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文章信息
- 王颖娟, 张培, 李子忠
- WANG Yingjuan, ZAHNG Pei, LI Zizhong
- 蚁狮多糖对小鼠炎症模型影响的实验研究
- Effecets of Antlion Polysaccharide on Different Inflammation Models of Mice
- 四川动物, 2016, 35(2): 266-269
- Sichuan Journal of Zoology, 2016, 35(2): 266-269
- 10.11984/j.issn.1000-7083.20150269
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文章历史
- 收稿日期: 2015-09-05
- 接受日期: 2015-11-21
2. 贵州大学, 贵阳 550025
2. Guizhou University, Guiyang 550025, China
蚁狮(antlion)别名地牯牛、沙猴、倒退虫、沙牛等,隶属脉翅目Neuroptera蚁蛉科Myrmeleontidae,是一种重要的药用昆虫(药用动物志协作组,1983;周汉辉,杨集昆,2000)。其性味咸、辛、温,归肝、肾、膀胱经,解热,镇痛,化疗毒,祛瘀散结等,可用于沙淋、疟疾、骨髓炎、脉管炎、泌尿系结石、胆结石等症(吴德邻,1994),尤其对骨髓炎、脉管炎有奇效(王华明,王华新,1993;王启民,1991;吴钧俊,2003)。蚁狮作为一种传统的药用昆虫,为全虫入药,药用成分不明确,目前尚未见对蚁狮药用活性成分的相关报道。本实验通过测定蚁狮多糖对小鼠几种炎症模型的影响,以期为蚁狮的有效药用成分的确定提供一定的实验基础。
1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物SPF级KM小鼠,雌雄各半,体质量20 g±2 g,实验动物生产许可证号:SCXK(黔)2012-0001,实验动物使用许可证号:SYXK(黔)2012-0001,购于贵州医科大学实验动物中心。
1.1.2 药品及试剂萘丁美酮片,中美史克制药有限公司。西米替丁,山西省大同市利群药业有限公司。伊文思蓝(Evan’s blue),北京百泰克生物技术有限公司进口分装。无水乙醇、醋酸、二甲苯均购于成都化学试剂厂。
蚁狮多糖按照优化的多糖提取工艺(另文发表)自制,配制为高、中、低3个剂量组,受试物剂量均折算为原动物生药剂量,分别为500 mg·kg-1、250 mg·kg-1、125 mg·kg-1。
1.2 方法 1.2.1 急性毒性试验小鼠随机分为4组,每组12只,小鼠给药前隔夜禁食不禁水,编号后将提取物一次性经口灌胃给药。受试物分4个剂量组,高剂量组为提取原液,按1: 0.8设组间间距。给药2 h后进食。连续观察小鼠灌胃14 d后的毒性反应,计算半致死数量(LD50)。处死小鼠后解剖,观察各脏器变化。
1.2.2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用和毛细血管通透性改变的影响小鼠随机分为5组,每组12只。各组均灌胃给药,对照组给予生理盐水0.1 mL/10 g 体质量,每天1次,连续4 d。末次灌胃2 h后,尾静脉注射Evan’s blue 50 mg·kg-1,于小鼠右耳双面涂二甲苯(25 L每面,20 min后拉颈处死,沿耳廓基线剪下双耳,用7.5 mm的打孔器分别在双耳同一部位打下耳片,称重,计算肿胀度。两耳片剪碎,分别置于3 mL丙酮-生理盐水(V/V=7:3)中浸泡24 h,离心15 min取上清,于610 nm波长处用分光光度计比色,计算毛细血管通透性。
1.2.3 对小鼠琼脂性肉芽组织增生的影响沿小鼠背部中线皮下注射无菌2%琼脂每只0.5 mL。24 h后随机分为5组,每组12只。各组均经口灌胃给药,对照组给予生理盐水0.1 mg/10 g体质量。每天1次,连续7 d,末次灌胃后24 h拉颈处死。剪开背部皮肤,剥离肉芽肿琼脂块,用分析天平迅速称量肉芽肿湿重。
1.2.4 对鸡蛋清致小鼠足跖肿胀的影响小鼠随机分为5组,每组12只。均经口灌胃给药或给予生理盐水,每天1次,连续4 d。末次灌胃30 min后麻醉小鼠,于每只小鼠右后足跖皮下注射新配成的10%浓度的鸡蛋清0.1 mL。观察肿胀达到高峰时间和消退时间,计算与0 h时足跖厚度的差值,用以表示肿胀度。当抑制率>30%且差异有统计学意义时,则可评定有抗炎作用。
1.2.5 对小鼠醋酸性扭体反应的影响小鼠随机分为5组,每组12只。各组均经口灌胃给药或给予生理盐水,每天1次,连续4 d。末次灌胃2 h后,尾静脉注射2% Evan’s blue 0.1 mL,10 min后,腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL。观察20 min内小鼠的扭体次数,计算抑制率。
1.2.6 对实验性腹膜炎小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响小鼠随机分为5组,每组12只。各组均经口灌胃给药或给予生理盐水,每天1次,连续4 d。末次灌胃2 h后,尾静脉注射2%Evan’s blue 0.1 mL,10 min后,腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL,造成实验性腹膜炎模型。20 min后处死,剪开腹腔,用2 mL生理盐水冲洗腹腔,冲洗3次,吸取腹腔洗出液,混匀后取1滴于细胞计数板上计数白细胞量,余液离心15 min后取上清液,于590 nm波长处用分光光度计比色,测得的吸光度值表示腹腔毛细血管通透性,计算抑制率。
1.2.7 对小鼠醋酸烧灼性胃溃疡、无水乙醇胃粘膜损伤的抑制作用小鼠随机分为10组,每组12只,各组均经口灌胃给药或给予生理盐水,每日1次,连续4 d。从第2天给药后开始禁食48 h。于末次灌胃2 h后,分组灌胃1%醋酸、无水乙醇0.6 mL,1 h后处死,结扎幽门和贲门。取出胃,胃内注射生理盐水0.5~1 mL,置于10%福尔马林溶液中固定10 min后,沿胃大弯切开。观察并评定溃疡指数。溃疡指数评定方法:胃腺区出现条索状损伤的长度大于1 mm者,测量其长度,每mm计1分,宽度大于1 mm者计分加倍,长度和宽度均小于1 mm者,计0.5分,计分相加即为小鼠的溃疡指数。
2 结果 2.1 蚁狮多糖的急性毒性试验给药后,连续观察14 d未见小鼠死亡,小鼠生长良好,外观、行为活动、精神状态、饮食、大小便及颜色、皮肤和皮毛等均未见异常,给药14 d后,体质量均有增加。处死小鼠后解剖,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等各种内脏器官,与未给药小鼠相比均无异常改变。受试物LD50大于3000 mg·kg-1,表明受试物无急性中毒的危险性,属于基本无毒的化学物。
2.2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用和毛细血管通透性改变的影响对照组小鼠右耳与左耳相比明显肿胀,耳片增厚,血管扩张,Evan’s blue在整个右耳炎症组织中均有分布,蓄积程度增高明显,耳片呈现出蓝色,蚁狮多糖高、中剂量组小鼠右耳的炎症反应明显较弱,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀和毛细血管 通透性增加的抑制率均大于30%;与对照组相比,蚁狮多糖高、中、低剂量组小鼠的毛细血管通透性明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01);与萘丁美酮效果相近。提示蚁狮多糖有降低炎症渗出、水肿的作用,有利于减轻急性炎症时脏器水肿、阻塞的病理改变(表 1)。
分组 | 剂量/(mg·kg-1) | 肿胀度/mg | 抑制率/% | 毛细血管通透性/(A610×103) |
蚁狮多糖高剂量组 | 500 | 4.75±1.32a** | 74.56 | 88.38±12.51a** |
蚁狮多糖中剂量组 | 250 | 9.84±1.03b** | 47.29 | 147.52±13.66b** |
蚁狮多糖低剂量组 | 125 | 12.50±1.55d* | 33.06 | 166.00±18.42d* |
萘丁美酮组 | 250 | 6.17±1.18c** | 66.92 | 112.50±14.82c** |
对照组 | — | 18.67±0.65e | — | 288.35±18.42e |
注:表中数据为平均值±标准误,同列数据后的不同上标字母表示差异有统计学意义,相同上标字母表示差异无统计学意义(多重比较LSD); 给药组与对照组比较, * P<0.05,** P<0.01; 下表同。 Notes: data in table are mean±SE, values within a column followed by different superscripts are significantly diffetent (LSD multiple comparison); compared with the control group, * P<0.05; ** P<0.01; the same below. |
对照组小鼠肉芽肿周围血管扩张、出血明显;其余各组小鼠肉芽肿周围较干净,无出血、红肿情况。蚁狮多糖各剂量组对小鼠琼脂性肉芽组织增生均有一定程度的抑制作用,抑制作用的大小存在差异(表 2)。蚁狮多糖高、中剂量组能明显抑制小鼠琼脂性肉芽组织增生,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。提示蚁狮多糖抗慢性增生性炎症的作用与剂量相关。
分组 | 剂量/(mg·kg-1) | 肉芽肿湿重/mg | 抑制率/% |
蚁狮多糖高剂量组 | 500 | 385.11±14.64a** | 24.42 |
蚁狮多糖中剂量组 | 250 | 407.81±6.79a** | 19.96 |
蚁狮多糖低剂量组 | 125 | 451.19±11.07b* | 11.45 |
萘丁美酮组 | 250 | 411.44±6.78ab** | 19.26 |
对照组 | — | 509.56±6.42c | — |
各组均在注射鸡蛋清后60 min达到肿胀高峰,与对照组比较,差异有统计学意义(表 3)。高剂量蚁狮多糖在抑制鸡蛋清致小鼠足跖肿胀中有非常明显的作用,表现为达到肿胀高峰时肿胀度最低,说明 在药物的作用下,小鼠对致炎因子的致炎作用敏感性降低;肿胀消退时间短,90 min后足跖厚度基本恢复到正常水平。
分组 | 剂量/(mg·kg -1) | 肿胀度/mm | 抑制率/% | ||
30 min | 60 min | 90 min | |||
蚁狮多糖高剂量组 | 500 | 0.91±0.15 a** | 1.08±0.10 a** | 0.34±0.06 a** | 61.83 |
蚁狮多糖中剂量组 | 250 | 1.21±0.24 a* | 1.41±0.19 ab** | 0.57±0.08 ab** | 50.18 |
蚁狮多糖低剂量组 | 125 | 1.26±0.15 a* | 1.66±0.25 b** | 0.86±0.12 bc | 41.34 |
萘丁美酮组 | 250 | 1.18±0.15 a* | 1.36±0.05 ab** | 0.53±0.08 ab** | 51.94 |
对照组 | — | 1.68±0.20 b | 2.83±0.30 cd | 1.23±0.16 c | — |
与对照组比较,蚁狮多糖各剂量组能显著降低小鼠的扭体反应(P<0.01或P<0.05)(表 4)。说明蚁狮多糖具有一定的镇痛作用。
分组 | 剂量/(mg·kg-1) | 20 min扭体次数 | 抑制率/% |
蚁狮多糖高剂量组 | 500 | 14.88±3.08a** | 65.89 |
蚁狮多糖中剂量组 | 250 | 26.63±3.41ab* | 38.96 |
蚁狮多糖低剂量组 | 125 | 29.88±5.12bc* | 31.52 |
萘丁美酮组 | 250 | 18.25±2.52a** | 58.17 |
对照组 | — | 43.63±4.46d | — |
与对照组比较,蚁狮多糖高、中剂量组对实验性腹膜炎小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显抑制作用(P<0.05);蚁狮多糖低剂量组与对照组差异无统计学意义(表 5)。说明蚁狮多糖对急性渗出炎症具有一定的抑制作用。
分组 | 剂量/(mg·kg-1) | 毛细血管通透性/(A590×103) | 白细胞数/(个/mL) |
蚁狮多糖高剂量组 | 500 | 121.11±11.04bc* | 1.77×105±0.38×105bc* |
蚁狮多糖中剂量组 | 250 | 133.31±27.37b* | 1.94×105±0.27×105b* |
蚁狮多糖低剂量组 | 125 | 163.31±17.31ab | 2.04×105±0.38×105ab |
萘丁美酮组 | 250 | 93.65±13.12c** | 1.48×105±0.21×105c** |
对照组 | — | 199.91±18.54a | 2.79×105±0.34×105a |
蚁狮多糖各剂量组小鼠2种类型胃溃疡的溃疡指数与对照组相比差异无统计学意义(表 6),表明蚁狮多糖对小鼠醋酸性胃溃疡和无水乙醇胃粘膜损伤没有抑制作用。
分组 | 剂量/(mg·kg -1) | 醋酸性烧灼型胃溃疡 | 无水乙醇致胃溃疡 | ||
溃疡指数 | 抑制率/% | 溃疡指数 | 抑制率/% | ||
蚁狮多糖高剂量组 | 500 | 18.58±1.02 a | — | 128.40±4.11 a | — |
蚁狮多糖中剂量组 | 250 | 18.67±0.88 a | — | 132.68±5.68 a | — |
蚁狮多糖低剂量组 | 125 | 17.86±1.50 a | — | 139.73±7.12 a | — |
西米替丁组 | 250 | 10.70±0.46 b** | 43.86 | 88.31±3.36 b** | 35.87 |
对照组 | — | 19.06±1.08 a | — | 137.70±6.89 a | — |
炎症是人类疾病中一种最常见的病理过程,是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应,可以发生在机体的任何部 位或组织,以血管反 应为主要特征和防御的中心环节(欧阳学农等,2006;孟庆龙等,2011;李伟平等,2012)。骨髓炎是由细菌侵入机体而致的一种化脓性感染病,是整个骨组织,包括骨膜、骨皮质、骨髓均受感染而产生的一系列病变,并不是人们通常所理解的单纯骨髓发炎。在感染的急性期,病变区有渗出性改变,骨髓腔内有渗出液和炎性细胞浸润,引起骨组织炎症发生,骨坏死和局部感染扩散,可穿过骨皮质播散至骨膜下并形成皮下脓肿,严重会造成死骨、死腔、窦道的形成。骨髓炎一般伴随炎症的发生。现代医学的急、慢性化脓性骨髓炎在中医上称为附骨疽(张丽华等,1999)。多种医书记载蚁狮具有治疗骨髓炎作用,郭永来(2010)在《杏林集叶》记载了以蚁狮为君药的处方,疗效独特;蚁狮也被广西某医院用于治疗骨髓炎的主药,治疗效果达90%以上(吴钧俊,2003)。
本文进行了蚁狮多糖抗炎药效学的动物实验研究,以期用实验证据证明其是否具有抗炎作用。实验考察了蚁狮多糖对小鼠不同炎症模型的抑制作用,结果显示蚁狮多糖具有显著的抗肿胀性炎症、抗渗出性炎症、抗增生性炎症以及镇痛的作用,对确定蚁狮药用的有效成分有重要意义。
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