结核病是严重危害公众健康的全球性公共卫生问题，伴随全球人口的增长及人口流动性的增加，耐药结核分支杆菌传播流行日趋严重，结核疫情开始死灰复燃并呈恶化态势。2016年世界卫生组织年报报道^[1]：全球共有1 040万例结核病新患者，2015年全球约有180万人死于结核病，结核病仍然是全球前10位死因之一，致死人数高于艾滋病和疟疾。中国是全球22个高负担国家之一，2016年结核病发病数约92万，居第3位；发病率为0.067%。尽管结核病的发病率逐渐降低，但对比2012年和2015年世界卫生组织的全世界结核病研究报告显示^[2-3]：肺外结核患者在2011年有6 540人，到2014年增高到32 348人；使用一线抗结核药物治疗结核病的人均费用从大约200美元上升至约500美元。结核病与经济发展水平、医疗卫生条件和地理区域气候特点等密切相关：在发达国家，卫生条件相对较好，结核病的治疗能够收到相对良好的效果^[4]，但在发展中国家，卫生条件差，结核病的治疗存在隐患^[5-7]。中国是一个拥有56个民族的东方大国，医疗卫生条件在不同地域内的差异较大，各地的经济发展水平也参差不齐，导致结核病患者服药依从性差，同时临床医务人员对结核普遍耐药的现状认识不足，因此由抗结核治疗不当或用药不规律引起的耐药结核逐年高发，这种国情和现状给中国结核病的预防与治疗提出了新的挑战。因此，采用科学的临床分析检测方法，提供合理的给药方案，优化抗结核方案，减少结核药物毒副作用，从而降低治疗不当引发的耐药结核，在目前抗结核药物治疗中意义重大。一线抗结核药物对遏制结核病的快速传播发挥了巨大作用，在临床有着不可忽视的地位。一线口服抗结核药包括异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺。本文主要将近年来国内外一线抗结核药物在结核治疗中所用的分析检测方法进行综述，为抗结核药物的临床合理使用提供理论参考。

有学者建立了紫外分光光度定性定量检测异烟肼的方法，该法得出血清中异烟肼质量浓度在5~30 μg·mL^-1范围内呈线性关系，回归方程Y=31.57X+0.009 7，r=0.999 6，回收率为95.3%~104.0%，RSD为3.3%~4.8%。日内、日间RSD分别为3.0%~5.0%和2.3%~4.8%，最低检出限为2.0 μg·mL^-1[8]，该法操作简便，分析快速，结果准确，为临床诊断异烟肼中毒提供简便准确的检测方法。

有关异烟肼药物浓度检测的色谱分析方法较多，如薄层色谱法^[9-10]、气相色谱法^[11]、液相色谱法等^[12-13]，但大都面临提取率低及操作烦琐的问题。有些方法只适用于对原药中的异烟肼成分进行分析测定，难以满足治疗量下对体液中异烟肼浓度进行快速检测的要求。目前所用的HPLC法中前处理过程十分复杂，烦琐费时，不便于开展日常监测工作。针对该现状，Jayaram等^[14]参考第23版美国药典，经过探索和尝试，引入离子对试剂庚烷磺酸钠，以烟酰胺为内标物，建立了简便易行的反相离子对高效液相色谱法（Reversed ion-pair phase high performance liquid chromatography，RP-IP-HPLC），取得较好的检测效果。该方法以甲醇-2.0 mmol·L^-1 -辛烷磺酸钠（15:85）为流动相，紫外检测器检测，波长254 nm，烟酰胺（NA）为内标物。得出异烟肼与烟酰胺的保留时间分别为7.817 min和6.872 min，在0.5~20.0 μg·mL^-1的质量浓度范围内，线性关系良好（r=0.999 5）。方法日内差异2.19%，日间差异4.51%，回收率93.3%，最低检测浓度50 ng·mL^-1。该方法样品经沉淀蛋白后可直接进样分析，不需提取浓缩过程，简便，精确稳定，特异性好，灵敏度高，在日常血药浓度监测和人体药代动力学研究工作中具极大的优越性。为进一步提高检测的准确性，Daher等^[15]采用高效液相色谱-质谱联用法（high performance liquid chromatography-mass cpectrometry，HPLC-MS）测定人血浆中异烟肼浓度，该法以对乙酰氨基酚为内标，采用C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm，5μm），以乙腈-0.046%甲酸溶液（80:20）为流动相，梯度洗脱，使用离子喷雾离子化源（ESI），以正离子多反应监测（MRM）方式进行检测，异烟肼m/z 138.0→121.0，流速0.3 mL·min^-1，得出异烟肼线性范围为0.20~9.81 μg·mL^-1，日内、日间精密度（RSD）均小于10%。本方法简单，快速，灵敏度高，测定结果可靠，适用于临床血浆中异烟肼浓度的分析。

异烟肼在体内主要通过N-乙酰基转移酶2与乙酰辅酶A结合为乙酰异烟肼（Ac-INH），后者进一步代谢为乙酰化肼。乙酰化肼在体内经细胞色素P₄₅₀代谢生成具有肝毒性的产物。因此国外学者普遍认为应当对乙酰异烟肼进行血药浓度监测^[16-17]。Moussa等^[18]采用高效液相色谱-紫外检测法（high performance liquid chromatography-UV detection，HPLC-UV）测定人血浆中异烟肼与乙酰异烟肼含量；该方法采用C₁₈色谱柱（300 mm×3.9 mm，10 μm），以50 mmol·L^-1乙酸铵溶液（用冰醋酸调pH至6.0）-乙腈（99:1）为流动相，等度洗脱，流速1.2 mL·min^-1，柱温30 ℃，紫外检测波长275 nm；结果异烟肼与乙酰异烟肼分离良好，线性范围分别为0.3~19.2 mg·L^-1（r=0.999 5）和1~16 mg·L^-1（r=0.999 6），均具有良好的线性关系，日内、日间RSD及回收率、稳定性均符合要求。该法简便、快速，灵敏度和准确度较高，无干扰，可用于异烟肼与其代谢物乙酰异烟肼血药浓度测定和人体药动学研究。许亦鸣等^[19]也使用HPLC法测定血浆中异烟肼及其代谢物乙酰异烟肼的浓度；该法使用Hypersil BDS C₁₈色谱柱，流动相为0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾（pH=4.0）-乙腈（69:31），流速为1 mL·min^-1，检测波长340 nm；结果显示异烟肼浓度在0.57~145.88μmol·L^-1范围内线性关系良好，异烟肼和乙酰异烟肼平均回收率分别为101.1%、101.5%，日内、日间RSD均 < 10%，该法可用于异烟肼血药浓度监测及乙酰化酶代谢能力研究。目前国内外研究认为，异烟肼由N-乙酰基转移酶2（N-acetyltransferase 2，NAT₂）代谢，NAT₂代谢能力因其不同的等位基因型差异，可分为快乙酰化型和慢乙酰化型^[20]。慢乙酰化的存在使异烟肼及其代谢物的血药浓度存在显著的个体差异^[21]，进而引起药效和毒副作用的差异^[22]。因此，提高疗效且不发生药物性肝损害成为结核病治疗中的关键所在。只有定期监测患者服药后血浆中乙酰异烟肼的浓度，才可判断患者是属于快代谢型还是慢代谢型。再将异烟肼和乙酰异烟肼的血药浓度相结合来调整异烟肼的给药剂量，就可以提高疗效并降低药物性肝损害的发生率^[23]。在此理论基础上，张亮等^[24]用HPLC法同时检测异烟肼和乙酰异烟肼血药浓度；该法采用Inertsil ODS-SP色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇（A）-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾（B）（三乙胺调pH 5.6）为流动相进行梯度洗脱[0~10 min时A-B（4:98），10~11 min梯度变为A-B（80:20），11 min时A-B（80:20），淋洗时间共20 min]；流速1 mL·min^-1，柱温40 ℃，进样体积20 μL，检测波长261 nm；该方法操作简单，成本低，灵敏度高，回收率高于80%，日间和日内RSD小于10%，适用于体内异烟肼药代动力学分析。

国外有文献报道抗结核药物难以直接渗透到骨与软组织病灶当中^[25-26]，但对病灶中药物浓度及代谢产物的检测却鲜有文献报道。刘鹏等^[27]利用HPLC法检测了脊柱结核病椎及病灶内异烟肼和乙酰异烟肼的浓度；该法采用离子对试剂作为流动相，色谱柱加用保护柱的办法，使异烟肼出峰时间在8 min以后且与各种血液内源性杂质无干扰，分离效果满意；样品用甲醇沉淀蛋白后氮气浓缩吹干进样，提取效果满意，回收率达到86%。该测定方法为脊柱结核患者术后结核药物治疗方案的制定提供理论依据。

国外对利福平的血药浓度及原药检测已有报道^[28-29]。Allanson等^[30]采用HPLC-UV法测定其在人血浆中的浓度，该方法采用Kromasil C₁₈色谱柱（100 mm×3.2 mm，3 μm），流动相为乙腈（A）-20 mmol·L^-1醋酸胺溶液（B），梯度洗脱（0~18 min，20%A→90%A），流速0.7 mL·min^-1，检测波长334 nm，pH=4，结果利福平浓度在线性范围内与峰面积线性关系良好（r≥0.998 0），该法所测得保留时间为10.9 min，因此作者认为该方法是临床检测利福平的有效方法。Shaheen等^[31]也用同样的方法测定了利福平在肺结核患者体内浓度，采用C₁₈反相柱，流动相为甲醇-0.01 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液（65:35，pH=5.2），检测波长254 nm，作者认为该方法简单、灵敏、准确，适用于利福平临床药代动力学研究。同年Srivastava等^[32]用HPLC-MS法测定口服利福平10 mg·kg-1后25 h血浆与脑脊液中的浓度，检测得出线性浓度范围25~6 400 ng·mL^-1，日内精密度 < 7%，日间精密度 < 8%；取得了较好的检测效果。此外，Morenoexebio等^[33]采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定人血浆中利福平浓度；该方法采用C₁₈反相柱，流动相为50mmol·L^-1乙腈-磷酸氢钾溶液（38:62），波长335 nm，以醌式利福平为内标，采用内标法测定人血浆中利福平浓度，结果显示利福平和醌式利福平保留时间分别为7.81和12.26 min，利福平血浆质量浓度在0.5~250 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 5）。低、中、高3种浓度的平均相对回收率分别为（85.70±0.75）%、（99.53±2.82）%、（98.93±0.62）%，日内、日间RSD均小于10%；作者认为该方法简便、快速、准确，灵敏度高，可用于利福平血药浓度测定和人体药动学研究。Goutal等^[34]使用C₁₈柱做了相似的研究，但结果显示保留时间仅6 min。Louveau等^[35]用HPLC-UV法测定人血浆中利福平药物浓度，测得最低检测浓度≤0.05 mg·L^-1，保留时间仅3.77 min。Winchester等^[36]采用HPLC-MS同时测定人血浆中利福平、利福喷丁和利福布汀及其代谢物浓度；方法以扎来普隆为内标，血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理后检测，采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm），以乙腈-水（15 mmol·L^-1甲酸铵-0.05%甲酸）为流动相，梯度洗脱，用ESI以MRM检测专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性；结果利福平、利福喷丁和利福布汀的线性动态范围为75~30 000 ng·mL^-1，3种药物代谢物的线性动态范围为37.5~150 000 ng·mL^-1，日内、日间精密度RSD均小于15%。作者认为该法灵敏、简便、准确，可同时对利福平、利福喷丁、利福布汀及其代谢物进行浓度检测。

国内关于单独检测血浆中利福平药物浓度检测的文献记载较少，但有文献报道脊柱结核骨组织中利福平浓度的检测^[37]，其色谱柱为分析柱Shim-pack HRC-C8（250 mm×4.6 mm，5 μm），保护柱Eclipse XDB-C₁₈（125 mm×4.6 mm）；流动相为0.02 mol·L^-1庚烷磺酸钠溶液（pH 3.0）-乙腈-甲醇（20:5:75），流速为0.8 mL·min^-1，测试波长254 nm，其结果显示：包裹在硬化壁内的病灶难以达到有效的药物浓度，手术应彻底清除包括死骨、肉芽、坏死、干酪样组织的病灶；邻近的亚健康骨内药物浓度亦相对较低，这一部分亚健康骨也应予以清除；而对无硬化骨的病例手术清除病灶时直达亚健康骨，亦可取得良好的疗效。

吡嗪酰胺不良反应较大，易引起高尿酸血症和肝脏损害，长期大剂量使用可发生中毒性肝炎等，但其血药浓度不稳定，难以确定是否达到有效的治疗窗。国内外关于血浆中吡嗪酰胺浓度测定方法的报道多采用液相色谱法^[38-39]，杨正管等^[40]采用KH₂PO₄缓冲液（pH=2.5）为流动相监测吡嗪酰胺，但其pH偏低，严重影响色谱柱的柱效和降低其使用寿命。胡咏梅等^[41]采用KH₂PO₄缓冲液梯度洗脱，虽然避免了上述问题，但洗脱程序较复杂，且洗脱时间长。鲁红等^[42]建立反相高效液相色谱法测定人血浆中吡嗪酰胺血药浓度，该法采用外标法测定，流动相为0.05 mol·L^-1乙酸铵-乙腈（91:9），检测波长268 nm，其结果显示吡嗪酰胺的保留时间合适，峰形较好，且不受血浆中内源性杂质的干扰，血浆质量浓度在1.645~105.28 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 5），在样品处理过程中采用蛋白沉淀法操作简便快速，重复性好，通过比较采用甲醇、乙腈、三氯醋酸、高氯酸作蛋白沉淀剂，其中采用甲醇沉淀蛋白，提取回收率较高，且内源性杂质少。Shah等^[43]采用HPLC-MS法测定人血浆中吡嗪酰胺及其代谢物吡嗪酸、5-羟基吡嗪酸；该方法采用Zorbax Eclipse XDB C₁₈（100 mm×4.6 mm，4.6 μm）色谱柱，甲醇-0.1%醋酸（65:35）作为流动相，以选择反应监测方式进行检测，检测离子为m/z 124.1→81.1（吡嗪酰胺），m/z 125.0→80.9（吡嗪酸）和m/z 141.0→81.0（5-羟基吡嗪酸）；吡嗪酰胺、吡嗪酸和5-羟基吡嗪酸质量浓度分别在0.100~30.0、0.03~9.00和0.002~0.600 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r > 0.998 0），日内、日间精密度RSD均小于5%，平均回收率分别为83.7%、89.2%和80.8%；该法操作简便，灵敏度高，可较好地用于吡嗪酰胺临床血药浓度测定。

乙胺丁醇本身无紫外吸收，采用紫外分光光度法不能测定其药物浓度，所以在实际工作中，对乙胺丁醇在人体中药物浓度检测的研究相对较少。同时国内尚无关于乙胺丁醇在中国健康受试者体内药代动力学和相对生物利用度的文献报道。但由于其不良反应会累及泌尿、肝胆、皮肤及其附件等多个系统/器官，故对其血药浓度的监测也是很有必要的。

国内外学者们^[44-45]用气相色谱法测定了乙胺丁醇片中乙胺丁醇的含量，但目前尚无应用气相色谱研究乙胺丁醇在人体中药物浓度的相关文献。国外有报道^[46]采用HPLC -MS对人血浆、支气管肺泡灌洗液和肺泡细胞中的乙胺丁醇进行了分离检测，取得较好的检测效果。薛洪源等^[47]也采用HPLC -MS法测定了人血浆中的乙胺丁醇，其结果显示该方法简便、灵敏，可为临床用药及药代动力学研究提供试验依据。吴莉等^[48]采用HPLC-MS法测定血浆中乙胺丁醇的浓度；色谱条件：采用Lichrospher CN（4.6 mm ×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-水（含0.1%甲酸）（15:85），通过LC-MS/MS，以选择反应监测方式进行检测，检测离子为m/z 205.1→m/z 115.9（乙胺丁醇），m/z 166.0→m/z 148.0（伪麻黄碱，内标）；结果乙胺丁醇最低定量限为0.020 52 mg·mL^-1，线性范围为0.020 52~6.156 mg·mL^-1，回收率 > 75%，日内及日间RSD均 < 15%。该HPLC-MS法操作简便，灵敏度高，可较好地用于乙胺丁醇临床血药浓度测定。

本文简述了近年来国内外文献报道的一线抗结核药临床检测的方法。其中色谱法是应用最多、最普遍的方法。HPLC法普及性高，操作简便，成为文献报道应用最广的方法。HPLC-MS法能够在对生物样品进行适当预处理的基础上，不需获得很好的色谱分离效果即可筛选检测其中的微量组分。同时，能减少分析方法建立以及样品处理分析所用的时间，并且允许同时对多个成分进行定性、定量分析，在分析大量生物样品时有很高的选择性，但实验成本较高，仪器普及率较低，难以在临床上推广。