陈皮（Citri Reticulatae Pericarpium）为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，分为“陈皮”和“广陈皮”^[1]。主要含有挥发油、黄酮类化合物、生物碱、多糖和无机元素等成分^[2-7]，具有抗休克、抗动脉硬化、疏肝利胆、抗过敏、抗血栓形成等药理作用^[8]。广陈皮正品为茶枝柑（Citrus reticulata ‘Chachi’）的干燥成熟果皮，主产于广东新会，又名新会陈皮，是广东道地药材，为十大广药之一，是临床用药的首选药材。但是陈皮分布广、栽培变种多、基源复杂，且市场上陈皮和广陈皮的价格差异较大，质量参差不齐，可谓“鱼龙混杂”，严重影响了其临床用药的安全性和有效性。

关于陈皮与广陈皮，已有HPLC指纹图谱鉴别^[9]、近红外光谱定性鉴别^[10]、近红外光谱一致性检验^[11]等鉴别方法。黄酮类化合物是广陈皮中含量较多的一类化合物，而且具有明显的药理活性。其黄酮类成分有两大类型：一类是黄酮苷类，主要为二氢黄酮类成分，例如橙皮苷（图 1）等；另一类是多甲氧基黄酮类，主要有川陈皮素、橘皮素（图 1）等^[12]。本实验选取陈皮中橙皮苷、川陈皮素和橘皮素，通过测定这3种黄酮类成分含量，比较不同品种样品其含量比值，得到道地“广陈皮”中3种黄酮类成分的含量比值，作为实际中广陈皮道地性鉴别的一种新方法。

1 仪器与试药

Waters Acquity UPLC system液相色谱仪系统，包括二元泵处理器、样品处理器、UV检测器、柱温箱及Empower色谱工作站；Acquity UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm，1.7 μm；填料：亚乙基桥杂化颗粒）色谱柱（沃特世科技有限公司）；Millipore Mill-Q纯水系统（Millipore公司），十万分之一电子分析天平METTLER-XS205（Sartorius公司）。

收集了50批自制陈皮，18批商品陈皮和24批其他单位或个人制陈皮，共92批；其中广东新会的茶枝柑品种有37批，剩余55批为其他产地的非茶枝柑品种，产地包括了广东、四川、浙江、福建、江西等地。药材均经广东省药品检验所林惠蓉主任中药师鉴定。各类陈皮药材种类名称及产地来源见表 1、表 2。

对照品：橙皮苷（含量95.3%），中国食品药品检定研究院，批号110721-201115；川陈皮素（含量98.59%），北京世纪奥科生物技术有限公司，批号140316；橘皮素（含量99.27%），北京世纪奥科生物技术有限公司，批号130319。

乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，试验用水为MIlipore超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 溶液制备 2.1.1 供试品溶液

取陈皮粉末（过2号筛）0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称量，超声（功率300 W，频率40 kHz）处理45 min，放冷，用甲醇补足减失的量，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.1.2 混合对照品溶液

分别精密称取橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的对照品适量，以甲醇配成每1 mL含橙皮苷0.958 0 mg、川陈皮素1.006 0 mg、橘皮素0.983 0 mg的对照品母液；分别精密移取橙皮苷、川陈皮素、橘皮素对照品母液适量，用甲醇配成每1 mL各含橙皮苷0.766 4 mg、川陈皮素0.201 2 mg、橘皮素0.196 6mg的混合溶液，即得。

2.2 色谱条件^[12]

色谱柱：Acquity UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0~4 min，9%A→22%A，91%B→78%B；4~10 min，22%A→53%A，78%B→47%B；10~11 min，53%A→100%A，47%B→0%B；11~12 min，100%A，0%B）；流速：0.42 mL·min^-1；检测波长：283 nm；柱温：30 ℃；进样量：2 μL。在上述色谱条件下，对照品及陈皮样品的色谱图见图 2。

2.3 方法学考察 2.3.1 线性范围考察

精密吸取混合对照品溶液2 μL，分别在“2.2”项色谱条件下进样测定，以各进样量X（μg）为横坐标，色谱峰峰面积Y为纵坐标，进行线性回归处理，得橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的回归方程：

Y=3.000 0×10⁶X+1.452 8×10⁵ R²=0.999 9

Y=4.000 0×10⁶X+2.608 6×10³ R²=0.999 5

Y=5.000 0×10⁶X-3.308 5×10³ R²=0.999 8

其线性范围分别为0.383~1.916、0.002~0.402和0.002~0.393 μg。

2.3.2 精密度试验

取混合对照品溶液按“2.2”项下条件连续进样6次，测得峰面积积分值，计算RSD，结果橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的RSD分别为0.5%、0.6%、0.7%，表明仪器的精密度良好。

2.3.3 重复性试验

取同一样品（编号57）约0.5 g共6份，精密称定，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的平均含量分别为31.896、3.080、1.940 mg·g^-1，RSD分别为1.3%、1.2%、0.9%，表明方法重复性良好。

2.3.4 稳定性试验

精密吸取同一样品（编号57）的供试品溶液，分别在制备后0、5、10、15、18、20及24 h进样2 μL，计算橙皮苷、川陈皮素、橘皮素峰面积的RSD分别为1.2%、1.4%、1.3%，结果表明，供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.3.5 加样回收率试验

取同一样品（编号57）约0.25 g共9份，精密称定，分别加入高、中、低3个浓度的橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的对照品溶液，按“2.1.1”项下方法制备供试溶液，进样测定橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的量，计算回收率和RSD；结果见表 3，表明本法准确度好。

2.4 样品的测定

取92批不同品种的陈皮药材，按“2.1.1”项方法制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件进样分析，将测得的峰面积代入回归方程，计算陈皮中3种黄酮类成分含量，每批测定2次。比较不同品种陈皮中3种黄酮类成分的含量，见表 4。对11个品种陈皮中橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的比值进行比较，见表 5。得到茶枝柑即广陈皮中3种黄酮类成分含量分别为（34.72±1.74）mg·g^-1、（3.36±1.62）mg·g^-1、（1.83±0.47）mg·g^-1，含量比值为19:2:1。

2.5 聚类分析

利用SPSS 19.0统计学软件，Ward’s聚类分析法计算不同陈皮橙皮苷、川陈皮素和橘皮素含量的距离，聚类结果见图 3。由聚类分析树状图可以得出，当光谱距离 < 8时，92个样品可聚成四类：第Ⅰ类：茶枝柑；第Ⅱ类：蕉柑、樟头红；第Ⅲ类：混合区（包括温州蜜橘、大红袍、十月橘、红橘、椪柑、芦柑、贡柑）；第Ⅳ类：混合区（包括大红袍、温州蜜橘、十月橘、南丰蜜橘）。结果表明利用不同陈皮橙皮苷、川陈皮素和橘皮素含量对其进行Ward’s聚类分析法，可准确鉴别广陈皮（茶枝柑）。

2.6 主成分分析

利用SPSS 19.0对92批陈皮样品进行主成分分析。以橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量为变量，计算主成分贡献率和得分。实验中共提取了2个主成分，第一主成分（PC1）的方差贡献率为56.6%，第二主成分（PC2）的方差贡献率为36.7%，两者的累计贡献率为93.3%，表明可利用主成分分析92批陈皮样品。利用第一主成分、第二主成分的得分，做92批陈皮样品的分布图（图 4）。结果发现所有的样品被很好地分成4个区，即A：大红袍区；B：混合区，包含十月橘、贡柑、椪柑、芦柑、南丰蜜橘、樟头红、温州蜜橘、红橘；C：茶枝柑区；D：蕉柑区。

3 讨论

从表 3可知：11个不同来源的陈皮中均含有橙皮苷、川陈皮素和橘皮素。其中南丰蜜橘中3种成分的含量均最高，而蕉柑中橙皮苷含量最低、温州蜜橘中川陈皮素含量最低、大红袍中橘皮素含量最低。但茶枝柑的黄酮类含量并无最高或最低的特征。

利用11个不同来源的陈皮中橙皮苷、川陈皮素和橘皮素含量作其比值，由表 4得到茶枝柑比值为19:2:1。其中，红橘为16:2:1，与茶枝柑含量比值相近，故临床可能作为广陈皮的替代品，具体临床效果需进一步深入研究。

以橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量为变量，对92批陈皮样品进行聚类分析和主成分分析，可准确鉴别广陈皮和其他陈皮，与其聚类分析结果相照应，为广陈皮的道地性鉴别提供依据。

茶枝柑、大红袍和温州蜜柑均是中国药典2015年版一部收载的陈皮，检测其橙皮苷含量。从表 4可知，大红袍和温州蜜柑中橙皮苷、川陈皮素和橘皮素含量比值分别为352:1:1和675:2:1，橙皮苷含量明显高于川陈皮素、橘皮素。陈皮所含成分复杂，功效多样，按照药典标准以含量较高的橙皮苷单一成分作为检测指标，难以体现陈皮多成分、多功效的特点，且仅以单一成分控制质量，不能较好地说明陈皮的内在质量，因此，多指标的含量测定显得更为科学可靠。本实验得到道地“广陈皮”中橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量比值，通过陈皮3种黄酮类成分的含量比值鉴别广陈皮，可作为实际中广陈皮道地性鉴别的一种新方法。但是本次实验也存在不足：广陈皮的样本量需要加大；红橘代替广陈皮需做临床试验，进一步完善实验内容。