

取同一批号(广西18020601)已知含量的样品6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入一定量的5个成分对照品，按“2.3”项下方法制备供试溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算5个成分的平均回收率，结果见表 2。

2.11 样品测定

取4个不同批次的刘寄奴样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定5个成分的含量，结果见表 3。

3 讨论 3.1 供试品溶液制备方法考察

根据待测成分的性质分别考察了回流提取、超声提取和不同提取时间(0.5、1、2 h)，结果显示回流提取效果较好，回流提取2 h和1 h无明显差异，故选择回流提取1 h；考察不同提取溶剂(甲醇、70%甲醇水、乙醇、70%乙醇水)，经HPLC测定，比较其色谱图，结果表明以甲醇作为提取溶剂提取率较高，且干扰少。故最终确定以甲醇为提取溶剂，回流提取1 h。

3.2 色谱条件考察

通过全波长扫描得到5个成分的3D图谱，结果显示在波长260 nm处5个成分均有吸收且灵敏度较好。考察不同比例的乙腈-0.2%磷酸水、甲醇-0.2%磷酸水、乙腈-水、甲醇-水等流动相系统，结果显示以甲醇-0.2%磷酸水溶液(40:60)为流动相，分离度较好，保留时间适中，峰形较对称。

3.3 小结

根据实验结果，4批刘寄奴不同成分的含量有一定的差异，其原因是否与产地及采收时间等因素有关，还需采集更多样品进行比较研究。本文所建立的同时测定刘寄奴中5个成分的方法简便准确，精密度高，稳定性和重复性好，加样回收率符合相关规定，可用于评价刘寄奴的内在质量。