超高效液相色谱-串联质谱法测定抗疲劳类保健食品及补肾壮阳类中成药中15种添加药物

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药物分析杂志

2019, Vol. 39

Issue (6): 1127-1133. DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.06.22

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本文结构
摘要
关键词
Abstract
Keywords
1 仪器、试剂与试药
1.1 仪器
1.2 对照品与试剂
1.3 样品信息
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液
2.1.2 供试品溶液
2.2 色谱-质谱条件
2.2.1 色谱条件
2.2.2 质谱条件
表1(Table 1)
2.3 线性关系考察
表2(Table 2)
2.4 检测下限和定量下限
2.5 精密度试验
2.6 加样回收率试验
表3(Table 3)
2.7 重复性试验
2.8 样品测定
表4(Table 4)
3 讨论
3.1 质谱条件的优化
3.2 流动相的选择
3.3 前处理的优化
参考文献

安全监测

引用本文 [复制中英文]

李卓, 张亚锋, 孙晓, 李尔春, 王永姣, 曾桥. 超高效液相色谱-串联质谱法测定抗疲劳类保健食品及补肾壮阳类中成药中15种添加药物[J]. 药物分析杂志, 2019, 39(6): 1127-1133. DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.06.22.

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LI Zhuo, ZHANG Ya-feng, SUN Xiao, LI Er-chun, WANG Yong-jiao, ZENG Qiao. Determination of 15 additives in invigorant Chinese patent medicines and antifatigue dietary supplements by UPLC-MS/MS[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2019, 39(6): 1127-1133. DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.06.22.

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基金项目

陕西省科技厅重点研发计划（2017SF-311）；西安市碑林区应用技术研发项目（GX1706）

第一作者

李卓, Tel:(029)85513291;E-mail:1984zhuozi@163.com。

通信作者

张亚锋, Tel:(029)85513291;E-mail:27327242@qq.com
曾桥, Tel:13325382300;E-mail:383069078@qq.com

文章历史

修改日期：2019-03-20

Contents Abstract Full text Figures/Tables PDF

超高效液相色谱-串联质谱法测定抗疲劳类保健食品及补肾壮阳类中成药中15种添加药物

李卓 ¹, 张亚锋 ¹, 孙晓 ¹, 李尔春 ¹, 王永姣 ¹, 曾桥 ²

1. 西安市食品药品检验所, 西安 710054;
2. 陕西科技大学食品与生物工程学院, 西安 710021

修改日期：2019-03-20

基金项目：陕西省科技厅重点研发计划（2017SF-311）；西安市碑林区应用技术研发项目（GX1706）

第一作者：李卓, Tel:(029)85513291;E-mail:1984zhuozi@163.com

通信作者：张亚锋, Tel:(029)85513291;E-mail:27327242@qq.com
曾桥, Tel:13325382300;E-mail:383069078@qq.com

摘要：目的：建立一种测定补肾壮阳类中成药及抗疲劳类保健食品中15种非法添加药物的超高效液相-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法。方法：样品经甲醇超声提取后，采用Thermo C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）分离，以含0.1%甲酸的乙腈-含0.1%甲酸的10 mmoL·L^-1乙酸铵为流动相，梯度洗脱，多反应监测测定15种非法添加药物（达那唑、司坦唑醇、甲磺酸酚妥拉明、甲睾酮、豪莫西地那非、枸橼酸羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、那莫西地那非、伪伐地那非、盐酸育亨宾、氨基他达拉非、西地那非、他达拉非、盐酸伐地那非、丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非）。结果：15种非法添加药物在2.7~679 ng·mL^-1范围内线性关系良好，相关系数（r²）均大于0.995，平均回收率70%~120%。所检26批样品中9批检出西地那非、1批检出丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非，阳性率为38%。结论：本方法准确，灵敏度高，专属性好，检测限低，可用于中成药及保健食品中15种非法添加药物的定性及定量测定。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱法中成药保健食品非法添加药物西地那非丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非

Determination of 15 additives in invigorant Chinese patent medicines and antifatigue dietary supplements by UPLC-MS/MS

LI Zhuo¹, ZHANG Ya-feng¹, SUN Xiao¹, LI Er-chun¹, WANG Yong-jiao¹, ZENG Qiao²

1. Xi'an Institute for Food and Drug Control, Xi'an 710054, China;
2. Shaanxi University of Science and Technology, Xi'an 710021, China

Abstract: Objective: To establish an UPLC-MS/MS method for simultaneous determination of 15 illegal additives in invigorant Chinese patent medicines and antifatigue dietary supplements.Methods: After ultrasonic extracted by methanol, the sample was separated on Thermo C₁₈ (100 mm×2.1 mm, 1.9 μm)column with gradient elution.The mobile phase consisted of acetonitrile containing 0.1% formic acid^-1 0 mmoL·L^-1 ammonium acetate containing 0.1% formic acid at a flow rate of 0.2 mL·min^-1. Multiple reactions monitoring mode was used to quantify the 15 illegally added additives(danazole, stanzolol, phentolamine mesylate, methyltestosterone, homosildenafil, hydroxyhomosildenafil, thioaildenafil, namosidenafil, pseudovardenafil, vardenafil, yohimbine hydrochloride, amino tadalafil, sildenafil, tadalafil, vardenafil hydrochloride and propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil).Results: 15 illegal additives had good linear relationship in the range of 2.7-679 ng·mL^-1 with correlation coefficients (r²) above 0.995, and the average recoveries were 70%-120%.Sildenafil was detected in 9 batches and propoxyphenyl-thiohydroxysildenafil was detected in 1 batch out of 26 samples.The positive rate was 38%.Conclusion: This method is accurate, sensitive, specific with low detection limit.It can be used for the qualitative and quantitative determination of 15 illegal additives in Chinese patent medicines and dietary supplements.

Keywords: UPLC-MS/MS Chinese patent medicine dietary supplement illegal drugs sildenafil propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil

近年来，广大人民在生活水平上有了很大的提高，对许多中成药和保健品的的需求量越来越大，随着许多不法分子在利益驱使下，在中成药以及保健品中非法添加补肾壮阳类药^[1-4]。补肾壮阳类药作为处方药，有严格的服用剂量要求，患者在不知情的情况下长期服用这些非法添加量参差不齐的产品，可能会因为摄入过量引起严重的不良反应，与某些药物同服还会发生药物相互作用，导致难以预测的严重后果，使得广大消费者在身体上受到不同程度的伤害^[5-6]。

对于此类问题，食药监总局在2009年发布了《药品检验补充方法和检验项目批准件》（批准件编号2009030）的相关标准，标准中规定了11种非法添加药物。然而市场上流通的补肾壮阳类非法添加药物远不止这些^[7-12]，本实验采用超高液相色谱-串联质谱的方法，建立多种类补肾壮阳类非法添加药物[磷酸二酯酶-5（PDE5）抑制剂、蛋白同化制剂、α-肾上腺素受体阻滞剂]的快速定性定量测定方法，为此类非法添加物的监测检查提供技术支持，保障人民群众的身体健康。

1 仪器、试剂与试药 1.1 仪器

超高液相色谱－质谱联用仪Ulimate3000-TSQ Quantiva（赛默飞科技有限公司）；KQ-700VDB双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器公司，频率80 kHz；功率700 W）；Milli-Q Integral 5制水机（密理博有限公司）；ME204E万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；MS105十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

1.2 对照品与试剂

对照品达那唑（批号100126-200402，含量99.30%）、司坦唑醇（批号100209-201003，含量99.80%）、甲磺酸酚妥拉明（批号100110-200602，含量99.90%）、甲睾酮（批号100172-200503，含量100%）、豪莫西地那非（批号520046-201401，含量99.60%）、枸橼酸羟基豪莫西地那非（批号510032-201301，含量98.80%）、硫代艾地那非（批号520048-201401，含量99.50%）、那莫西地那非（批号520040-201401，含量99.50%）、伪伐地那非（批号520041-201401，含量100%）、盐酸育亨宾（批号520024-201401，含量99.30%）、氨基他达拉非（批号520042-201401，含量99.80%）、西地那非（批号510068-201401，含量99.90%）均购自中国食品药品检定研究院；他达拉非（批号8-SSR-172-1，含量98%）购自TRC；盐酸伐地那非（批号21127，含量95%）购自Dr.Ehrenstorfer GmbH；丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（含量98.5%，高效液相色谱法测定）为天津市食品药品检验所合成纯化^[13]。

甲醇、乙腈（色谱纯，Fisher公司）、甲酸、乙酸铵（质谱级，Aladin公司）、水（超纯水，由Milli-Q Integral 5制得）。

1.3 样品信息

23批不同品牌的保健食品和3批中成药均购自不同药店或由公安局提供。

2 方法与结果 2.1 溶液制备 2.1.1 对照品溶液

分别准确称取适量上述对照品，用甲醇配制成500 μg·mL^-1的单一成分对照品储备液，于4 ℃避光保存。

取甲磺酸酚妥拉明对照品储备液0.05 mL，其他成分对照品储备液各0.5 mL，置于同一25 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

取混合对照品溶液适量，用甲醇配制系列浓度的混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液

精密称取样品（颗粒剂、片剂取适量研细；胶囊剂取内容物适量研细；口服液充分摇匀、软胶囊取适量内容物混匀）0.5 g于25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声（80 kHz，700 W）处理30 min，取出放冷至室温，加甲醇定容至刻度，摇匀，4 ℃低温离心（6 000 r·min^-1）5 min，上清液用0.22 μm有机系微孔滤膜滤过，即得。

2.2 色谱-质谱条件 2.2.1 色谱条件

Thermo C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）；柱温30 ℃；流速0.2 mL·min^-1；进样体积2 μL；流动相：含0.1%甲酸的10 mmol·L^-1乙酸铵溶液（A）-含0.1%甲酸的乙腈（B），梯度洗脱（0~3 min，20%B；3~6 min，20%B→30%B；6~10 min，30%B；10~13 min，30% B→80%B；13~17 min，80%B；17~18 min，80%B→20%B；18~22 min，20%B）。

2.2.2 质谱条件

电离方式：电喷雾离子源；电离模式：正离子扫描；检测方式：多反应检测（MRM）；雾化气：N₂；碰撞气：Ar；雾化温度：300 ℃；离子传输管温度：350 ℃；毛细管电压：3.5 kV；鞘气流速：4.57 L·min^-1；辅助气流速：11.36 L·min^-1。各目标化合物监测离子对及相关参数设定见表 1，总离子流图见图 1。

表 1 15种添加物的保留时间及质谱参数 Tab.1 Retention time and spectrometric parameters of 15 additives

编号（No.）	添加物（additive）	保留时间（retention time）/min	母离子（precursor）m/z	子离子（product ion） m/z	传输电压（RF lens）/V	碰撞能量（collision energy）/V
1	盐酸育亨宾（yohimbine hydrochloride）	5.70	355.2	144.1^*，212.1	82	30，21
2	甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate）	7.75	282.2	91.1，212.0^*	61	37，19
3	盐酸伐地那非（vardenafil）	9.02	489.3	151.1^*，312.2	138	54，33
4	枸橼酸羟基豪莫西地那非（hydroxyhomosildenafil）	9.71	505.3	377.2，487.2^*	119	25，22
5	西地那非（sildenafil）	9.91	475.2	283.1，311.1^*	123	33，25
6	豪莫西地那非（homosildenafil）	10.36	489.3	283.1^*，311.1	121	33，26
7	氨基他达拉非（aminotadalafil）	12.58	391.2	204.0，269.1^*	70	53，15
8	他达拉非（Tadalafil）	13.48	390.2	204.1，268.1^*	71	55，16
9	硫代艾地那非（thioaildenafil）	14.06	505.25	393.1^*，448.1	118	25，25
10	丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil）	14.23	535.3	299.1，517.2^*	125	33，24
11	甲睾酮（methyltestosterone）	14.46	303.3	109.1^*，285.2	61	23，16
12	伪伐地那非（pseudovardenafil）	14.60	460.2	377.1，432.2^*	134	51，31
13	那莫西地那非（norneosildenafil）	15.06	460.2	329.2^*，377.1	134	30，31
14	达那唑（danazole）	15.19	338.2	165.0^*，310.2	73	53，19
15	司坦唑醇（stanozolol）	15.30	329.3	107.1^*，189.2	112	40，32
注（note）：*表示定量离子（indicated as quantitative ion）

表 1 15种添加物的保留时间及质谱参数 Tab.1 Retention time and spectrometric parameters of 15 additives

1~15.同表 1 (same as Tab. 1) 图 1 15种添加物总离子流图 Fig.1 Total ion chromatogram of 15 additives

2.3 线性关系考察

取“2.1.1”项下系列浓度的混合对照品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行测定，以质量浓度（ng·mL^-1）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，15种药物的回归方程及线性范围见表 2。

表 2 15种添加物的线性范围、相关系数及方法检测下限、定量下限 Tab.2 Linear range, correlation coefficient Limits of detection, limits of quantitative of 15 additives

添加物（additives）	线性范围（linear range）/ （mg·L^-1）	回归方程（regression equation）	r²	定量下限（limit of quantitation）/ （mg·kg^-1）	检测下限（limit of detection）/ （mg·kg^-1）
甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate）	2.7~54.4	Y=7.677×10⁴X-3.095×10⁴	0.999 9	0.005 4	0.016
甲睾酮（methyltestosterone）	30.8~616	Y=2.410×10³X-9.204×10³	0.999 6	0.062	0.18
司坦唑醇（stanozolol）	26.2~524	Y=5.013×10³X+3.359×10⁴	0.999 2	0.054	0.16
达那唑（danazole）	30.7~613	Y=4.614×10³X+9.393×10³	0.999 7	0.12	0.37
盐酸育亨宾（yohimbine hydrochloride）	28.2~563	Y=2.702×10⁴X-1.469×10⁴	1.000	0.011	0.034
他达拉非（tadalafil）	25.5~510	Y=4.952×10³X-3.126×10⁴	0.999 7	0.010	0.031
氨基他达拉非（aminotadalafil）	30.1~602	Y=4.454×10³X-4.198×10⁴	0.998 9	0.060	0.18
伪伐地那非（pseudovardenafil）	26.35~527	Y=3.184×10³X-2.315×10⁴	0.998 9	0.011	0.032
那莫西地那非（norneosildenafil）	26.9~538	Y=0.9213×10³X-4.758×10³	0.995 0	0.054	0.16
西地那非（sildenafil）	27.1~541	Y=2.876×10³X-1.669×10⁴	0.999 7	0.011	0.033
盐酸伐地那非（vardenafil）	25.5~510	Y=1.010×10⁴X-4.078×10⁴	1.000	0.010	0.031
豪莫西地那非（homosildenafil）	25~501	Y=2.468×10³X-1.626×10⁴	0.999 5	0.050	0.15
硫代艾地那非（thioaildenafil）	25.8~516	Y=4.347×10³X-3.575×10⁴	0.997 5	0.052	0.15
枸橼酸羟基豪莫西地那非（hydroxyhomosildenafil）	34~679	Y=4.439×10³X-3.462×10⁴	0.999 6	0.014	0.040
丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil）	26.8~535	Y=3.649×10³X-3.244×10⁴	0.999 3	0.054	0.16

表 2 15种添加物的线性范围、相关系数及方法检测下限、定量下限 Tab.2 Linear range, correlation coefficient Limits of detection, limits of quantitative of 15 additives

2.4 检测下限和定量下限

取“2.1.1”项下配制的混合对照品溶液适量，用甲醇稀释，按“2.2”项下色谱-质谱条件进行测定，以3倍信噪比（S/N）时测量值为方法的检测下限；以10倍信噪比（S/N）时测量值为方法的定量下限。结果见表 2。

2.5 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液2 μL，连续进样6次，记录峰面积，计算达那唑、司坦唑醇、甲磺酸酚妥拉明、甲睾酮、豪莫西地那非、枸橼酸羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、那莫西地那非、伪伐地那非、盐酸育亨宾、氨基他达拉非、西地那非、他达拉非、盐酸伐地那非、丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非峰面积的RSD（n=6）分别为3.7%、2.4%、0.82%、4.7%、1.3%、0.91%、2.3%、8.2%、2.5%、1.5%、0.79%、1.6%、2.4%、1.4%、2.4%，均符合要求。

2.6 加样回收率试验

精密称取固体基质阴性样品（缓解体加疲劳粉）和液体基质阴性样品（威士雅洋参口服液）各9份，加入混合对照品溶液适量，并用氮气吹干，制成高、中、低三浓度三平行的加标回收供试溶液，按照“2.1.2”项下方法处理该18份样品。按“2.2”项下条件进样测定，计算各组分的回收率和RSD，结果见表 3。结果表明无论在固体基质还是液体基质中，15种添加物的平均回收率均在70%~120%之间，回收率良好。

表 3 15种添加物回收率（n=3） Tab.3 Recoveries of 15 additives

添加物（additive）	加标量（added）	液体基质（liquid-based）		固体基质（solid-based）
添加物（additive）	加标量（added）	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%
盐酸育亨宾（yohimbine hydrochloride）	低（low）	74.5	1.90	82.4	6.3
	中（midlle）	76.0	1.42	82.8	7.6
	高（high）	78.2	3.79	81.0	4.4
盐酸伐地那非（vardenafil）	低（low）	88.0	3.02	108.2	7.1
	中（midlle）	88.0	2.15	103.8	7.2
	高（high）	90.3	4.13	102.6	3.9
甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate）	低（low）	75.3	4.62	73.2	3.7
	中（midlle）	73.6	2.00	70.1	4.3
	高（high）	75.1	3.29	70.8	3.6
枸橼酸羟基豪莫西地那非（hydroxyhomosildenafil）	低（low）	83.2	1.91	77.2	5.0
	中（midlle）	78.0	1.30	71.5	5.0
	高（high）	80.3	4.55	72.4	2.2
西地那非（sildenafil）	低（low）	88.8	6.28	81.2	7.2
	中（midlle）	81.2	1.63	75.5	4.7
	高（high）	81.6	4.39	72.4	6.4
豪莫西地那非（homosildenafil）	低（low）	85.3	3.68	77.9	5.4
	中（midlle）	80.8	2.14	73.5	4.8
	高（high）	81.5	3.65	71.3	4.0
氨基他达拉非（aminotadalafil）	低（low）	85.9	3.46	76.9	6.7
	中（midlle）	74.2	3.89	72.7	7.2
	高（high）	80.0	4.59	75.4	4.7
他达拉非（tadalafil）	低（low）	85.6	4.72	77.4	6.3
	中（midlle）	79.6	2.04	72.0	6.8
	高（high）	77.9	4.46	70.8	2.8
硫代艾地那非（thioaildenafil）	低（low）	72.3	3.37	71.9	7.8
	中（midlle）	71.6	4.96	70.6	7.4
	高（high）	78.5	8.61	70.3	5.7
丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil）	低（low）	78.1	3.64	75.7	3.8
	中（midlle）	75.4	4.73	72.9	6.0
	高（high）	80.3	4.82	72.5	1.4
甲睾酮（methyltestosterone）	低（low）	71.3	2.80	70.5	8.2
	中（midlle）	73.9	5.56	73.8	4.9
	高（high）	74.8	7.90	74.6	8.8
伪伐地那非（pseudovardenafil）	低（low）	85.7	3.28	74.2	5.0
	中（midlle）	78.5	2.04	71.5	5.0
	高（high）	84.9	5.79	72.7	5.4
那莫西地那非（norneosildenafil）	低（low）	86.3	2.63	76.1	7.8
	中（midlle）	80.0	5.34	82.9	7.8
	高（high）	117.7	8.34	82.7	2.59
达那唑（danazole）	低（low）	72.8	8.47	74.3	4.5
	中（midlle）	76.5	6.53	70.3	9.6
	高（high）	75.0	3.09	73.8	3.6
司坦唑醇（stanozolol）	低（low）	70.3	6.42	70.3	6.6
	中（midlle）	70.2	5.29	70.9	9.6
	高（high）	76.2	4.54	71.6	2.0

表 3 15种添加物回收率（n=3） Tab.3 Recoveries of 15 additives

2.7 重复性试验

精密称取固体基质和液体基质阳性样品各6份，分别按“2.1.2”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.2”项下色谱-质谱条件进行测定，通过标准曲线分别计算含量，结果检出西地那非10 462 mg·kg^-1（RSD=2.2%），丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非8 854 mg·kg^-1（RSD=1.7%），重复性良好。

2.8 样品测定

取23批保健食品和3批中成药样品，按照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别按“2.2”项下色谱-质谱条件进样测定，如果供试品中色谱峰保留时间与混合品溶液中的某种组分一致（变化范围在±2.5%之内）；试样中定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合对照品溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 4规定的范围，则可判定为试样中存在该组分。26批样品中有9批样品检出西地那非、有1批样品检出丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非，阳性率为38%。

表 4 相对离子丰度最大允许偏差^[14-15] Tab.4 Maximum allowable deviation of relative ion abundance ratio

3 讨论 3.1 质谱条件的优化

分别在正、负离子模式下考察了15种添加物的质谱响应，发现这15种药物的[M+H]⁺峰响应强度大且稳定，故选择正离子模式进行检测。给予母离子不同的碰撞能量，对子离子进行优化，每个化合物选择2个响应值高且稳定的子离子，最终在优化条件下确定响应较强的离子作为定量离子，另一离子作为定性离子。

3.2 流动相的选择

比较了水-乙腈、0.1%甲酸水-含0.1%甲酸的乙腈、含0.1%甲酸的10 mmol·L^-1乙酸铵-含0.1%甲酸的乙腈3种体系的流动相，发现15种添加物在含有甲酸的流动相中的质谱强度明显大于不含甲酸的流动相体系。样品中枸橼酸羟基豪莫西地那非色谱峰在不含乙酸铵的流动相中有明显的拖尾现象，见图 2。因此选择含0.1%甲酸的10 mmol·L^-1乙酸铵-含0.1%甲酸的乙腈为流动相。最后对梯度洗脱进行了优化，使得伪伐地那非与那莫西地那非、盐酸伐地那非与豪莫西地那非、硫代艾地那非与枸橼酸羟基豪莫西地那非这3对母离子相同的物质有较好的分离度，从而保证了15种添加物的准确测定。

图 2 枸橼酸羟基豪莫西地那非峰形对比 Fig.2 Ion chromatogram of hydroxyhomosildenafil

3.3 前处理的优化

考察了不同超声时间（5、15、30、60 min）对提取率的影响。结果发现在超声5~30 min时，随着超声时间的增大，各目标物的提取率有明显的增高，而在超声30~60 min之间趋于平缓。同时也发现，有些供试品溶液在室温时呈澄清，在低温冷藏后会形成絮状沉淀，为了避免更多的杂质进入质谱影响测定，最终选定“超声30 min、4 ℃低温离心”为本实验的前处理方法。

参考文献

[1]	李可, 郭常川, 石峰, 等. 补肾壮阳类中成药和保健品中添加5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂及其类似物检测方法研究进展[J]. 药物分析杂志, 2018, 38(4): 566. LI K, GUO CC, SHI F, et al. Research progress in determination technologies for adulterated phosphodiesterase-5(PDE-5)inhibitors and their analogue in invigorant herbal medicines and dietary supplements[J]. Chin J Pharm Anal, 2018, 38(4): 566.
[2]	宫旭, 芦丽, 冯有龙, 等. UPLC-MS/MS法测定减肥降脂通便三类保健食品中添加的37种药物[J]. 药物分析杂志, 2016, 36(5): 918. GONG X, LU L, FENG YL, et al. Determination of 37 drugs illegally added in weight-losing, lipid-lowering and laxative health foods by UPLC-MS/MS[J]. Chin J Pharm Anal, 2016, 36(5): 918.
[3]	黄朝辉, 蔡丹丹, 陈仲益. 保健食品中非法添加西地那非类似物的分析鉴定[J]. 药物分析杂志, 2015, 35(4): 694. HUANG ZH, CAI DD, CHEN ZY, et al. Analysis and identification of illegally added sildenafil analogue in health food[J]. Chin J Pharm Anal, 2015, 35(4): 694.
[4]	段琼, 马春艳, 封淑华. 保健酒及酒类制品中非法添加PDE-5抑制剂及其衍生物的监测及结果分析[J]. 药物分析杂志, 2017, 37(2): 277. DUAN Q, MA CY, FENG SH. Investigation and analysis of the PDE-5 inhibitors and their analogues in tonic wines and wine products[J]. Chin J Pharm Anal, 2017, 37(2): 277.
[5]	舒展, 王琤帅, 郑篮君, 等. 基于诊断离子策略的中药及保健食品中添加PDE5型抑制剂的快速筛查方法[J]. 药物分析杂志, 2017, 37(12): 2245. SHU Z, WANG CS, ZHENG LJ, et al. Rapid screening of PDE5 inhibitors adulterants in traditional Chinese medicine and dietary supplements by diagnostic fragment ion strategy[J]. Chin J Pharm Anal, 2017, 37(12): 2245.
[6]	胡婷婷, 芦春梅, 杨璐, 等. HPLC-MS/MS法检测抗疲劳类保健品中的达泊西汀[J]. 中国卫生检验杂志, 2017, 37(10): 277. HU TT, LU CM, YANG L, et al. Determination of dapoxetine in anti-fatigue health care products by HPLC-MS/MS[J]. Chin J Health Lab Technol, 2017, 37(2): 277.
[7]	宁霄, 张伟清, 王钢力, 等. 保健食品中非法添加药物的检测现状及筛查策略研究[J]. 食品安全质量检测学报, 2015, 6(5): 1876. NING X, ZHANG WQ, WANG GL, et al. Detection status and screening strategy of illegally added drugs in healthy food[J]. J Food Saf Qual, 2015, 6(5): 1876.
[8]	黄芳, 吴惠勤, 黄晓兰, 等. 高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健品及中成药中非法添加的17种壮阳类化学药[J]. 色谱, 2017, 37(3): 277. HUANG F, WU HQ, HUANG XL, et al. Simultaneous determination of 17 aphrodisiac chemical drugs illegally added in health products and chinese patent medicines by high performance liquid chromatograghy-tandem mass spectrometry[J]. Chin J Chromatogr, 2017, 37(2): 277.
[9]	李涛, 袁磊, 王建山, 等. 超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱法快速筛查和鉴定保健食品中非法添加的新型西地那非类衍生物[J]. 食品安全质量检测学报, 2017, 8(10): 3391. LI T, YUAN L, WANG JS, et al. Screening and identification of sildenafil analogues illegally added in healthy foods by ultra performance liquid chromatography-triple quadrupole linear/ion trap of mass spectrometry[J]. J Food Saf Qual, 2017, 8(10): 3391.
[10]	王永姣, 张亚锋, 李荣, 等. 保健食品中非法添加降糖药物的测定方法研究[J]. 安徽医药, 2016, 20(12): 2269. WANG YJ, ZHANG YF, LI R, et al. Determination of illegal addition of hypoglycemic substances to health foods[J]. Anhui Med Pharm J, 2016, 20(12): 2269. DOI:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.12.017
[11]	徐硕, 金鹏飞, 徐文峰, 等. 补肾壮阳类药品中非法添加化学药物检测技术的研究进展[J]. 西北药学, 2017, 32(5): 677. XU S, JIN PF, XU WF, et al. Research advance on analytical technologies of illegally adulterated chemical sub-stances in medicines for invigorants[J]. Northwest Pharm J, 2017, 32(5): 677. DOI:10.3969/j.issn.1004-2407.2017.05.037
[12]	张晓光, 李强, 孙磊, 等. 超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查保健品中23种非法添加西药成分[J]. 食品科学, 2015, 36(14): 187. ZHANG XG, LI Q, SUN L, et al. Rapid Screening and confirmation of 23 illicit western medicine components in health food products by ultra high performance liquid chromatography-orbitrap high resolution mass spectrometry[J]. J Food Sci, 2015, 36(14): 187. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201514036
[13]	吴燕, 李华龙, 米亚娴, 等. 中药及保健食品中新型PDE5抑制剂的检测研究[J]. 药物分析杂志, 2016, 36(1): 117. WU Y, LI HL, MI YX, et al. Study on the detection of new PDE5 inhibitor in traditional Chinese medicine and health food[J]. Chin J Pharm Anal, 2016, 36(1): 117.
[14]	国家食品药品监督管理总局.BJS 201710保健食品中75种非法添加化学药物的检测[S].2017 China Food and Drug Administration.BJS 201710 Detection of 75 Kinds of Illegally Added Chemical Drugs in Health Food[S].2017
[15]	国家食品药品监督管理总局.BJS 201701食品中西布曲明等化合物的测定[S].2017 China Food and Drug Administration.BJS 201701 Detection of sibutramine and other compounds in food[S].2017

表 1 15种添加物的保留时间及质谱参数 Tab.1 Retention time and spectrometric parameters of 15 additives

编号（No.）	添加物（additive）	保留时间（retention time）/min	母离子（precursor）m/z	子离子（product ion） m/z	传输电压（RF lens）/V	碰撞能量（collision energy）/V
1	盐酸育亨宾（yohimbine hydrochloride）	5.70	355.2	144.1^*，212.1	82	30，21
2	甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate）	7.75	282.2	91.1，212.0^*	61	37，19
3	盐酸伐地那非（vardenafil）	9.02	489.3	151.1^*，312.2	138	54，33
4	枸橼酸羟基豪莫西地那非（hydroxyhomosildenafil）	9.71	505.3	377.2，487.2^*	119	25，22
5	西地那非（sildenafil）	9.91	475.2	283.1，311.1^*	123	33，25
6	豪莫西地那非（homosildenafil）	10.36	489.3	283.1^*，311.1	121	33，26
7	氨基他达拉非（aminotadalafil）	12.58	391.2	204.0，269.1^*	70	53，15
8	他达拉非（Tadalafil）	13.48	390.2	204.1，268.1^*	71	55，16
9	硫代艾地那非（thioaildenafil）	14.06	505.25	393.1^*，448.1	118	25，25
10	丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil）	14.23	535.3	299.1，517.2^*	125	33，24
11	甲睾酮（methyltestosterone）	14.46	303.3	109.1^*，285.2	61	23，16
12	伪伐地那非（pseudovardenafil）	14.60	460.2	377.1，432.2^*	134	51，31
13	那莫西地那非（norneosildenafil）	15.06	460.2	329.2^*，377.1	134	30，31
14	达那唑（danazole）	15.19	338.2	165.0^*，310.2	73	53，19
15	司坦唑醇（stanozolol）	15.30	329.3	107.1^*，189.2	112	40，32
注（note）：*表示定量离子（indicated as quantitative ion）

表 1 15种添加物的保留时间及质谱参数 Tab.1 Retention time and spectrometric parameters of 15 additives

1~15.同表 1 (same as Tab. 1) 图 1 15种添加物总离子流图 Fig.1 Total ion chromatogram of 15 additives

表 2 15种添加物的线性范围、相关系数及方法检测下限、定量下限 Tab.2 Linear range, correlation coefficient Limits of detection, limits of quantitative of 15 additives

添加物（additives）	线性范围（linear range）/ （mg·L^-1）	回归方程（regression equation）	r²	定量下限（limit of quantitation）/ （mg·kg^-1）	检测下限（limit of detection）/ （mg·kg^-1）
甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate）	2.7~54.4	Y=7.677×10⁴X-3.095×10⁴	0.999 9	0.005 4	0.016
甲睾酮（methyltestosterone）	30.8~616	Y=2.410×10³X-9.204×10³	0.999 6	0.062	0.18
司坦唑醇（stanozolol）	26.2~524	Y=5.013×10³X+3.359×10⁴	0.999 2	0.054	0.16
达那唑（danazole）	30.7~613	Y=4.614×10³X+9.393×10³	0.999 7	0.12	0.37
盐酸育亨宾（yohimbine hydrochloride）	28.2~563	Y=2.702×10⁴X-1.469×10⁴	1.000	0.011	0.034
他达拉非（tadalafil）	25.5~510	Y=4.952×10³X-3.126×10⁴	0.999 7	0.010	0.031
氨基他达拉非（aminotadalafil）	30.1~602	Y=4.454×10³X-4.198×10⁴	0.998 9	0.060	0.18
伪伐地那非（pseudovardenafil）	26.35~527	Y=3.184×10³X-2.315×10⁴	0.998 9	0.011	0.032
那莫西地那非（norneosildenafil）	26.9~538	Y=0.9213×10³X-4.758×10³	0.995 0	0.054	0.16
西地那非（sildenafil）	27.1~541	Y=2.876×10³X-1.669×10⁴	0.999 7	0.011	0.033
盐酸伐地那非（vardenafil）	25.5~510	Y=1.010×10⁴X-4.078×10⁴	1.000	0.010	0.031
豪莫西地那非（homosildenafil）	25~501	Y=2.468×10³X-1.626×10⁴	0.999 5	0.050	0.15
硫代艾地那非（thioaildenafil）	25.8~516	Y=4.347×10³X-3.575×10⁴	0.997 5	0.052	0.15
枸橼酸羟基豪莫西地那非（hydroxyhomosildenafil）	34~679	Y=4.439×10³X-3.462×10⁴	0.999 6	0.014	0.040
丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil）	26.8~535	Y=3.649×10³X-3.244×10⁴	0.999 3	0.054	0.16

表 2 15种添加物的线性范围、相关系数及方法检测下限、定量下限 Tab.2 Linear range, correlation coefficient Limits of detection, limits of quantitative of 15 additives

表 3 15种添加物回收率（n=3） Tab.3 Recoveries of 15 additives

添加物（additive）	加标量（added）	液体基质（liquid-based）		固体基质（solid-based）
添加物（additive）	加标量（added）	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%	平均回收率（average recovery）/%	RSD/%
盐酸育亨宾（yohimbine hydrochloride）	低（low）	74.5	1.90	82.4	6.3
	中（midlle）	76.0	1.42	82.8	7.6
	高（high）	78.2	3.79	81.0	4.4
盐酸伐地那非（vardenafil）	低（low）	88.0	3.02	108.2	7.1
	中（midlle）	88.0	2.15	103.8	7.2
	高（high）	90.3	4.13	102.6	3.9
甲磺酸酚妥拉明（phentolamine mesylate）	低（low）	75.3	4.62	73.2	3.7
	中（midlle）	73.6	2.00	70.1	4.3
	高（high）	75.1	3.29	70.8	3.6
枸橼酸羟基豪莫西地那非（hydroxyhomosildenafil）	低（low）	83.2	1.91	77.2	5.0
	中（midlle）	78.0	1.30	71.5	5.0
	高（high）	80.3	4.55	72.4	2.2
西地那非（sildenafil）	低（low）	88.8	6.28	81.2	7.2
	中（midlle）	81.2	1.63	75.5	4.7
	高（high）	81.6	4.39	72.4	6.4
豪莫西地那非（homosildenafil）	低（low）	85.3	3.68	77.9	5.4
	中（midlle）	80.8	2.14	73.5	4.8
	高（high）	81.5	3.65	71.3	4.0
氨基他达拉非（aminotadalafil）	低（low）	85.9	3.46	76.9	6.7
	中（midlle）	74.2	3.89	72.7	7.2
	高（high）	80.0	4.59	75.4	4.7
他达拉非（tadalafil）	低（low）	85.6	4.72	77.4	6.3
	中（midlle）	79.6	2.04	72.0	6.8
	高（high）	77.9	4.46	70.8	2.8
硫代艾地那非（thioaildenafil）	低（low）	72.3	3.37	71.9	7.8
	中（midlle）	71.6	4.96	70.6	7.4
	高（high）	78.5	8.61	70.3	5.7
丙氧苯基-硫代羟基豪莫西地那非（propoxyphenyl-thiohydroxyhomosil）	低（low）	78.1	3.64	75.7	3.8
	中（midlle）	75.4	4.73	72.9	6.0
	高（high）	80.3	4.82	72.5	1.4
甲睾酮（methyltestosterone）	低（low）	71.3	2.80	70.5	8.2
	中（midlle）	73.9	5.56	73.8	4.9
	高（high）	74.8	7.90	74.6	8.8
伪伐地那非（pseudovardenafil）	低（low）	85.7	3.28	74.2	5.0
	中（midlle）	78.5	2.04	71.5	5.0
	高（high）	84.9	5.79	72.7	5.4
那莫西地那非（norneosildenafil）	低（low）	86.3	2.63	76.1	7.8
	中（midlle）	80.0	5.34	82.9	7.8
	高（high）	117.7	8.34	82.7	2.59
达那唑（danazole）	低（low）	72.8	8.47	74.3	4.5
	中（midlle）	76.5	6.53	70.3	9.6
	高（high）	75.0	3.09	73.8	3.6
司坦唑醇（stanozolol）	低（low）	70.3	6.42	70.3	6.6
	中（midlle）	70.2	5.29	70.9	9.6
	高（high）	76.2	4.54	71.6	2.0

表 3 15种添加物回收率（n=3） Tab.3 Recoveries of 15 additives

表 4 相对离子丰度最大允许偏差^[14-15] Tab.4 Maximum allowable deviation of relative ion abundance ratio

图 2 枸橼酸羟基豪莫西地那非峰形对比 Fig.2 Ion chromatogram of hydroxyhomosildenafil

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