宁泌泰胶囊系苗药，收载于国家药品标准(试行)WS-10348-(ZD-0348)-2002，由四季红、白茅根、大风藤、三棵针、仙鹤草、芙蓉叶、连翘7味中药组成，可清热解毒，利湿通淋，用于湿热蕴结所致淋证。证见：小便不利，淋漓涩痛，尿血，以及下尿路感染、慢性前列腺炎见上述症候者^[1]。现行标准仅对四季红中没食子酸含量进行了测定，有文献也只是使用高效液相色谱峰测定盐酸小檗碱^[2]、连翘苷^[3]的含量，没有文献对其进行多组分含量同时测定。本实验采用液相色谱-质谱联用，建立了同时快速、高灵敏测定宁泌泰胶囊中没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷含量的新方法，与高效液相色谱-UV法相比，液相色谱-质谱联用法具有灵敏度高、干扰少等优点^[4-12]，国内外未见相关文献报道，以期为进一步完善宁泌泰胶囊的质量标准提供实验依据。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪-Agilent 6460三重四极杆串联质谱，配有电喷雾离子源(ESI)、B06.00Masshunter色谱工作站，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C₁₈(150 mm×2.1 mm，5.0 μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶)；Sartorius BP-210D电子天平(十万分之一)。

对照品没食子酸(批号110831-201605)、盐酸小檗碱(批号110713-201212)、盐酸巴马汀(批号110732-200005)、连翘苷(批号110821-201213)均购自中国食品药品检定研究院。宁泌泰胶囊为国内某生产企业产品(批号160314、150708、141203)。乙腈、甲醇为色谱纯，美国J.T.Baker公司、甲酸为色谱纯，美国Dikma公司；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 色谱及质谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C₁₈(150 mm×2.1 mm，5.0 μm)；流动相A为0.1%甲酸-10%甲醇，B为甲醇，梯度洗脱程序：0~20 min，0%B→100%B；20~35 min，100%B。进样量10 μL；柱温：30 ℃；流速为0.6 mL·min^-1。质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，选择正、负离子监测模式，多重反应扫描模式，喷雾电压-4.0 kV，干燥气及雾化器均为氮气，干燥气温度为350 ℃，干燥气流量为11 L·min^-1，雾化器压力为45 psi(见表 1)。

2.2 溶液制备 2.2.1 对照品溶液

分别精密称取没食子酸对照品10.00 mg、盐酸小檗碱对照品10.20 mg、盐酸巴马汀对照品12.00 mg、连翘苷对照品10.34 mg，分别置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，为对照品储备液。再精密吸取上述对照品储备液稀释成每1 mL含没食子酸20.00 μg、盐酸小檗碱2.040 μg、盐酸巴马汀0.360 0 μg、连翘苷41.36 μg的溶液，得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

取宁泌泰胶囊10粒的内容物，研细，精密称取0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定，超声(功率500 W，频率40 kHz)处理30 min，静置至室温，用50%甲醇补足减失的量，滤过，精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜(0.22 μm)滤过，取续滤液作为没食子酸、盐酸小檗碱的供试品溶液；精密量取续滤液1 mL，置5 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜(0.22 μm)滤过，取续滤液作为盐酸巴马汀、连翘苷的供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液

按本品处方制备缺少四季红、三棵针及连翘药材的阴性样品，照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 专属性考察

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，按“2.1”项下色谱及质谱条件进行测定。样品中没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷各峰分离良好，对照溶液及样品溶液目标峰的保留时间一致，且阴性样品无干扰。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品储备液0.5、1、2、3、5 mL，分别置20 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列对照品溶液，按“2.1”项下色谱及质谱条件进行测定。以对照品质量浓度(X)为横坐标，待测物峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归分析，计算没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷回归方程，结果表明各成分在相应的线性范围内线性关系良好(见表 2)。

2.5 精密度试验

取批号为160314的样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，连续进样6次，计算各峰面积，结果没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷的峰面积RSD(n=6)分别为0.7%、1.8%、1.2%、2.2%。表明方法精密度良好。

2.6 稳定性试验

取批号为160314的样品，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、3、6、10、15、24 h进样，测定没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷的峰面积。结果没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷的RSD(n=6)分别为0.8%、1.5%、2.1%、2.4%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取批号为160314的样品，按照“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样10 μL，测定没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷的峰面积。结果没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷含量的平均值分别为4.13、0.255、0.042 2、2.26 mg·g^-1，RSD(n=6)分别为0.9%、1.6%、2.1%、2.0%。表明该方法重复性良好。

2.8 检测下限与定量下限

将混合对照品溶液逐步稀释并进行测定，分别以信噪比S/N=10和S/N=3时各对照品溶液的质量浓度作为定量下限(LOQ)和检测下限(LOD)，结果见表 2。

2.9 回收率试验

精密吸取“2.2.1”项下的对照品浓溶液，经稀释制成每1 mL含没食子酸0.200 0 mg、盐酸小檗碱0.012 24 mg、盐酸巴马汀0.002 160 mg、连翘苷0.103 4 mg的对照品溶液。取干燥具塞锥形瓶，精密加入50%甲醇50 mL，分别用移液枪从其中吸取1(2、2.5)mL 50%甲醇弃去，后再精密加入上述对照品溶液1(2、2.5)mL；精密称取已知含量的同一批样品(批号为160314)0.1 g，置该具塞锥形瓶中，按照“2.2.2”项下方法制备回收率试验供试品溶液，一式9份，平行3份，照“2.1”项下条件测定，记录峰面积，计算回收率及其RSD，结果见表 3。

2.10 含量测定

取供试品3批，每批取3份，研细，分别依照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，分别计算宁泌泰胶囊中没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷的含量，结果见表 4。

3 讨论 3.1 检测方法的选择

实验过程中曾尝试采用HPLC-UV法测定宁泌泰胶囊中没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷的含量，结果盐酸小檗碱、盐酸巴马汀很难分离，且盐酸巴马汀含量低，难以准确检测，而液相色谱-质谱联用法具有灵敏度高、干扰小等优点，利用盐酸小檗碱、盐酸巴马汀在多重反应扫描模式下质荷比的不同来进行含量测定，故选用液质联用为检测方法。

3.2 样品处理方法的选择

本实验条件对提取溶剂及提取方法进行了优化筛选：分别以甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇和水为溶剂，结果显示使用50%甲醇提取时4种成分含量均较高；加入50%甲醇，使用加热回流提取和超声提取2种方法，结果显示加热回流和超声提取时含量无较大差别，而超声提取更简便易行，故选择超声提取；在超声提取的时间选择上，选用了15、30、45、60 min进行超声提取，结果显示在超声提取30 min后含量无明显变化，故选择超声处理30 min；在溶剂使用量的选择上，选用了25、50、75、100 mL的50%甲醇进行超声，结果显示超声提取50 mL以上溶剂量含量无明显变化，故溶剂使用量选择50 mL。

3.3 小结

本实验采用LC-MS/MS分析法同时测定宁泌泰胶囊中没食子酸、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、连翘苷含量，方法简单，灵敏度高，线性关系、精密度、重复性、回收率均较好，结果除已有质量控制的没食子酸的含量无明显差异外，其他成分含量均有明显差异，说明宁泌泰胶囊的质量全面控制有其必要性，本方法为其提供了有效地检测手段。但本方法在作为常规质量控制时，对仪器要求较高，生产企业可以根据实际情况来参考。