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文章信息
- 徐磊, 吴登虎, 陈飞兰, 张邓华, 周俊, 王晓佳, 潘永全, 毕小云
- XU Lei, WU Denghu, CHEN Feilan, ZHANG Denghua, ZHOU Jun, WANG Xiaojia, PAN Yongquan, BI Xiaoyun
- 斑马缺硒病的血液细胞和血液生化指标测定
- Measurement of Blood Cell and Blood Biochemical in Selenium-deficiency Zebras
- 四川动物, 2016, 35(1): 113-116
- Sichuan Journal of Zoology, 2016, 35(1): 113-116
- 10.11984/j.issn.1000-7083.20150185
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文章历史
- 收稿日期: 2015-05-18
- 接受日期: 2015-08-25
2. 重庆动物园, 重庆 400050;
3. 重庆医科大学附属第一医院检验科, 重庆 400016
2. Chongqing Zoo, Chongqing 400050, China;
3. Department of Test, the First Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China
斑马是一类常见于非洲的动物,属奇蹄目Perissodactyla马科Equidae,包括普通斑马Equus quagga、狭纹斑马E. grevyi和山斑马E. zebra(孙忻,2014)。斑马在国内动物园具有很高的展出和观赏价值,因此各动物园都十分重视斑马的饲养、繁殖和疾病防治。目前关于斑马的研究主要集中在生活习性、寄生虫和细菌微生物引起的传染性疾病(陈永林等,2000;王喜军等,2014),以及一些马属动物的常见病,如便秘结症、胀气、腹泻及关节扭伤等外伤。
某动物园饲养斑马已有多年历史。近年来,该园发生4只斑马同期发病的情况,以运动障碍、呼吸困难为主要病征,经临床观察、尸体解剖、病理学检查、血液细胞和血液生化指标分析,最后确诊为斑马缺硒病。
硒是生物体必需的微量元素,同时硒蛋白作为哺乳动物酶系统的基本成分,可以分解正常代谢过程中产生的有毒过氧化物,进而保护细胞中重要的膜结构不受损害(赵春霞,杨焕民,2004;汪开毓等,2009)。当动物体内缺硒或者供给不足时,就会造成动物机体在生理生化、营养代谢过程中发生紊乱,引起机体细胞变性坏死,出现一系列疾病,如常见于羔羊、仔猪、犊牛幼畜的营养性肌病或白肌病、鸡渗出性素质病、仔猪肝营养不良和桑葚心等(董勇等,2011;丁元霞,2013)。
本文主要从血液生理生化指标分析、指标测定探讨斑马缺硒病的诊断方法,为斑马缺硒病诊断学方面提供基础资料。
1 材料与方法 1.1 动物来源与血样制备采集4只患病斑马和3只健康斑马颈静脉血各2份,1份作全血的血液细胞学分析,1份作血液生化指标分析(Calamari et al.,2010)。
1.2 仪器与试剂 1.2.1 仪器生化仪(RL7600-110),血球计数仪Sysmex xe-2100,721分光光度计,试剂盒,显微镜。
1.2.2 测定项目与测定方法采用血球计数仪Sysmex xe-2100测定红细胞数(RBC)、红细胞比容(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、血红蛋白(HGB)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、血小板数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、红细胞分布宽度(RDW)、血小板压积(PCT);在显微镜下做白细胞数(WBC)测定;同时采用瑞氏染色法(瑞氏染色剂若干),在油镜下对白细胞作分类计数,即淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞(GRA)等进行测定。 采用全自动生化仪测定总蛋白(TP,双缩脲法,批号1014021)、白蛋白(ALB,BCG法,批号69976501)、肌酐(Cr,肌氨酸氧化酶法,批号0814191)、丙氨酸氨基转移酶(ALT,速率法,批号60157301)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST,速率法,批号60208901)、尿酸(UA,酶法,批号0814071);碱性磷酸酶(ALP,速率法,批号1214081);尿素(Urea,酶法,批号0814081);γ-谷氨酸转移酶(GGT,速率法,批号0714051,四川迈克生物科技股份有限公司);总胆红素、直接胆红素(TBIL、DBIL,钒酸盐法,批号KG972,KH672,日本和光公司);钾K、钠Na、氯Cl(间接ISE法,日立试剂,日立公司);钙Ca(比色法,批号697473,Roche试剂)、乳酸脱氢酶(LDH,速率L-P法,批号60657601,Roche试剂)、碳酸氢根(终点比色法,批号60583501,Roche试剂)、肌酸激酶(CK,速率法,批号604193,Roche试剂),以及胆碱酯酶(CHE,速率法,批号60446601,Roche试剂)均为罗氏公司测定;应用试剂盒采用UV方法对谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力进行测定(Montgomery et al.,2012)。
1.3 数据处理与分析所有数据用平均值±标准差表示,用t检验分析。
2 测定结果 2.1 血液细胞指标分析血液细胞指标分析结果显示,缺硒斑马的白细胞数量升高,红细胞数量和血红蛋白数量下降,红细胞比容下降,红细胞分布宽度升高,淋巴细胞百分比下降,中性粒细胞百分比升高,而缺硒对平均红细胞体积、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度、血小板数、血小板分布宽度、血小板压积、血小板平均体积的影响较小(表 1)。
项目 | 缺硒斑马(n=4)平均值±标准差(范围) | 健康斑马(n=3)平均值±标准差(范围) |
白细胞总数WBC/(109/L) | 11.49±3.80(6.12~14.47) | 9.37±0.31(9.04~9.67) |
红细胞总数RBC/(1012/L) | 9.35±0.45(9.03~9.67) | 11.15±0.52(10.58~11.60) |
血红蛋白HGB/(g/L) | 142.50±2.12(141.00~144.00) | 149.67±4.04(146.00~154.00) |
红细胞比容HCT/% | 41.05±2.52(37.90~43.80) | 43.75±0.94(42.74~44.60) |
平均红细胞体积MCV/fl | 40.05±3.64(35.90~44.70) | 41.33±1.95(39.30~43.20) |
平均血红蛋白含量MCH/pg | 15.28±0.53(14.60~15.90) | 15.70±0.45(15.20~16.10) |
平均血红蛋白浓度MCHC/(g/L) | 382.80±29.66(356.00~425.00) | 384.00±10.81(375.00~396.00) |
血小板PLT/(109/L) | 202.50±113.83(100.00~320.00) | 204.67±9.60(196.00~215.00) |
血小板分布宽度PDW/fl | 13.25±8.84(7.00~19.50) | 12.76±0.56(12.30~13.40) |
血小板压积PCT/% | 0.25±0.06(0.20~0.29) | 0.24±0.01(0.23~0.25) |
血小板平均体积MPV/fl | 8.00±1.27(7.10~8.90) | 8.06±0.35(7.70~8.40) |
红细胞分布宽度RDW/% | 27.18±6.73(19.10~35.50) | 20.56±0.83(19.90~21.50) |
淋巴细胞百分比LYM/% | 10.35±5.75(2.00~15.20) | 39.00±1.70(37.20~40.60) |
中性粒细胞百分比GRA/% | 87.80±6.24(84.00~95.00) | 52.90±2.45(50.20~55.00) |
血液生化指标分析结果表明,缺硒斑马的ALT、AST、LDH、ALP和CK活性升高,UA含量和GSH-Px活力下降,而缺硒对Ca、K、Na、Cl、碳酸氢根,以及总蛋白、白蛋白等指标的影响较小(表 2)。
项目 | 缺硒斑马(n=4)平均值±标准差(范围) | 健康斑马(n=3)平均值±标准差(范围) |
总蛋白TP/(g/L) | 76.95±5.77(70.00~83.00) | 78.43±3.50(75.00~82.00) |
白蛋白ALB/(g/L) | 39.60±5.98(34.00~48.00) | 38.03±1.76(36.00~39.00) |
丙氨酸氨基转移酶ALT/(U/L) | 143.50±17.68(131.00~156.00) | 10.67±0.58(10.00~11.00) |
天门冬氨酸氨基转移酶AST/(U/L) | 429.30±379.80(186.00~996.00) | 116.00±5.29(110.00~120.00) |
碱性磷酸酶ALP/(U/L) | 507.00±449.70(189.00~825.00) | 73.33±2.08(71.00~75.00) |
γ谷氨酸转移酶GGT/(U/L) | 301.30±200.40(106.00~579.00) | 302.00±3.46(300.00~306.00) |
乳酸脱氢酶LDH/(U/L) | 2598.00±2306.00(967.00~4229.00) | 201.50±2.12(200.00~203.00) |
肌酸激酶CK/(U/L) | 3648.50±1969.30(2256.00~5041.00) | 196.33±6.02(190.00~202.00) |
胆碱酯酶CHE/(U/L) | 7636.00±1819.00(5374.00~9829.00) | 7595.00±86.41(7519.00~7689.00) |
肌酐Cr/(umol/L) | 87.00±18.55(61.00~105.00) | 87.00±4.35(82.00~90.00) |
尿酸UA/(umol/L) | 20.33±11.90(7.00~30.00) | 86.67±2.52(84.00~89.00) |
尿素Urea/(mmol/L) | 6.08±0.74(5.30~7.00) | 5.97±0.29(5.72~6.30) |
谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px/(U/L) | 0.97±0.09(0.90~1.04) | 81.16±2.77(78.20~83.70) |
钙Ca/(mmol/L) | 2.51±0.17(2.40~2.76) | 2.69±0.09(2.60~2.78) |
钾K/(mmol/L) | 3.48±0.43(3.12~4.10) | 3.60±0.17(3.43~3.77) |
钠Na/(mmol/L) | 138.80±6.94(134.00~149.00) | 140.00±1.00(139.00~141.00) |
氯Cl/(mmol/L) | 96.75±5.12(92.00~104.00) | 96.00±2.00(94.00~96.00) |
总胆红素TBIL/(umol/L) | 12.65±12.45(3.40~30.30) | 12.26±0.55(11.70~12.80) |
直接胆红素DBIL/(umol/L) | 4.65±3.75(1.40~9.40) | 4.76±0.15(4.60~4.90) |
碳酸氢根/(mmol/L) | 26.40±1.13(25.60~27.20) | 26.86±1.47(25.20~28.00) |
本文选取4只缺硒斑马为研究对象,经血液生化检测,结果发现其肝功能及心肌酶谱异常,其与白唇鹿Cervus albirostris缺硒病相似,主要表现在ALT、AST、LDH、CK活性升高(邓济苏等,2007)。
本文中患病斑马中性粒细胞百分比上升而淋巴细胞百分比下降,且白细胞总数升高,与王俊廷和杨淑清(1988)指出成年马缺硒的嗜中性粒细胞增多,杨志强(1990)在成年马属动物缺硒病机理研究与防治中分析患畜白细胞总数和嗜中性白细胞数增加、淋巴细胞减少等相关研究报道吻合。红细胞数量和血红蛋白的含量下降,这是因为缺硒会导致红细胞膜中的不饱和脂肪酸受到体内自由基的攻击,使得脂质过氧化,膜损伤,进而细胞破裂、溶解,使得红细胞数量和血红蛋白的含量降低。
血液生物化学指标分析能够反映机体的功能状况,是疾病诊断及监测的主要内容之一。ALP活性升高提示患病斑马可能有胆汁淤积,这与尸体检查时部分个体全身组织器官黄染相一致;当出现肌营养不良、肝坏死时,ALT活性会升高,这是肝细胞浆膜损伤的标志;AST活性可以反映肝脏损伤程度;当肾脏、心肌和骨骼肌等受损时,血清中LDH活性会增强。患病死亡斑马的生化指标结果显示缺硒导致肝细胞受损,细胞膜通透性增加,ALT、AST和LDH的活性显著升高,这与董勇等(2011)指出缺硒仔猪的LDH活性显著升高,汪开毓等(2009)研究指出缺硒鲤鱼血液中LDH、AST、ALT活性升高等相吻合。本文中病斑马体内CK活性增强在一定程度上反映了病斑马由于缺硒症引起了肾脏、心肌和骨骼肌的损害,尿酸含量显著降低提示硒缺乏可能引起患病斑马肾脏损伤。而硒是GSH-Px的组成成分,因此,GSH-Px活性的测定能够监测动物体内硒的状态并及时发现缺硒病(孔祥瑞,1982;刘来利等,2014),可以作为诊断斑马缺硒病的特征性指标,为临床诊断提供重要的参考依据。
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