2017, Vol. 37 
2. 新疆医科大学第六附属医院, 乌鲁木齐 830000
2. The Sixth Clinical Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China
复方消银颗粒是按照中医理论组方的现代中药复方制剂，处方来源于新疆一老中医多年临床经验方，由黄芩、没食子、司卡摩尼亚脂、苦豆子、阿纳其根5味中药经提取、纯化加工制成，具有清除碱性异常粘液质，燥湿，止痒之功效，用于肌肤瘙痒、体癣、牛皮癣等。复方消银颗粒处方中，黄芩具有抗菌、抗病毒、抗癌、保肝、利胆、利尿等广泛的药理作用，黄芩苷和黄芩素是黄芩中主要的化学成分[1-5]。没食子中含有大量的没食子酸，它能与蛋白质结合，具有抗菌、抗氧化、抗自由基等多种生物学活性[6-8]。查阅高效液相色谱法测定没食子酸、黄芩苷和黄芩素的有关文献[9-15]，同时测定上述3种指标成分的文献报道较少。本文建立反相高效液相色谱法同时测定复方消银颗粒中没食子酸、黄芩苷和黄芩素的含量。经方法学考察，该方法具有简便、准确、重复性好等优点，可用于复方消银颗粒的质量控制。
1 仪器与试药岛津公司LC-20A型高效液相色谱仪：SPD-20A紫外检测器、LC-20AB溶剂输送泵、SIL-20A自动进样器、CTO-20A柱温箱、LC-Solution数据工作站；Shim-pack ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶；岛津制作所），梅特勒-托利多公司AB135-S电子天平；北京赛多利斯天平有限公司Sartorius BS110S型电子天平；四川沃特尔科技发展有限公司WP-UP-IV-10型Water Purifier实验室专用超纯水机；昆山市超声仪器有限公司KQ-100 DE型数控超声波清洗器。
复方消银颗粒（新疆医科大学第六附属医院，批号140721、140723、140726）；对照品没食子酸（批号111871-201203）、黄芩苷（批号110715-201318）和黄芩素（批号111595-201306）购自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果 2.1 色谱条件采用Shim-pack ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0~22 min，3%A→10%A；22~35 min，10%A→35%A；35~50 min，35%A→28%A），流速为1.0 mL·min-1，检测波长280 nm，柱温35 ℃，进样量10 μL。在上述色谱条件下，取混合对照品及供试品溶液各10 μL进样。样品色谱中的3个化学成分峰与其相邻峰均能达到很好的分离，且分离度大于1.5，色谱图见图 1。
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1.没食子酸（gallic acid）2.黄芩苷（baicalin）3.黄芩素（baicalein） 图 1 混合对照品（A）、样品（B）、缺没食子阴性样品（C）、缺黄芩阴性样品（D）色谱图 Figure 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances(A), sample(B), negative sample without Quercus infectoria(C)and negative sample without Scutellaria baicalensis(D) |
精密称取黄芩苷、黄芩素、没食子酸的对照品适量，分别置25 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，分别制成每1 mL含黄芩苷201.6 μg、黄芩素163.9 μg、没食子酸178.5 μg的单一成分溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液取复方消银颗粒适量，研细，精密称定2 g，置于100 mL量瓶中，加入40%甲醇至刻度，超声处理30 min（功率40 W，频率100 kHz）使其完全溶解，放冷，加入40%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性样品溶液按处方比例及生产制备方法，分别制备不含没食子和不含黄芩的阴性样品，按照“2.2.2”项下的制备方法制成阴性样品溶液。
2.3 线性关系考察分别精密吸取质量浓度为201.6 μg·mL-1的黄芩苷对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.5、5.0 mL，质量浓度为163.9 μg·mL-1的黄芩素对照品储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，质量浓度为178.5 μg·mL-1的没食子酸对照品储备液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0 mL，将它们分别按由低到高的次序依次加入至5个25 mL量瓶中，再分别加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列混合对照品溶液。取上述系列混合对照品溶液各10 μL，按“2.1”项下色谱条件进行分析，以对照品溶液浓度X（μg·mL-1）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得3个指标成分的回归方程，结果见表 1。
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表 1 3种指标成分的线性关系 Table 1 Linearity of 3 components |
取复方消银颗粒（批号140723），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取10 μL，连续按上述“2.1”项下色谱条件进样5次，测定没食子酸、黄芩苷和黄芩素峰面积，其RSD分别为1.2%、0.79%、1.3%。结果表明，仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验取复方消银颗粒（批号140723），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，室温下放置，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8和12 h进样分析，测定3个待测成分的峰面积，分别计算0~12 h各成分色谱峰峰面积的RSD（n=5）：没食子酸为1.2%、黄芩苷为1.4%、黄芩素为1.0%，表明供试品溶液中上述3个成分于室温放置12 h内均稳定。
2.6 重复性试验取复方消银颗粒（批号140723），按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，精密吸取10 μL，按“2.1”项下色谱条件，进样测定3个指标成分的峰面积，并计算其含量。结果没食子酸、黄芩苷、黄芩素的平均含量分别为0.154、0.258、0.113 mg·g-1，RSD分别为1.8%、1.3%、1.3%，表明重复性良好。
2.7 加样回收率试验精密称取已知含量的复方消银颗粒（批号140723）约1.0 g，共10份，分别置100 mL量瓶中，其中第一份为空白，其余9份平均分为3组，每组分别精密加入178.5 μg·mL-1没食子酸对照品溶液0.5、1、1.5 mL，201.6 μg·mL-1黄芩苷对照品溶液0.5、1、2 mL，163.9 μg·mL-1黄芩素对照品溶液0.5、0.8、1.5 mL，再加40%甲醇水溶液定容至刻度，按“2.2.2”项下方法制备供试溶液，按“2.1”项色谱条件进样分析，记录峰面积，以外标法计算加样回收率，结果见表 2。
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表 2 回收率试验结果 Table 2 Results of recovery |
取复方消银颗粒3批（批号140721、140723、140726），分别按“2..2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件进行分析，测定峰面积，按外标法计算各样品中各成分的量，结果见表 3。
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表 3 样品测定结果（mg·g-1，n=2） Table 3 Results of sample determination |
根据文献报道[6-11]，没食子酸多采用甲醇-0.1%磷酸水溶液（5:95）为流动相，出峰时间均小于15 min；但经试验，黄芩苷、黄芩素在此条件下出峰很晚，在80 min时还未出峰；测定黄芩苷、黄芩素，多采用流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-水，梯度洗脱。因此，课题组考察以腈-0.1%磷酸水溶液和乙腈-水等为流动相的梯度洗脱系统，结果乙腈-0.1%磷酸水溶液分离效果较好，出峰时间适中。故本文选择流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱。
3.2 供试品溶液制备方法的考察本试验采用超声法制备供试品溶液，考察了浓度分别为20%、30%、40%、50%、60%甲醇水溶液对3个指标成分提取率的影响，发现40%甲醇水提取效果最好；同时考察了超声时间15、30、40、60 min对3个指标成分提取率的影响，发现超声30 min后含量达到最高，40 min之后，超声时间对各成分提取率影响不大。所以选择超声时间为30 min。
3.3 小结采用本法对3批复方消银颗粒中没食子酸、黄芩苷、黄芩素进行含量测定，结果3批样品中各成分含量波动不大，表明本方法能够在同一色谱条件下测定复方消银颗粒中多个主要成分的含量，有利于控制产品的质量。
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