一测多评法（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）由王智民等^[1]在2006年首先提出，并通过相关实验得到了验证。QAMS法的提出，为试样中多种成分含量测定，提供了一种更为便捷的方法，特别是在中药含量测定中的应用，能满足中药质量控制的要求，是一种较简便的方法。

本文首先对QAMS的原理、研究内容、在中药材及不同剂型药物含量测定中的优势进行了概述，然后对2006年QAMS法提出后的研究应用进行归纳整理，最后对QAMS法现阶段研究应用中遇到的问题进行总结，并进行展望。

1 QAMS法概述 1.1 基本原理

QAMS法是通过待测样中各成分间的内在函数关系，在相应的线性范围内，选择1个性质稳定且易制备的成分作为内参物，从而实现多个待测成分的同步测定，是一种适用于对照品制备难度大，成本高或对照品不稳定的多指标质量评价模式^[2]。

在一定的线性范围，探测器响应与质量或化学物质的量浓度成正比^[2]。在多指标质量评价中，以待测样品中的一种典型易得的成分作为内参物质（s），在应用一测多评法进行质量评价时，建立内参物与其他待测成分（i）之间的相对校正因子RCF（f_si），计算公式如下^[1]：

假设某样品中含有i个组分：

$ {f_{{\rm{si}}}}{\rm{ = }}\frac{{{f_{\rm{s}}}}}{{{f_{\rm{i}}}}} = \frac{{{A_{\rm{s}}}/{C_{\rm{s}}}}}{{{A_{\rm{i}}}/{C_{\rm{i}}}}} $

式中A_s为内参物对照品s峰面积，C_s为内参物对照品s浓度，A_i为某待测成分对照品i峰面积，C_i为某待测成分对照品i浓度。

$ {C_{\rm{i}}} = {f_{{\rm{si}}}} \times {C_{\rm{s}}} \times \frac{{{A_{\rm{i}}}}}{{{A_{\rm{s}}}}} $

式中A_i为供试品中待测成分i的峰面积，C_i为供试品中待测成分i的浓度，A_s为供试品中内参物s的峰面积，C_s为供试品中内参物s的浓度，f_si为内参物s对待测成分i的校正因子。

1.2 QAMS法的研究内容

在确定了要测定的样品后，首先需要对高效液相色谱的条件进行优化，包括使用不同型号的色谱柱，确定检测波长，选择流动相体系、洗脱模式、流速、进样时间等。

除此之外，需要进行一系列方法学考察，包括对线性关系、精密度、稳定性、重复性、加样回收率等的考察。其次是对校正因子的测定，测定校正因子时需要对校正因子的影响因素进行分析，不同仪器、不同色谱柱、不同体积流量、不同柱温等对校正因子都会产生影响，需要进行考察。

最后，需要对QAMS法的准确性、可靠性进行考察，将QAMS法计算结果与外标法测定结果比较，验证结果是否有显著性差异，来判断QAMS法的准确可行性。

1.3 方法在中药含量测定的优势

在对中药进行多种药效成分的综合评价时，中药中化学成分和活性成分多样，复杂还存在着相互作用，使得中药的质量难以准确、全面地表达。通常使用的多指标质量评价模式需要有相应的对照品，但实际应用中部分中药成分的化学对照品的不稳定，难以分离，价格昂贵等原因造成了中药质量控制中对照品匮乏的问题。

QAMS法整合了已有含量测定方法的优势，借助中药的有效成分内在的函数和比例关系，仅使用1个对照品来对多个成分进行同步测定。在缺少对照品的情况下，可通过中药的各成分间的相对校正因子（RCF）^[3]来实现中药多成分的测定。而且，QAMS法适用于药效成分复杂的中药物质含量测定，与其他方法相比该方法节约实验耗材，简化操作步骤，节省测定时间，含量测定结果准确度高。

2 QAMS方法的研究进展

QAMS法首先在2006年，由王智民等^[1]提出。QAMS的原理与校正因子法的原理大致相同^[3]，在建立方法学时，首先要选出1个易制备、性质稳定的待测物为内参物，换算出内参物与各待测成分间的RCF，将其应用于定量测定中。在定量测定时，内参物的浓度按常规方法进行测定，其他待测物的峰位根据保留时间差或相对保留时间值来确定，最后通过RCF结合内参物浓度，计算得到待测成分浓度，从而计算出其含量^[4]。

王智民等^[1]建立了QAMS法在含量测定中的方法学考察模式后，《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2010年版^[5]首次收录QAMS法，确立从单指标向多指标，从指标性成分向药效成分控制的发展方向，但该法的应用仅限于黄连。《中国药典》2015年版一部^[6]不仅新增8个药材应用该法，范围也扩展至饮片、提取物、制剂，相比《中国药典》2010年版一部有大幅度增加。2015年版《中国药典》（四部）收载了多种农药残留化合物的气相色谱检查方法^[7]。图 1为QAMS法自提出后的研究应用情况，由图可知关于QAMS法的研究近几年呈上升趋势。

据统计，目前采用QAMS技术可对中药材及其制剂质量进行评价，找出各种中药的基本来源，评价炮制工艺和炮制产品的质量，并对中药粗提物、中间体和制剂的质量进行评价，原料中农药残留的测定和多成分定量分析等方面得到了广泛的应用。例如，李剑男等^[8]以黄芩苷为内参物，求得了黄芩苷、大黄酚、盐酸小檗碱和大黄素的含量，验证QAMS的准确性。邱学伟等^[9]以肉桂酸为内标，计算肉桂酸、哈巴苷、哈巴俄苷3种成分的含量。何兵等^[10]同时测定双青咽喉片中10种成分并验证了QAMS在双青咽喉片中应用的可行性。申琳等^[11]用于测定丹酚酸A原料药中特定杂质迷迭香酸等4种成分含量。

随着科技发展和分析仪器的更新换代，许多新型仪器被应用于中药的测定，推动了QAMS技术的更广泛应用，如陈岚等^[12]通过GC-MS联用技术建立了测定山药中联苯菊酯等3种农药残留，Wang等^[13]采用HPLC-MS联用仪同时测定黑麦草中6种有效成分，Stekolshchikova等^[14]应用多成分体系定量分析方法在不同质谱条件下测定人参皂苷，Yi等^[15]采用UPLC和UHPLC-qTOF定量分析苦丁茶中18种有效成分，Gu等^[16]也采用单标法对周氏方中的多种成分进行了定量分析，Chen等^[17]应用QAMS法成功鉴定了发酵虫草产品中多种成分，科学有效地应用于系统的虫草产品质量控制。QAMS法也用于HPLC同时测定藏药裸茎金腰^[18]中4个黄酮类化合物的含量，以作为1种新的质量策略应用于控制民族药品。

3 QAMS在成分研究中的应用 3.1 在含皂苷类成分中药中的应用

皂苷的结构多样复杂，药理药效作用多样，一直是科研重点，由于皂苷结构复杂，通过对其结构的修饰和改造，可以得到更多不易制备的化合物，QAMS法的提出，为皂苷类成分的测定提供了更加方便经济的路径，在含皂苷类中药材的测定中得到了广泛应用。

自QAMS法提出以来，应用于中药中皂苷类成分测定的研究不断增加，如袁旭江等^[19]以芹菜素-6，8-C-二葡萄糖苷作为内参物，测定其与另外2种黄酮碳苷的RCF，计算各成分的含量，并验证了QAMS的准确性。朱晶晶等^[20]利用人参皂苷Rb₁和其他皂苷的RCF同步测定皂苷含量，并将结果与外标法所测结果进行比较，进一步验证了QAMS校正因子在人参药材中应用的可靠性。王玲娜等^[21]应用QAMS法计算金银花中8种活性成分含量，其结果与外标法测定值无显著性差异。刘玉杰等^[22]同时测定熟三七中7个皂苷，验证了QAMS法的应用价值。郭玉岩等^[23]以类叶牡丹皂苷成分cauloside G为内参物，计算其指标性皂苷的量。Li等^[24]利用单标记法定量分析刺枣种子中4个皂苷的含量，建立了刺枣种子中4个皂苷的单标记多组分分析方法。QAMS法在皂苷类成分测定中的应用，其准确性和可靠性也得到了验证，方法成熟，为中药材中皂苷的测定提供了更简单方便的测定方法。

3.2 QAMS在测定其他类中药含量中的应用

自QAMS法创始以来，该方法的应用范围也在逐渐扩展，表 1对QAMS法近年在其他代表性中药多成分含量测定中的应用进行了总结。

3.3 在不同剂型药物中的应用

中药复方比单一中药化学成分更加复杂，测定标准的制定更加困难，在测定的准确性、可行性方面要求更加严格，而随着科研技术的不断成熟，QAMS法的应用不再局限于传统的中药成分测定，在不同剂型的药物成分测定方面也有了应用（如表 2~6），为不同制剂复杂成分的测定提供了参考依据，方法指南。

除此之外，还有注射剂如应用单标记多成分定量分析测定中药复方苦木注射液^[74]、舒血宁注射液^[75]等。

4 QAMS法研究过程中影响因素分析 4.1 对照品纯度标定问题

鉴于大多种类的待测成分对照品价格昂贵或不易获得，各实验室通常需要自制对照品。在使用自制对照品时，通常都是先采用MS、IR和NMR等确定其结构^[76-77]，然后再用液相色谱来进行纯度检测^[76-77]。不同实验室在进行对照品纯度测定时，由于采用不同的方法，对于同一种化合物纯度测定的结果会存在一定误差，从而对QAMS法的准确性造成影响。对于这种情况，当使用实验室自制的对照品时，建议使用核磁定量法^[78]进行纯度测定，最大限度地减少如仪器因素及操作人员因素等造成的影响，减少纯度标定问题造成的实验误差。

4.2 待测成分色谱峰定位方式选择

待测成分色谱峰定位方式的选择是QAMS法应用中相当重要的1个步骤，因为其影响着QAMS法含量测定的准确性。目前大部分的研究采用相对保留值定位或者在相同的分析条件下，当使用不同的色谱柱时，利用其成分的保留时间存在简单的线性关系^[79]进行测定。二者各有优点，采用相对保留值进行定位时，即利用待测成分与内参物的保留时间的比值并结合相关图谱进行色谱峰的定位，此方法的准确性高；采用不同色谱柱对待测成分进行定位时，可以校正保留时间的绝对误差，提高保留时间的重现性^[79]。目前大部分实验都是利用保留时间或相对保留时间来进行峰定位，若考虑死时间的影响，则建议使用调整保留时间来进行更精确的峰定位。

4.3 待测成分检测波长的选择

选择合适的检测波长，是QAMS法急需解决的问题。目前在QAMS的测定中，大多使用的检测器为紫外检测器^[25-26]，尤其是光电二极管阵列检测器（PDA），如黎江华等^[22]在应用QAMS法时采用PDA测定熟三七中多种不同皂苷类成分的含量。PDA和普通可变波长紫外-可见分光检测器不同之处是进入流动池的光不再是单色光^[80]，PDA可得任意紫外波长的色谱图和任意时间的光谱图可提供成分的定性定量信息。

在应用一测多评法进行含量测定时，需要考虑待测成分是否为同一类化合物，即是否具有相同母核。当具有相同母核时，可选择最大吸收波长为检测波长；当具有不同母核时，可观察各待测成分吸收波长的范围，如果各待测物之间有共有的吸收波长区，可选择共有的吸收波长区为检测波长，如果各待测成分吸收波长之间差距较大，可在相应的时间段内设置不同的检测波长进行测定。

4.4 准确度的判断

对QAMS法准确度判断，大多将外标法实测值与QAMS法计算的结果进行t-检验评价，如果2种方法测定结果无显著性差异，则说明该法是准确的，如黄帅等^[21]在应用QAMS法测定柴胡药材中几种不同皂苷的含量时，采用t-检验法来评价QAMS法的准确性和科学性。另外还有利用夹角余弦算法来证明QAMS法计算结果与外标法有无显著性差异，如陈驰等^[19]在应用QAMS法测定人参中不同人参皂苷的含量时就是应用的此方法来进行验证。

4.5 其他影响因素

其他因素的影响，比如：①参照物的选择问题。由表 1可知，在选择内参物时，一般选择含量大，稳定性好，制备简单，检测简单的成分。②RCF的重现性。为了得到更准确的RCF，建议进行不同仪器及色谱柱^{[11, 19, 21-22]}、不同实验室^[21]、不同流速^[32]、不同检测波长^[19]、不同柱温^{[19, 32]}的因素考察，避免出现不同的RCF，导致实际测量值与计算值出现偏差。

5 小结

QAMS法的提出，解决了参比物质价格高或制备困难等给成分指标检测带来的难题，实现了多指标中药成分的同时检测，也提供了更好的中药质量评价新模型的分析方法。目前，QAMS法还是主要应用于单味中药中相似结构成分的测定，在较为复杂的复方制剂测定中的应用仍较为局限，还需要进一步的提高和优化。为使QAMS法在药材多指标组分检测中得到广泛应用，应积极开发和深入研究QAMS法的相关技术，完善QAMS法的不足之处，这不仅有利于加快中药质量控制和质量评价的发展，也有利于中药国际化。