长鳍吻鮈Rhinogobio ventralis Sauvage et Dabry de Thiersant，1874,又称土耗儿，隶属于鲤形目Cypriniformes鲤科Cyprinidae鮈亚科Gobioninae吻鮈属Rhinogobio Bleeker，分布于长江上游干流及雅砻江、乌江等大型支流中，喜生活于河流底层(湖北省水生生物研究所鱼类湖北省水生生物研究所鱼类研究室，1976；陈宜瑜，1998)。长鳍吻鮈为长江上游特有鱼类，在长江上游渔获物中占有一定比例。因水电工程建设、过度捕捞等影响，其资源量急剧衰减，亟待加强保护(曹文宣，2000)。目前，对长鳍吻鮈的研究主要集中在生物学、肌肉生化特征等方面(邓辉胜，何学福，2005；赵海鹏，2008；鲍新国，2009；刘军等，2010；辛建峰，2010；Xu et al.，2010；罗芬，2011)。近年来，国内多家单位开始进行长鳍吻鮈人工繁殖技术研究，2014年中国水产科学研究院长江水产研究所成功进行了长鳍吻鮈人工繁殖。

鱼类早期生活史分为卵(胚胎期)、仔鱼和稚鱼三个基本发育期(殷名称，1991)。水温、溶氧、盐度等外界条件影响鱼类早期发育(许静，2011)。研究鱼类早期生活史，对人工繁育技术体系建立具有重要作用(王波等，2007)。本研究利用人工催产获得的受精卵观察了长鳍吻鮈胚胎发育全过程，阐明了长鳍吻鮈胚胎发育规律，丰富了长鳍吻鮈早期生活史资料，并为其人工繁育提供了基础理论。

长鳍吻鮈精液、卵由中国水产科学研究院长江水产研究所利用人工培育的亲鱼通过人工催产、授精获得。受精后的鱼卵放入孵化桶中孵化。孵化水温17.35 ℃±0.24 ℃，溶氧8.4~8.8 mg·L^-1，pH7.5~8.5。

胚胎发育分期参照梁银铨等(1999)的方法。胚胎发育中利用体视显微镜(Olympus SZX7)观察、照相，并记录时序。囊胚期之前每0.05~0.50 h观察1次，囊胚期之后1.00~2.00 h观察1次。每次观察取样30粒，直至出膜。按50%以上鱼卵达到某一发育时期的时间计算胚胎发育时间(吴兴兵等，2012)。在体视显微镜下测量成熟卵卵径、受精卵吸水膨胀到最大时的卵膜径(精确到0.01 mm)。用Photoshop CS5编排胚胎发育照片。胚胎发育积温采用以下公式计算：胚胎发育各阶段的积温(℃·h)=此阶段胚胎发育时间(h)×水温(℃)。

在水温17.35 ℃±0.24 ℃时，长鳍吻鮈整个胚胎发育过程(即从受精到孵化出膜)历时73.50 h，总积温为1275.44 ℃·h。胚胎发育过程可分为7个阶段26个时期，包括受精卵阶段(1.00 h)、卵裂阶段(3.50 h)、囊胚阶段(5.00 h)、原肠阶段(7.50 h)、神经胚阶段(6.50 h)、器官形成阶段(28.50 h)和出膜阶段(22.00 h)。胚胎发育各个时期特征描述见表 1和图版Ⅰ。

图版Ⅰ 长鳍吻鮈的胚胎发育 PlateⅠ Embryonic development of Rhinogobio ventralis 1. 卵周隙形成期 Perivitelline space formation, 2. 胚盘隆起期 Blastodisc stage, 3. 2细胞期 2-cell stage, 4. 4细胞期 4-cell stage, 5. 8细胞期 8-cell stage, 6. 16细胞期 16-cell stage, 7. 32细胞期 32-cell stage, 8. 多细胞期 Multi-cellular stage, 9. 囊胚早期 Early-blastula stage, 10. 囊胚中期 Mid-blastula stage, 11. 囊胚晚期 Late-blastula stage, 12. 原肠早期 Early-gastrula stage, 13. 原肠中期 Mid-gastrula stage, 14. 原肠晚期 Late-gastrula stage, 15. 神经胚期 Neural plate stage, 16. 胚孔闭合期 Blastopore closed stage, 17. 肌节出现期 Metameres appearance, 18. 眼囊形成期 Eye sac formation, 19. 耳囊形成期 Ear vesicle present, 20. 尾芽期 Caudal bud appearance, 21. 肌肉效应期 Muscular effect, 22. 耳石形成期 Otolithes formation stage, 23. 心跳期 Heart beating, 24. 初孵仔鱼 Newly hatched larva.

图选项

成熟长鳍吻鮈卵呈灰绿色，卵膜紧贴在卵表面，卵径1.52 mm±0.07 mm，为漂流性卵。细胞质集中在动物极，为端黄卵。受精后0.07 h，卵膜开始吸水膨胀(图版Ⅰ：1)。受精后0.50 h，原生质逐渐向动物极移动形成胚盘(图版Ⅰ：2)。

受精后0.70 h，隆起胚盘中间出现分裂沟，受精卵进入卵裂阶段。随着分裂沟加深，胚盘被分裂成2个细胞，受精后1.00 h进入2细胞期，胚盘被分裂成2个大小一致的细胞(图版Ⅰ：3)。受精后1.50 h，动物极被与第一次分裂沟垂直的分裂沟分成大小相似的4个细胞(图版Ⅰ：4)。受精后2.50 h，完成第三次卵裂，动物极形成排列整齐的2排细胞，进入8细胞期(图版Ⅰ：5)。受精后3.00 h，完成第四次卵裂，动物极形成排列整齐的4排细胞，胚 胎发育进入16细胞期(图版Ⅰ：6)。 受精后3.50 h，胚胎发育进入32细胞期(图版Ⅰ：7)。随后卵裂越来越快，受精后4.00 h，在卵黄囊上方形成一个隆起的细胞团，胚胎发育进入多细胞期(图版Ⅰ：8)。

随着动物极分裂加快，动物极细胞越来越小，细胞数目越来越多，开始在卵黄上隆起，受精后4.30 h，隆起达到最高，呈半球状，受精卵吸水膨胀，卵膜径达到最大，为6.44 mm±0.08 mm，胚胎发育进入囊胚早期(图版Ⅰ：9)。此时在动物极已无法辨认出单个细胞。随着胚胎发育进程，卵黄上隆起细胞开始降低。受精后6.50 h，囊胚层变矮变平，此为囊胚中期(图版Ⅰ：10)。此后，囊胚层继续降低，并变薄。受精后9.00 h，囊胚层像一个帽子紧贴在卵黄上，包住胚胎1/3，胚胎发育进入囊胚晚期(图版：11)。

受精后12.00 h，动物极下包至1/2位置，赤道位置出现一个环状结构，即胚环，胚胎发育进入原肠早期(图版Ⅰ：12)。随着动物极细胞继续下包并向内卷入，受精后15.50 h，囊胚层细胞下包至2/3，在动物极细胞卷入的地方，胚盾出现，胚胎发育进入原肠中期(图版Ⅰ：13)。受精后16.50 h，囊胚层细胞下包至3/4，胚盾膨大，背唇明显，此为原肠晚期(图版Ⅰ：14)。

受精后17.50 h 囊胚层细胞下包至4/5，卵黄栓明显，出现神经板雏形(图版Ⅰ：15)。受精后23.00 h，胚孔封闭，神经管形成(图版Ⅰ：16)。

受精后26.00 h，肌节开始形成，2~3对(图版Ⅰ：17)。受精后27.50 h，在头部两侧形成眼囊，呈椭圆形(图版Ⅰ：18)。受精后35.50 h，在脑后方、体节前部出现1个椭圆形的耳囊，此时肌节20对(图版Ⅰ：19)。受精后44.00 h，尾芽逐渐游离(图版Ⅰ：20)。受精后47.50 h，胚胎进入肌肉效应期，肌肉收缩约6次/min，此时肌节约32对(图版Ⅰ：21)。受精后49.00 h，在耳囊内出现耳石，心脏原基出现(图版Ⅰ：22)。受精后51.50 h，心脏开始搏动(图版Ⅰ：23)。受精后65.50 h，胚体长度小于卵膜径，头尾剧烈摆动可使胚体在膜内转动(6～8次/min)，胚胎进入出膜前期。受精后69.50 h，胚胎开始出膜，头部先出膜。受精后73.50 h，胚胎进入出膜高峰期。初孵仔鱼全长6.25 mm±0.11 mm，小于吸水膨胀后的卵膜径(6.44 mm±0.08 mm)，心跳平均51次/min，眼内有少量色素沉淀(图版Ⅰ：24)。

鱼类胚胎发育阶段的卵膜径、卵周隙大小以及出膜前胚体在卵膜中蜷曲程度等可作为早期发育阶段分类鉴定的依据(乔晔，2005)。目前的研究显示在几种产漂流性卵鱼类中，草鱼Ctenopharyngodon idellus、鳡Elopichthys bambusa、鳤Ochetobius elongatus出膜前胚体远长于卵膜径，尾部蜷曲很多；鲢Hypophthalmichthys molitrix和鳙Aristichthys nobilis胚体稍长于卵膜径，尾部稍蜷曲；青鱼Mylopharyngodon piceus胚体与卵膜径大小基本一致；铜鱼Coreius heterokon和花斑副沙鳅Parabotia fasciata胚体短于卵膜径(易伯鲁等，2011)。有关长江流域产漂流性卵鱼类(如草鱼、犁头鳅Lepturichthys fimbriata、赤眼鳟Squaliobarbus curriculus)早期发育阶段形态学分类性状已有文献报道(梁银铨等，1999；乔晔，2005；岳兴建等，2011)。本研究将长鳍吻鮈早期发育阶段特征和这些鱼类进行对比后发现，长鳍吻鮈胚胎发育过程中的大部分特征(如胚胎发育时期、各时期的特征)和这些产漂流性卵鱼类相似，而卵径、卵膜径大小等有较大的差异。长鳍吻鮈卵膜径在吸水后达到6.44 mm±0.08 mm，约为卵径的4.2倍，是几种漂流性卵鱼类中较大的一种(表 2)。长鳍吻鮈出膜仔鱼全长为6.25 mm±0.11 mm，出膜前胚体长度小于卵膜径，在卵膜中不出现蜷曲。整体看，长鳍吻鮈的 这些特征和一些产漂流性卵鱼存在较大差异，可用于长鳍吻鮈早期发育阶段分类鉴定。另外，由于长鳍吻鮈受精卵吸水膨胀后的卵膜径较其他几种产漂流性卵鱼类大，这预示相当于青鱼、草鱼、赤眼鳟等鱼类，长鳍吻鮈可在流速较缓的环境中发育(岳兴建等，2011)。

鱼类胚胎发育时间和温度有关，通常以积温来反映胚胎发育速度(陈静等，2008)。胚胎发育时间越长，胚后各种生理机能越完善，对外界不良环境有更好的抵抗和缓冲作用，后期稚鱼成活率较高，环境适应性较强(王丹等，2007)。已有的研究显示，自然条件下长鳍吻鮈在水温14.5 ℃~19 ℃的条件下均可产卵，产卵时间为3—4月(邓辉胜等，2005)。本研究选取的长鳍吻鮈孵化水温为17.35 ℃±0.24 ℃，属于长鳍吻鮈受精卵正常孵化水温。在此水温下，长鳍吻鮈受精卵可以正常发育，从受精到孵化出膜的积温为1275.44 ℃·h，远高于赤眼鳟、鳡和宽体沙鳅Sinibotia reevesa积温数值(表 3)，这说明在相同的水温条件下，长鳍吻鮈的胚胎发育耗时相对较长。

鱼类漂流性卵的发育需要一定的自然河段流程满足鱼卵胚胎发育需要(岳兴建等，2011)。受金沙江中下游水电开发的影响，长鳍吻鮈等产漂流性卵鱼类在金沙江中下游江段的生存繁殖条件受到一定程度的影响，自然种群逐渐消失(蒋艳等，2009)。其生存繁殖水域将主要集中在向家坝水电站坝址至三峡水电站库尾之间的江段。研究结果显示，向家坝至重庆江段河道深泓线垂线平均流速为159.34 cm·s^-1±61.26 cm·s^-1(3月24日—5月16日，当宜宾站水位为258.50 m时)，河段长度 411.5 km(Zhang et al.，2013)。当水温为17.35 ℃± 0.24 ℃时，在向家坝水电站坝址下游江段长鳍吻鮈受精卵胚胎发育所需的自然河段长度约420 km。这预示，在当前的流速环境下长鳍吻鮈受精卵在此江段的孵化可能存在一定的问题。因此，为了保护自然种群资源，在长鳍吻鮈繁殖季节，应考虑通过控制上游水电站下泄流量，保证长鳍吻鮈受精卵发育。