半夏是我国传统中药之一，来源于天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.的干燥块茎，主要分布在四川、甘肃、山东、贵州等地^[1-2]，其性辛、温，因具有燥湿化痰、消痞散结的功效，临床上多用于治疗痰多咳喘、痰饮眩悸、呕吐反胃等症^[3]。在张仲景编著的《金匮要略》中，以半夏为君药的10余个方剂至今仍被广泛应用。对中国、日本等国家的558个传统医学处方进行分析，半夏的使用频率位于第22位；在日本210个法定汉方中，含半夏的有46个，占22%^[4]。由此可见，半夏在治疗疾病上发挥着重要作用，且临床使用量较大。调查发现，不同中药市场的半夏药材质量参差不齐，2015年版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)以琥珀酸定量为内在指标控制半夏质量，仅单一指标远不能达到有效地评价其质量，反映临床疗效的目的，应采用多组分综合分析进行中药质量控制才更具可行性^[5-7]。半夏成分复杂，主要含有机酸、生物碱、核苷类、蛋白质、多糖等^[8-10]，目前报道的与药效相关的成分主要有有机酸、生物碱和核苷类^{[9, 11-12]}。其中有机酸具有止咳、祛痰、止呕等作用，能够抑制咳嗽中枢，降低呼吸道感受器敏感性，为半夏的主要药效物质基础^[13-14]。因此，本文以琥珀酸、盐酸麻黄碱、肌苷、鸟苷、腺苷5个半夏代表性成分为指标，旨在建立HPLC同时测定半夏中5个成分含量的方法，为更好地评价半夏质量提供简单可靠、快速、准确的检测方法，同时为进一步完善其质量标准奠定理论基础。

1 仪器与试药

KQ-500DB数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Agilent Technologies 1200高效液相色谱仪；Heidolph-Laborota 4000旋转蒸发仪(德国海道夫公司)；Allegra X-22R离心机(美国贝克曼公司)；BP121S十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)。

对照品肌苷(批号140669-200401)、鸟苷(批号86-09-10)、腺苷(批号110879-200202)、琥珀酸(批号110896-200202)、盐酸麻黄碱(批号0714-9903)，均购自中国食品药品检定研究院，含量均≥98%；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。半夏采自全国5个省份，共10批，经成都中医药大学李敏教授鉴定为天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb.)Berit.的干燥块茎。样品来源信息见表 1。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

采用Agilent Eclipse XDB C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈(A)-水(B)为流动相，梯度洗脱(0~10 min，0.5%A→1.0%A；10~15 min，1.0%A→1.5%A；15~30 min，1.5%A→5.5%A；30~35 min，5.5%A→10.0%A；35~45 min，10.0%A→15.0%A；45~50 min，15.0%A→20.0%A；50~57 min，20.0%A→26.0%A；57~62 min，26.0%A→33.0%A；62~63 min，33.0%A→37.0%A；63~77 min，37%A→50%A；77~87 min，50%A)；流速1.0 mL·min^-1；检测波长265 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。对照品和样品的色谱图见图 1。

2.2 混合对照品溶液的制备

精密称定对照品肌苷1.85 mg，鸟苷1.96 mg，腺苷2.06 mg，琥珀酸2.13 mg，盐酸麻黄碱2.08 mg，分别加甲醇溶解并定容至10 mL，制成质量浓度分别为185、196、206、213、208 μg·mL^-1的对照品储备液。精密吸取各对照品储备液适量，用甲醇制成每1 mL中含37 μg肌苷、39.2 μg鸟苷、41.2 μg腺苷、42.6 μg琥珀酸、41.6 μg盐酸麻黄碱的混合对照品溶液，再用甲醇逐级稀释成系列浓度的混合对照品溶液(质量浓度：肌苷37.00、18.50、9.25、6.17、4.63、3.70 μg·mL^-1，鸟苷39.20、19.60、9.80、6.53、4.90、3.92 μg·mL^-1，腺苷41.20、20.60、10.30、6.87、5.15、4.12 μg·mL^-1，琥珀酸42.60、21.30、10.65、7.10、5.33、4.26 μg·mL^-1，盐酸麻黄碱41.60、20.80、10.40、6.93、5.20、4.16 μg·mL^-1)。

2.3 供试品溶液的制备

称取半夏粉末(过60目筛)2 g，精密称定，加超纯水20 mL，称量，超声(功率250 W，频率35 kHz)提取45 min，放冷，再称量，加超纯水补足减失的量，摇匀，10 000 r·min^-1离心5 min，取上清液10 mL，回收溶剂至干，加超纯水适量使溶解，转移至10 mL量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取“2.2”项下各浓度的混合对照品溶液10 μL，按照“2.1”项下色谱条件注入液相色谱仪进行测定，记录色谱峰面积。以对照品质量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程及线性范围见表 2。结果表明，各化合物在各自质量浓度范围内线性关系良好，r > 0.999 0。

2.5 精密度试验

精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液(含肌苷9.25 μg·mL^-1，鸟苷9.80 μg·mL^-1，腺苷10.30 μg·mL^-1，琥珀酸10.65 μg·mL^-1，盐酸麻黄碱10.40 μg·mL^-1)10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次测定，记录峰面积，计算RSD。结果肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、麻黄碱峰面积的RSD分别为0.74%、0.81%、0.69%、0.67%、0.70%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液(样品编号bx-2)10 μL，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、3、6、9、12、24 h进样测定，记录峰面积，计算RSD。结果肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、麻黄碱峰面积的RSD分别为1.2%、1.2%、0.91%、1.2%、0.83%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

精密称取半夏(样品编号bx-2)粉末2 g，平行称定6份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，测得肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱质量分数分别为0.33、2.18、2.70、4.43、6.74 mg·g^-1，RSD分别为1.9%、1.6%、2.1%、1.8%、2.0%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的半夏药材(样品编号bx-2)粉末6份，每份1.5 g，精密称定，分别加入与样品中待测成分含有量相当的肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱的对照品，按照“2.3”项下方法制备供试溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算回收率。结果见表 3。

2.9 半夏5个代表性成分含量测定

精密吸取混合对照品溶液及供试品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。根据线性方程计算半夏样品中各成分的质量分数。结果见表 4。

3 总结与讨论

2015年版《中国药典》收载的半夏内在质量评价指标为以电位滴定法测定琥珀酸含量，本文采用高效液相色谱法对10批不同产地半夏的琥珀酸含量进行了测定，均符合2015年版《中国药典》半夏项下标准。半夏成分复杂，仅凭琥珀酸定量难以完全代表其药材整体质量，无论在药材质量控制上还是在指导临床用药方面均不具备可靠性^[15-16]。因此，本文结合目前报道的与半夏药效、质量相关的4个代表性成分肌苷、鸟苷、腺苷、盐酸麻黄碱，共同评价半夏药材质量，旨在提升半夏的质量控制方法，为其提供参考数据。

由半夏药材中肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸和盐酸麻黄碱含量测定结果可知，10批药材均含有上述5个代表性成分。不同批次药材间各成分含量存在一定差异，但10批药材中含量最高的为盐酸麻黄碱，含量范围5.89~6.74 mg·g^-1；其次为琥珀酸，含量范围3.24~4.43 mg·g^-1；3个核苷类成分腺苷含量高于鸟苷和肌苷，含量范围分别为2.42~2.70 mg·g^-1、2.02~2.18 mg·g^-1、0.21~0.33 mg·g^-1；盐酸麻黄碱与3个核苷类成分的含量差异较大，其中盐酸麻黄碱与肌苷含量比值在20.42~28.05倍，具有一定的鉴别意义。此外，编号bx-2(四川野生品)的样品所含各肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸和盐酸麻黄碱含量和总量均为最高，编号bx-5(甘肃栽培品)的样品中5个成分总量为最低。

本文采用高效液相色谱法同时测定了不同产地10批半夏药材中肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸和盐酸麻黄碱5个代表性成分的含量，由半夏样品分析结果可以看出，该方法精密度、稳定性和重复性均良好，并具有定性、定量的双重作用，在半夏药效物质基础不明确的情况下，多指标含量测定为有效控制半夏质量，完善其质量标准提供了科学依据。