2019, Vol. 39 
2. 北京四环制药有限公司, 北京 101113
2. Beijing Sihuan Pharmaceutical Co., Ltd., Beijing 101113, China
帕博西尼为细胞周期蛋白依赖性激酶（cellular-dependent kinase，CDK）4 /6抑制剂，2015年2月3日，被美国食品药品监督管理局经加速审评程序批准，联合来曲唑用于绝经后妇女雌激素受体阳性（estrogen-receptor-positive，ER+）、人表皮生长因子受体2阴性（human epidermal growth receptor negative，HER2-）的晚期或转移性乳腺癌的初始内分泌治疗[1-4]。帕博西尼几乎不溶于pH大于4.5的水性介质[5]，属于难溶性药物，原料药的粒度大小影响制剂的溶出度[6]，从而影响制剂的质量和疗效，因此，建立准确的帕博西尼颗粒粒度的测定方法并建立内控标准对开发帕博西尼制剂非常重要。
粒度测定方法有过筛法、光学显微镜法和激光粒度散射法[7]。激光散射粒度分析仪通过测量散射光强的能量，根据米氏散射理论和弗朗霍夫近似理论，即可以计算出颗粒的粒度分布，测定方法简单、准确度高、重复性好、可测粒径范围宽，已经广泛应用于原料药的粒度大小和分布的质量控制[8-13]。本文经过一系列的研究，建立了激光粒度散射法测定帕博西尼原料药粒度大小和分布的方法，该方法简单、准确、快速，可用于帕博西尼研究和生产中粒度的质量控制。
1 材料与方法 1.1 仪器与材料Malvern Mastersizer 3000型激光粒度分析仪（Malvern公司）；FW100高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；帕博西尼原料药（批号20150801、20150916、20160103，北京澳合药物研究院有限公司）。
1.2 粒度测定样品取帕博西尼原料药机械粉碎过100目筛，取样约10~20 g作为粒度测定样品，见图 1。
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图 1 帕博西尼原料药的粒度分布图 Fig.1 Particle size distribution pattern of palbociclib crude drug |
分析模式：通用模式；测定模式：干法；文丘里管：标准文丘里管；折光度：0.5%~5.0%；分散介质折射率：1.00；样品折射率：1.52；样品吸收率：0.01；测量次数：5；测量时间：5 s；背景时间：5 s；气源压力：0.15 MPa；振动进样速度：40%；狭缝宽度：1.5 mm。
1.4 评价指标残差：残差是表征测量结果和理论值的拟合差值，通常认为残差值小，测量结果准确可靠[14]。通过检测曲线的重现性和残差（< 1%）来判断检测结果的有效性[15]。
RSD[7]：取原料药，平行测定5次，平行测定的d（0.5）的RSD不得过3%，平行测定的d（0.1）和d（0.9）的RSD均不得过5%。
1.5 光学参数的考察分散介质的折射率、样品的吸收率和样品的折射率是激光散射粒度分析仪在测定样品粒度分布时的3个光学参数。原料药粒度测定的分散介质为空气，空气的折射率为1.00，因此主要考察样品的吸收率和折射率对测定结果的影响。
1.5.1 吸收率取帕博西尼原料药，设定仪器初始参数；采用通用模式，干法，标准文丘里管，设定分散介质折射率1.00；样品折射率1.52；测量次数5；测量时间10 s；背景时间10 s；气源压力2.0 Bar；振动进样速度40%；狭缝宽度1.5 mm，考察吸收率分别为0、0.001、0.01、0.1和1时的粒度测定结果。
1.5.2 折射率取帕博西尼原料药，设定样品吸收率设为0.01，其他参数保持不变，考察样品折射率分别为1.22、1.37、1.52、1.67和1.82时的粒度测定结果。
1.6 测量时间与背景时间考察取帕博西尼原料药，设定样品吸收率设为1.52，其他参数保持不变，考察测量时间（背景时间同测定时间）分别为5、10和15 s时的粒度测定结果。
1.7 气源压力的考察取帕博西尼原料药，设定测量时间（背景时间同测定时间）5 s，其他参数保持不变，考察气源压力分别为0.5×105、1.0×105、1.5 ×105、2.0×105和2.5×105 Pa时的粒度测定结果。
1.8 进料速度的考察取帕博西尼原料药，设定气源压力为0.15 MPa，其他参数保持不变，考察进料速度分别为30%、35%、40%、45%和50%时的粒度测定结果。
1.9 狭缝宽度的考察取帕博西尼原料药，其他参数保持不变，考察狭缝宽度分别为1.0、1.2、1.5、1.7和2.0 mm时的粒度测定结果。
2 结果 2.1 光学参数的考察 2.1.1 吸收度统计不同吸收率条件下原料药粒度d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，结果见表 1。帕博西尼样品吸收率对原料药粒度分布测定结果的RSD和拟合程度有较大影响。吸收率设为0.01和1时，测定结果的RSD均符合限度要求，但吸收率设为0.01时拟合残差最小，综合考虑，确定帕博西尼样品吸收率为0.01。
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表 1 不同吸收度的粒度测定结果（n=5） Tab.1 Determination results of particle sizes with different absorbency |
统计不同折射率条件下原料药粒度d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，结果见表 2。不同折射率条件下，帕博西尼原料药粒度分布测定结果的RSD均符合要求。折射率为1.52时，拟合的残差最小，因此确定样品的折射率为1.52。
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表 2 不同折射率的粒度测定结果（n=5） Tab.2 Determination results of particle sizes with different refractive index |
统计不同测量时间原料药粒度d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，结果见表 3。所有测量时间下测定结果的RSD均符合限度要求，平均残差均不大于1%，表明均能保证测量结果准确性，为了尽量缩短分析周期，故最终选择测量时间和背景时间均为5 s。
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表 3 不同测定时间的粒度测定结果（n=5） Tab.3 Determination results of particle sizes with different determination time |
统计不同气源压力下原料药粒度d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，结果见表 4。所有气源压力条件下测定结果的RSD均符合限度要求，气源压力为0.15和0.2 MPa时，平均残差均小于1%，气源压力越大，对检测仪器和管路的损耗越大，因此选择气源压力为0.15 MPa。
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表 4 不同气源压力的粒度测定结果（n=5） Tab.4 Determination results of particle sizes with different air press |
统计不同进料速度下原料药粒度d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，结果见表 5。所有进料速度条件下测定结果的RSD均符合限度要求，进料速度为35%和40%时，平均残差均小于1%，进料速度为40%时，平均残差最小，因此选择进料速度为40%。
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表 5 不同进料速度的粒度测定结果（n=5） Tab.5 Determination results of particle sizes with different feed rate |
统计不同狭缝宽度下原料药粒度d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，结果见表 6。所有狭缝宽度条件下测定结果的RSD均符合限度要求，狭缝宽度分别为1.0、1.2和1.5 mm时，平均残差均小于1%，狭缝宽度为1.0 mm和1.2 mm时，帕博西尼原料药容易堆积于进料盘上，因此选择狭缝宽度为1.5 mm。
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表 6 不同狭缝宽度的粒度测定结果（n=5） Tab.6 Determination results of particle sizes with different slit width |
分析人员1取混匀的帕博西尼原料药样品6份，按“1.3”项下仪器参数测定，统计6份样品的d（0.1）、d（0.5）、d（0.9）的平均值及RSD；由分析人员2对上述样品进行复检，并与分析人员1的结果进行比较，结果见表 7。
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表 7 精密度试验结果（n=6） Tab.7 Results of precision test |
由表 7可知，分析人员1测得的6份样品的d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）值的RSD分别为1.43%、0.75%和0.92%；分析人员2测得的6份样品的d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）值的RSD分别为1.5%、1.0%和0.88%，表明方法的重现性符合要求。2名分析人员测定的共12份样品的d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）值的RSD分别为1.4%、0.87%和0.86%，表明中间精密度符合要求。
2.7 样品粒度测定按“1.3”项下仪器参数测定3批帕博西尼原料药粒度分布，统计各批次样品的d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的平均值及RSD，各批次原料药粒度分布测定结果的RSD均符合要求，详见表 8。
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表 8 原料药的粒度测定结果（n=5） Tab.8 Results of bulk drug particle size |
激光散射法可以采用湿法和干法2种测定模式。采用湿法测定样品粒度分布时，需要根据样品的特性，选择适宜的分散方法使样品分散成稳定的混悬液，需要考察分散介质种类、分散方法、表面活性剂种类和浓度对测定结果的影响，方法开发考察项较多。采用干法测定样品粒度分布时，分散介质即为空气，不需要进行样品配制，操作方法简单、准确，因此帕博西尼原料粒度测定，首选干法测定模式。选择《中华人民共和国药典》附录建议的干法测定折光度范围：0.5%~5.0%[7]。
文丘里管选择：马尔文激光粒度测定仪有标准文丘里管和高能文丘里管2种选择，高能文丘里管适用于粒度较小、静电较强、易于聚集成团，不易分散的样品。帕博西尼原料药静电弱、不易聚集，容易分散均匀，因此选择了标准文丘里管。
3.2 方法操作注意事项样品粒度分布测定前，需要用甘露醇标准粒子对干法测定管路进行清洗，采用标准粒子对测量仪器进行评价，平行测定5次的甘露醇标准粒子的d（0.1）、d（0.5）和d（0.9）的均值的与特征值的偏差、RSD均应符合2015年版《中华人民共和国药典》的要求[3]。
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