牛磺酸（taurine）又称2-氨基乙基氨基酸，是广泛存在于体内的一种含硫的非蛋白氨基酸，是很多保健食品的成分之一^[1]。由于人体合成牛磺酸所需的半胱氨酸亚硫酸羧酶（CSAD）活性较低，因此人体主要依靠摄取食物中的牛磺酸来满足机体需要。牛磺酸具有保护视网膜、心肌、抗氧化作用，并有促进免疫功能、促进脂类吸收的作用，被广泛添加在保健食品中，但过量的牛磺酸能抑制体内其他营养元素的吸收，造成人体内营养失衡。因此建立保健食品中牛磺酸的简便、准确的定量方法是必要的。

目前测定牛磺酸的方法主要有酸碱滴定法^[2]、电位滴定法^[2]、薄层色谱法^[4-5]、气相色谱法^[6]、高效液相色谱法^[7-8]、离子色谱法^[9]、氨基酸分析仪测定法^[10]、液相色谱-质谱/质谱法^[11]、毛细管电泳法^[12]等。我国国家标准（GB/T 5009.169-2003）采用邻苯二甲醛柱前衍生法和薄层色谱法，衍生法操作复杂、衍生物稳定性差，而薄层色谱法、酸碱滴定法灵敏度和特异性均较差，无法准确定量，已逐渐被淘汰。王宏华等^[13]利用柱前在线衍生-高效液相色谱法测定了保健食品纳豆胶囊中的牛磺酸，黄丽丹等^[8]利用2，4-二硝基氟苯柱前衍生化HPLC法测定了保健食品中牛磺酸含量，均是利用衍生化的方法，过程繁杂；王洪健等^[10]利用氨基酸自动分析仪建立食品中牛磺酸的测定方法，但利用氨基酸自动分析仪所需要的时间较长且普及性不高；液相色谱-质谱/质谱法对痕量分析比较适用，陈晓峰等^[11]利用超高效液相色谱串联质谱法直接测定了婴幼儿乳粉中的牛磺酸。保健食品中牛磺酸含量较高，因此本文采用UPLC-ELSD测定不同剂型保健食品中牛磺酸的含量，前处理较为简单，方法通用性强，可避免繁杂的衍生过程，能准确、快速地测定保健食品中牛磺酸的含量。

1 仪器和试药

Waters E2695高效液相色谱仪，配备蒸发光散射检测器（美国Waters公司）；Vortex-Genie 2型涡旋混匀器（美国Scientific Industries公司）；Milli-Q纯水器（美国Millipore公司）；CPA225D电子天平（德国Sartorius公司）；KQ-1000KDB型超声波清洗器（中国昆山市超声仪器有限公司）。

乙腈、甲酸均为色谱纯，德国Merck公司；牛磺酸对照品，纯度≥99.0%，美国Fluka公司。色谱柱：BEH Amide（亚乙基桥杂化颗粒键合氨基）50 mm×2.1 mm，1.7 μm；Waters公司）。

实验用样品均从市场购买，分别为东方同乐口服液（批号20160403）；健尔聪学生口服液（批号20150303）；红景天口服液（批号160401）；力克保健液（批号20150725，20150613）；生命一号（批号20150113）；海王金樽牡蛎大豆肽肉碱口服液（批号20150821）；汤臣倍健鱼油牛磺酸软胶囊（批号20160403G）；海王牌DHA藻油锌牛磺酸软胶囊（批号20151001）；海王牌针叶樱桃牛磺酸维C咀嚼片（批号20150603）；佳加学生钙牛磺酸矿维咀嚼片（批号20160304028）；汤臣倍健氨基酸牛磺酸片（批号20140801A）；中和鸿业牌增强免疫力胶囊（批号20151101）。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：Waters BEH Amide（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相A：乙腈；流动相B：0.1%甲酸水；梯度洗脱（表 1）；流速：0.35 mL·min^-1；进样量：1μL；柱温：40 ℃；ELSD漂移管温度40 ℃；ELSD气体压力：150 kPa；增益值：100。

2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液

取牛磺酸100 mg，精密称定于10 mL量瓶中，加水溶解，稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液

液体制剂：用水进行适当稀释，过0. 22 μm滤膜作为供试品溶液。

固体制剂：取样品适量，研匀，精密称取细粉适量置于50 mL量瓶中，加水30 mL，频率提取10 min，加水稀释并定容至刻度，摇匀，过0. 22 μm滤膜作为供试品溶液；软胶囊：取软胶囊20粒，将内容物混匀，精密称取适量于50 mL量瓶中，用三氯甲烷150 μL完全溶解后用水稀释并定容至刻度，摇匀后过0. 22 μm滤膜作为供试品溶液；硬胶囊：取样品适量，研匀，精密称取细粉适量置于50 mL量瓶中，加水30 mL，频率提取10 min，加水稀释并定容至刻度，摇匀，过0. 22 μm滤膜作为供试品溶液。

2.2.3 空白溶液取纯水作为样品空白溶液。 2.3 系统适用性试验

精密量取空白溶液、对照品溶液及供试品溶液及进行测定，色谱图见图 1，A为空白溶液色谱图，B为对照品溶液色谱图，C1、C2、C3、C4分别为液体制剂、固体制剂、软胶囊、硬胶囊的典型色谱图。样品色谱图中，牛磺酸色谱峰与相邻谱峰的分离度均大于1.5。

2.4 线性关系考察

精密量取牛磺酸对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、2.0 mL，分别置10 mL棕色瓶中，用水稀释并定容至刻度，制成质量浓度为0.100 0、0.200 0、0.400 0、0.800 0、2.000 mg·mL^-1牛磺酸工作标准溶液。以质量浓度的对数值为横坐标（X），峰面积的对数值为纵坐标（Y）绘制标准曲线。线性方程：

$ \mathit{Y}{\rm{ = 1}}{\rm{.880}}\mathit{X}{\rm{ + 6}}{\rm{.821}}\;\;\;\;\mathit{r}{\rm{ = 0}}{\rm{.999}}\;{\rm{9}} $

牛磺酸质量浓度在0.100 0~2.000 mg·mL^-1范围内线性关系良好。

2.5 稳定性试验

取牛磺酸供试品溶液，每4 h进样1次，共进样12次，实验周期为48 h，结果表明牛磺酸对照品溶液在48 h内稳定性良好，RSD为1.4%。

2.6 重复性试验

液体制剂将红景天口服液（批号160401）制成6份不同的供试品溶液进样，得牛磺酸平均含量为0.501 0 mg·mL^-1，RSD为2.6%；固体制剂将海王牌针叶樱桃牛磺酸维C咀嚼片（批号20150603）制成6份不同的供试品溶液进样，测得牛磺酸平均含量为6.703 g/100 g，RSD为0.91%；软胶囊将汤臣倍健鱼油牛磺酸软胶囊（批号20160403G）制成6份不同的供试品溶液进样，测得牛磺酸平均含量为24.20 g/100 g，RSD为2.9%；硬胶囊将中和鸿业牌增强免疫力胶囊（批号20151101）制成6份不同的供试品溶液进样，得牛磺酸平均含量为19.18%，RSD为0.97%。结果表明，本方法的重复性良好。

2.7 加标回收率试验

取“2.2”项下的4种不同剂型保健食品进行加标回收率试验。液体制剂、固体制剂、软胶囊、硬胶囊添加水平相当于样品中分别为0.500 0 mg·mL^-1、6.000 g/100 g、20.00 g/100 g和20%，回收率在98.5%~ 100.7%范围内，RSD 0.48%~1.3%（n=6），回收率良好。

2.8 样品测定

精密量取供试品溶液1 mL，置进样瓶中，依法测定，用仪器软件计算结果。

12种不同剂型含牛磺酸的保健食品的测定结果见表 2。

3 讨论 3.1 供试品溶液的制备

将不同保健食品分为4种剂型，即液体制剂、固体制剂、软胶囊和硬胶囊，液体制剂、固体制剂和硬胶囊的供试品溶液制备相对简单，软胶囊无法直接用水溶解，因此，经过多种测试实验后，采用三氯甲烷约150 μL先将胶囊中的油状内容物完全溶解，再用水溶解制成供试品溶液，三氯甲烷因为量较少，对定容体积的影响可以忽略，方法也较为简单。

3.2 流动相的选择

牛磺酸具有较强极性，呈现弱酸性，使用液相色谱常用的C₁₈色谱柱没有保留。本实验采用酰胺基BEH Amide色谱柱进行分离，牛磺酸的保留较好。保健食品中添加了植物提取物、深海动物提取物、猪脑提取物、维生素、鱼油、蜂蜡、阿斯巴甜、安赛蜜、蔗糖、卵磷脂、氨基酸、脑磷脂等成分，基质较为复杂，其杂质成分在通用性的蒸发光检测器均可能出现响应信号，从而干扰目标物牛磺酸的测定，因此，本实验特别优化了色谱分离条件，通过调节流动相的比例并采用梯度洗脱的方式，做到了牛磺酸与干扰杂质的彻底分离。测定了市面上常见的12种保健食品，杂质与牛磺酸均可得到基线分离。

3.3 蒸发光检测器参数的选择

蒸发光散射检测器（ELSD）是通用型检测器，可以检测任何挥发性低于流动相的有机物质。其原理为首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测，主要包括雾化、蒸发和检测3个步骤，涉及到的2个主要参数是载气压力和漂移管温度，本方法对这2个参数进行了优化。

本实验分别考察了漂移管温度为30、40、50、60、70、80 ℃和载气压力为100、125、150、175、200 kPa时牛磺酸的信噪比，结果表明，漂移管温度为40 ℃、载气压力为150 kPa时牛磺酸的信噪比最大。

3.4 本方法的优势

保健食品中牛磺酸的含量一般较高，因此采用HPLC-ELSD法避免了国家标准（GB/T 5009.169-2003）方法中的衍生化过程，简化了前处理过程，节省试剂，环保。

4 结论

本文建立了超高效液相色谱-蒸发光散射（UPLC-ELSD）测定保健食品中牛磺酸含量的方法。该方法简单、快速、高效，适用于保健食品中牛磺酸含量的测定。为保健食品中牛磺酸的标准测定方法的制定和修订提供参考依据。