2017, Vol. 37 
丁基胶塞是药品包装中瓶装密封材料的重要组成部分。一般情况下药用丁基胶塞在使用过程中直接与药物接触，虽然丁基橡胶具有良好的气密性和化学惰性，但在使用过程中，仍然存在与药物的相互作用，甚至影响药物的物化性质和药理作用[1-3]。试验表明，橡胶塞与注射液接触时，可能会出现橡胶塞吸收注射剂中的有效成分或者橡胶塞中的成分也可能被浸出至溶液中。这些浸出物可能会干扰有效成分的分析，使注射液产生毒性或热原，与药物的抗菌防腐剂相互作用导致失效，影响制剂的化学和物理稳定性[4-6]。
试验表明，橡胶塞与橡胶制品在加工、贮存或使用过程中，会受到热、氧、光等环境因素的影响而逐渐发生物理及化学变化，使其性能下降，并失去使用价值，这种现象称为橡胶的“老化”[7-10]。为了获得经久耐用的橡胶制品，就要在胶料配方中加一些能抑制导致橡胶老化的物质，这类物质统称“防老剂”[11-13]。在胶塞的贮存过程中，这些物质不可避免的会迁移到胶塞表面，从而影响或者污染药物。因此，考察药物与其包装材料的相容性成为一项迫切的任务[14-16]。
本文采用HPLC法测定胶塞中抗氧剂β-（4-羟基-3，5二叔丁基苯基）丙酸十八醇酯（即抗氧剂1076）向注射用米卡芬净钠药液中的迁移。该方法检出限低，污染小，前处理过程简单，方法可靠，为药包材的质量研究以及药物与药包材的相容性试验提供参考。
1 仪器与试药LC-20A，高效液相色谱仪（日本岛津公司）；2695-2489/2998高效液相色谱仪（美国Waters公司）。固相萃取小柱：HLB 200 mg/6 mL，30 PK，以二乙烯基苯聚合物为填料，（美国月旭公司）。XTerra C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），以十八烷基硅烷键合硅胶为填料（美国沃特世公司）；抗氧剂1076（β-（4-羟基-3，5二叔丁基苯基）丙酸十八醇酯）：美国SIGMA-ALDRICH公司，批号：Lot MKBH7224V，含量99 %。无水乙醇，分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号：2015012801；二氯甲烷，分析纯，成都长联化工试剂有限公司，批号：20110518；甲醇，色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司，批号：144639；甲苯，分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号：2014022801。注射用冷冻干燥用卤化丁基橡胶塞（溴），已知其抗氧剂1076含量为0.1%，规格：20-D2-2，批号：S130300201。注射用米卡芬净钠，规格：按C56H70N9NaO23S计为50 mg/10 mL，批号：140401、140402、140403。
2 方法与结果 2.1 色谱条件与专属性试验色谱柱：Waters XTerra C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相：甲醇:水（98:2）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：37 ℃；测定波长：277 nm。空白溶剂无干扰，系统适应性符合中国药典的规定，理论塔板数大于1 000。抗氧剂1076对照品色谱图、二氯甲烷色谱图、无水乙醇色谱图、甲醇色谱图、米卡芬净钠色谱图、胶塞中1076色谱图分别见图 1~6。
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A.色谱图（chromatogram）B.峰纯度（purity figure）C.峰轮廓（peak profile） 图 1 1076对照品图谱 Figure 1 The spectrogram of antioxidant 1076 |
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图 2 二氯甲烷色谱图 Figure 2 The chromatogram of dichloromethane |
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图 3 无水乙醇色谱图 Figure 3 The chromatogram of absolute ethyl alcohol |
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图 4 甲醇色谱图 Figure 4 The chromatogram of methyl alcohol |
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图 5 米卡芬净钠色谱图 Figure 5 The chromatogram of micafungin sodium |
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A.色谱图（chromatogram）B.峰纯度（purity figure）C.峰轮廓（peak profile） 图 6 胶塞中1076色谱图 Figure 6 The spectrogram of antioxidant 1076 in rubber stopper |
根据每日最大剂量不超过300 mg的使用说用，取注射用米卡芬净钠样品6瓶（每瓶含米卡芬净50 mg），每瓶各加入5.00 mL超纯水溶解后，混合均匀，以1~2 mL·min-1的流速缓慢过小柱，加水3 mL冲洗小柱，抽干，用二氯甲烷：无水乙醇（2：3）5 mL洗脱小柱，洗脱液用二氯甲烷：无水乙醇（2：3）定容至5 mL。滤过，即得。
2.3 线性关系考察精密称取1076对照品（含量99 %）50.51 mg于50 mL量瓶中，用5 mL二氯甲烷溶解，再用无水乙醇稀释至刻度，制成1 000 μg·mL-1的对照品溶液A。分别吸取对照品A溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5、10 mL置100 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，制得浓度分别为1、2、5、10、20、50、100 μg·mL-1的线性系列溶液。精密吸取该系列溶液各20 μL进样，记录色谱图，绘制峰面积与对照品溶液浓度的标准曲线，回归方程为：
Y=3.670×103X-210.47 r=0.999 9
1076溶液在1~100 μg·mL-1的范围内与色谱峰面积线性关系良好。
2.4 精密度试验精密量取对照品溶液20 μL，进样6次，结果峰面积的RSD=0.10 %，说明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验将对照品溶液放置0、4、12、24、48 h，分别取20 μL进样，峰面积的RSD=1.6 %，表明对照品溶液放置48 h稳定。
2.6 回收率试验按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，在小柱中加入注射用米卡芬净钠的同时，分别精密加入“2.3”项下制备的浓度为5、10、20 μg·mL-1的线性系列溶液各100 μL，每个浓度平行试验3份。抗氧剂1076的平均回收率为（n=9）98.1 %，峰面积的RSD=1.0 %，回收率好。
2.7 重复性试验按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，在小柱中加入注射用米卡芬净钠的同时，分别精密加入“2.3”项下制备的对照品A溶液100 μL，平行试验6份，抗氧剂1076的平均回收率为（n=6）98.6 %，峰面积RSD=0.83 %，方法重复性良好。
2.8 耐用性试验作线性试验时采用了美国Waters2695-2489和日本岛津LC-20A高效液相色谱仪两种仪器，均能得到良好的线性曲线，说明方法耐用性良好。
2.9 最低检测限精密量取对照品溶液20 μL进样，信噪比为3.0，计算检测限为0.2 μg·mL-1，定量限为0.5 μg·mL-1。
2.10 样品含量的计算取各批号注射用米卡芬净钠样品，按“2.2”项下配制供试品溶液，进样测定，结果见表 1。
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表 1 注射用米卡芬净钠中抗氧剂1076含量（μg·mL-1） Table 1 antioxidant 1076 in micafungin sodium injection |
取各批号注射用米卡芬净钠，于40 ℃、相对湿度75%贮存6月，按“2.2”项下配制供试品溶液，进样测定，结果见表 2。
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表 2 40 ℃、相对湿度75%贮存6月的注射用米卡芬净钠中抗氧剂1076含量（μg·mL-1） Table 2 antioxidant 1076 in micafungin sodium injection storaged for six monthsunder 40 ℃、75% |
在前期胶塞的提取试验中曾经尝试用甲苯作为溶剂进行提取，从溶剂对人员和环境的安全性考虑，拟选用低毒性的溶剂来代替，从抗氧剂1076的溶解性试验结果进行筛选，选用二氯甲烷和无水乙醇为溶剂，抗氧剂1076在二氯甲烷中易溶，故胶塞选用二氯甲烷和无水乙醇（体积比为2：3）来提取。
3.2 固相萃取小柱的选择由于抗氧剂不溶于水，采用亲水亲脂的HLB固相萃取小柱。选用美国月旭公司生产的chromclean HLB 200 mg/6 mL，30 PK，效果较好。临用时用甲醇5 mL，水5 mL活化小柱。
3.3 样品的处理由于抗氧剂在胶塞中的含量很小，迁移进入药液中的量就更小，考虑首先测得胶塞中抗氧剂1076的含量，再测定迁移进入药液中的量。迁移采用固相萃取小柱HLB型将抗氧剂富集在小柱上用适宜的溶剂将其洗脱再测定的方法。将注射用米卡芬净钠过小柱，用二氯甲烷：无水乙醇（2：3）5 mL洗脱，结果在2 min左右出现很大的干扰峰，并且该峰有很长的拖尾，抗氧剂1076的峰出现在该峰拖尾处，说明米卡芬净钠主药有干扰。需要洗脱米卡芬净钠而不损失抗氧剂，采用水洗的方法，加入3 mL超纯水进行洗涤，米卡芬净钠主药中干扰峰的拖尾得以改善。同时，在选择流动相时，考虑到米卡芬净钠主药中拖尾峰的影响，在流动相中加入一定比例的水，使目标峰后移，从而排除干扰。
3.4 实验结果结果显示，各批号注射用米卡芬净钠及在温度40 ℃，相对湿度75%的环境中经过6个月高温度高相对湿度加速试验的样品中均未检测出抗氧剂1076。该批胶塞与该药物相容性良好。
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