2018, Vol. 38 
中药材麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus（L. f）Ker-Gawl.的干燥块根，具有养阴生津、润肺清心之功效，主要用于治疗肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴，内热消渴，心烦失眠，肠燥便秘等症[1]。现代研究表明，麦冬的药效成分主要有麦冬皂苷D、D′等甾体皂苷类成分，以及甲基麦冬二氢高异黄酮、麦冬黄烷酮等高异黄酮类成分[2-6]，这些化合物具有抗心血管疾病，抗炎，抗肿瘤，增强免疫等药理作用[7-10]。全国药用麦冬主产区有四川省三台县和浙江省慈溪、余姚市等，所产麦冬医药行业分别习称川麦冬、浙麦冬（杭麦冬）。其中川麦冬主产于四川省绵阳市三台县，种植历史悠久，生长周期仅为1年，产量高。据相关统计，目前三台麦冬产量己占全国总产量的60%以上，其出口量占全国麦冬出口总量的80%左右，已成为全国乃至东南亚最大的麦冬生产基地和麦冬市场交易中心[11]。
针对川麦冬采收期的研究，目前多以简单的方法测定1个或者2个成分[12-13]，评价简单，难以真实、全面反映药材的内在品质。本课题组通过前期对该地道产区的走访调查发现，传统的麦冬最佳采收期在清明节前（3月中下旬至4月上旬），但因为产区种植面积扩大，产区劳动力缺少等原因，麦冬从2月份就开始采收，一直到4月中下旬才结束，整个采收期持续将近3个月，造成市场上流通的麦冬质量参差不齐，进而影响麦冬的临床药用。本实验采用冷浸法测定麦冬水溶性浸出物含量，高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）同时测定麦冬皂苷D、D′，麦冬黄烷酮C、E，甲基麦冬黄烷酮A、B，甲基麦冬黄酮A的含量，综合考察其动态积累变化，并用主成分分析对多元功效物质进行综合评价，为进一步确定药材的适宜采收期提供依据，同时为麦冬药材的生产和内在质量的控制提供参考方法和理论依据。
1 仪器、试剂与材料 1.1 仪器与试剂安捷伦1260型高效液相色谱系统，配备安捷伦四极杆LC/MS 6120质谱检测器（安捷伦公司）；色谱柱为Phenomenex Luna C18（广州菲罗门公司）；Milli-Q超纯水系统（密理博公司）；JD300-3千分之一型精密电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）；101-3AB型电热恒温鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；SB-25-12DTDN超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；JJ-25I型高效离心机（科曼库尔特公司）。
麦冬对照品麦冬皂苷D（批号PS13092201，纯度 > 98.54%）、麦冬皂苷D′（批号PS12060601，纯度 > 99.39%）、甲基麦冬黄酮A（批号0821-0010，纯度 > 99%），均购于成都普思生物科技有限公司；麦冬黄烷酮C（批号201211201412，纯度 > 92%）、麦冬黄烷酮E（批号YL201511121040，纯度 > 98%）、甲基麦冬黄烷酮A（批号201511251340，纯度 > 98%）、甲基麦冬黄烷酮B（批号YL201511281630，纯度 > 98%），均购于上海一林生物科技有限公司。乙腈为色谱纯，水为超纯水，乙醇、乙酸等其他试剂为分析纯。
1.2 实验材料根据前期对四川省绵阳市三台县里程乡麦冬生产基地中麦冬植株生长过程以及当地种植采收情况的观察，确定采收期分别为2016年2月26日（S1）、3月7日（S2）、3月17日（S3）、3月27日（S4）、4月6日（S5）、4月16日（S6）、4月26日（S7）。采样时根据试验的情况，在面积为15 m×5 m的麦冬种植地上，根据5点取样法确定5个面积为1 m2取样小区，每个小区每次随机采挖5株麦冬，作为每次取样的5次重复。
2 实验方法 2.1 麦冬浸出物含量的测定麦冬浸出物含量参照《中华人民共和国药典》（2015年版一部）通则2201法[1]进行测定。
2.2 麦冬黄酮、皂苷的测定麦冬皂苷D、D′，麦冬黄烷酮C、E，甲基麦冬黄烷酮A、B，甲基麦冬黄酮A的含量测定参照吴茵等[14-15]所建立的方法，略作修改，具体按照参考文献[16]中的方法进行测定。
2.3 数据处理数据统计和主成分分析等采用Microsoft Excel 2007及SPSS 21.0软件完成。
3 结果分析 3.1 麦冬水溶性浸出物动态变化规律取不同采收期的麦冬药材粉末（过60目筛），按“2.1”项下方法测定样品中浸出物含量。结果见表 1，不同采收期麦冬浸出物含量的动态变化见图 1。
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表 1 麦冬浸出物含量测定结果 Table 1 Results of extract content in Ophiopogonis Radix |
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图 1 不同采收期样本中麦冬水溶性浸出物含量变化趋势图 Figure 1 Trend chart of extracts in Ophiopogonis Radix at different harvested period |
从表 1和图 1可以看出，不同采收期的川麦冬水溶性浸出物含量在整体上呈现先增加后降低的变化规律，即随着采收期的推迟，川麦冬水溶性浸出物含量从2月底的77.81%开始，快速增加，在3月下旬（3月27日）达到峰值，为82.82%，之后缓慢降低，最终在4月26日降低至80.59%。
3.2 麦冬甾体皂苷的动态变化规律取不同采收期的麦冬药材粉末（过60目筛），按“2.2”项下方法测定样品中2个皂苷的含量。结果见表 2，不同采收期麦冬2个皂苷的含量的动态变化见图 2。
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表 2 麦冬皂苷D和D′含量测定结果 Table 2 Contents of ophiopogonins D and D′in Ophiopogonis Radix at different harvesting time |
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图 2 不同采收期样品中麦冬皂苷D和D′含量变化趋势图 Figure 2 Trend chart of of ophiopogonins D and D′in Ophiopogonis Radix at different harvested perioal |
如表 2和图 2所示，在川麦冬药材的整个采收期内，麦冬皂苷D的含量明显高于麦冬皂苷D′的含量，但两者在成分的积累上具有相似的变化规律，即随着采收期的推迟，麦冬的2个皂苷含量呈现先增加后减小的变化趋势。进一步分析可知，麦冬皂苷D、D′均在3月中旬（3月17日）达到峰值，分别为0.151 0、0.048 2 mg·g-1。
3.3 麦冬高异黄酮的动态变化规律取不同采收期的麦冬药材粉末（过60目筛），按“2.2”项下方法测定样品中5个黄酮的含量。结果见表 3。不同采收期麦冬5个黄酮含量的动态变化见图 3。
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表 3 麦冬高异黄酮含量测定结果 Table 3 Contents of homoisoflavonoids in Ophiopogonis Radix at different harvesting time |
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1.甲基麦冬黄烷酮A（methylophiopogonanone A）2.甲基麦冬黄烷酮B（methylophiopogonanone B）3.麦冬黄烷酮E（ophiopogonaone E）4.麦冬黄烷酮C（ophiopogonaone C）5.甲基麦冬黄酮A（methvlophiopogonanone A） 图 3 麦冬黄酮含量动态变化 Figure 3 Trend chart of homoisoflavonoids in Ophiopogonis Radix at different harvested period |
如表 3和图 3所示，川麦冬药材中所含的麦冬黄烷酮C、E，甲基麦冬黄烷酮A、B，甲基麦冬黄酮A 5个高异黄酮成分的含量，以甲基麦冬黄烷酮A最高，甲基麦冬黄烷酮B次之，甲基麦冬黄酮A的含量最少。高异黄酮的含量在2月初和4月底呈现先增加后降低的规律性变化，其中麦冬黄烷酮C、E和甲基麦冬黄烷酮B的含量在3月27号达到峰值，分别为0.037 2、0.033 4、0.046 0 mg·g-1，而甲基麦冬黄烷酮A和甲基麦冬黄酮A的含量在3月17号达到峰值，分别为0.079 0、0.001 8 mg·g-1。
3.4 PCA用于不同采收期川麦冬质量评价参考邹皮木瓜[17]、何首乌[18]、头花蓼[19]等中药材的采收期综合评价方法，采用SPSS 21.0统计软件，对川麦冬水溶性浸出物，麦冬皂苷D、D′，麦冬黄烷酮C、E，甲基麦冬黄烷酮A、B，甲基麦冬黄酮A 8种指标进行主成分分析，其初始特征值与贡献率计算结果见表 4。
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表 4 成分的初始特征值与贡献率 Table 4 Initial eigenvalue and contribution rate of principal component |
由表 4可以看出，特征值大于1的有2个主成分，两者方差贡献率累积为90.843% > 80%，能够客观地反映川麦冬药材的内在质量，故选取其前2个主成分F1、F2进行分析。根据特征向量，计算样品各自的主成分得分，可得到主成分线性组合表达式F=0.660 5F1+0.339 5F2，其中F为综合得分，F1为第一主成分，F2为第二主成分。
根据主成分的表达式，可以计算出不同采收期川麦冬综合得分并排序，结果见表 5。综合得分分值越高，综合品质表现越好。
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表 5 不同采收期川麦冬的主成分因子及品质综合评价 Table 5 Comprehensive evaluation of principal component factors and quality of samples at different harvesting periods |
根据表 5综合评分的排序可以看出，川麦冬在3月27日采收的样品综合主成分F值最高，考虑麦冬水溶性浸出物、2个甾体皂苷、5个高异黄酮的含量，3月下旬为川麦冬的最佳采收期。
4 讨论与结论中药材的采收是保证药材品质的重要生产环节之一，不同采收期的药材质量存在较大的差异[20-21]。唐·孙思邈《千金翼方》云：“凡药，皆须采之有时……若不依时采之，则与凡草不别，徒弃功用，终无益也。”本实验针对提前和延后采收造成川麦冬质量参差不齐的现象，开展实验研究，探索采收期对麦冬多元药效成分含量的影响。研究结果表明，在2月下旬至4月底这个时间段内，麦冬药材所含的有效成分在总体上呈现先增长后下降的规律，但各个成分达到最大值的时间有所差异。其中水溶性浸出物、甲基麦冬黄烷酮B、麦冬黄烷酮C、E在3月中旬（3月17号）达到峰值，麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、甲基麦冬黄烷酮A和甲基麦冬黄酮A 4个指标性成分在3月底（3月27日）达到峰值。从多种有效成分的积累规律上可以看出，3月份是麦冬有效成分快速积累的时期，随着块根生长时间的延长，各种有效成分快速合成积累，随后开始缓慢回落。因此在实际生产过程中，应该加强栽培麦冬药材的管理，促进麦冬有效成分的积累，以提高其质量。
采用主成分分析方法对采收期麦冬药材质量进行多因子综合分析评价，较以往依据单一化学评价指标得到的结果更为客观和合理[22]。综合评价结果显示，3月27日采收的麦冬药材综合评价指数最高，表明就水溶性浸出物，麦冬皂苷D、D′，麦冬黄烷酮C、E，甲基麦冬黄烷酮A、B，甲基麦冬黄酮A而言，3月下旬采收的样品优于其他采收期样品，更适宜川麦冬药材的采收；同时也进一步说明，过早（3月中旬之前）以及延后（4月中下旬以及之后）采收的麦冬药材，其综合评价指数较低。因此，在麦冬生产中可通过调整加工大户、商家等的收购时间，引导麦冬种植户适时采收，以及加强麦冬采收、加工等过程中机械的应用，以缓解麦冬采收时劳动力的压力，促进麦冬适时采收，以确保麦冬药材质量。
本实验通过冷浸法测定不同采收期川麦冬水溶性浸出物含量，采用HPLC-MS同时测定多种甾体皂苷和高异黄酮的含量，综合考察其动态积累变化，并用主成分分析法对多元药效成分进行综合评价，对麦冬质量的评价指标更系统，评价方法更科学，确定的药材适宜采收期能够保证麦冬的综合质量，同时为川麦冬药材内在质量综合评价体系的建立提供借鉴。
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