2015, Vol. 34（5）扩展功能
文章信息
- 刘海青, 王宝菊, 张静宵, 范微, 刘巴睿, 张发荣, 加洛, 陶元清
- LIU Haiqing, WANG Baoju, ZHANG Jingxiao, FAN Wei, LIU Barui, ZHANG Farong, JIA Luo, TAO Yuanqing
- 喜马拉雅旱獭血液生化指标测定
- Determination of Blood Biochemical Parameters of Marmota himalayana
- 四川动物, 2015, 34（5）: 764-766
- Sichuan Journal of Zoology, 2015, 34（5）: 764-766
- 10.11984/j.issn.1000-7083.20150105
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文章历史
- 收稿日期：2015-3-21
- 接受日期：2015-06-08
2. 同济医学院协和医院, 武汉 430022
2. Union Hospital, Tongji Medical College, Wuhan 430022, China
喜马拉雅旱獭Marmota himalayana为啮齿目Rodentia松鼠科Sciuridae旱獭属Marmota的大型地栖性啮齿动物，青藏高原特有种。近年来在生物医学研究中，关于使用其制作人类疾病的动物模型的研究越来越深入(陶元清，王忠东，2006)。喜马拉雅旱獭的应用研究目前集中于人类乙肝动物模型(刘恩岐，2014)和抗核苷酸药物线粒体毒性评价(张评浒，张陆勇，2012)等领域。血液生化值是动物生物学特性的基础指标，具有相对稳定性，且反映肝脏、肾脏等器官的功能，因此测定喜马拉雅旱獭的血液生化值尤为重要。陶元清等(2011)报道了喜马拉雅旱獭血液生理指标的正常范围，而血液生化指标未见报告。本文首次测定了人工饲养条件下不同性别、年龄、不同饲养时间喜马拉雅旱獭的血液生化指标，旨在为其临床疾病的诊断与治疗、动物实验和模型建立等研究提供参考依据，现将结果报告如下。
1 材料和方法 1.1 实验动物捕捉于青海省海南同德县的46只喜马拉雅旱獭(16雌30雄)，2岁龄动物31只，2岁龄以下动物15只。所有动物经鼠疫血清检测阴性，隔离15 d，选择体格健壮，肥瘦适中，四肢有力，反应敏感、行动活泼，被毛光亮，眼睛鲜亮有神、无分泌物，鼻孔干净，呼吸正常，肛门干净，粪粒均匀及10日体温稳定(37 ℃～39 ℃)等健康体征的个体，安全运至青海省西宁市进行人工饲养(陶元清，王忠东，2006)。
1.2 方法 1.2.1 环境条件室内温度控制在10 ℃~15 ℃，相对湿度40%~60%，光照为自然光照和日光灯。饲养室定时换气，降低室内氨气浓度。每天06∶00、12∶00、18∶00定时饲喂；早晨供给品种多样鲜嫩的可食绿草，中午和晚上供给由玉米粉、小麦粉、麸皮、苜蓿草粉、食盐、微量元素及少量鱼粉组成的配合半干粉料或颗粒饲料，营养成分指标为：粗蛋白12%、粗脂肪3%、粗纤维40%、粗灰分6%、水分30%；饮水供给pH2.5～2.8的酸化水。每天上午清扫室内卫生，换洗笼具托粪盘1次；隔周2%来苏尔、2%过氧乙酸或强力消毒灵等消毒液轮换消毒饲养设施1次(陶元清，王忠东，2006)。
1.2.2 血样采集上述动物人工饲养1年和2年后各测1次。方法为：早晨空腹状态下，人工保定，颈部或后肢肌肉内注射盐酸氯胺酮进行麻醉后肢静脉采集血液5 mL，分离血清(陶元清，王忠东，2007)，样本在采集后立即送往实验室检测。
1.2.3 样本检测检测常用正常血液生化指标17项，分别为肝功参数谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)；糖脂代谢参数总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和空腹血糖(GLU)，以及肾功能及离子浓度参数尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)和K+、Na+、Cl-、Ca2+等4种离子浓度。
1.2.4 检测仪器应用美国雅培2000 全自动生化分析仪进行生化常规指标的检测。
1.2.5 检测方法和试剂ALT，紫外连续监测法，丙氨酸氨基转移酶(ALT)液体试剂盒[德赛诊断系统(上海)有限公司]；AST，紫外连续监测法，门冬氨酸氨基转移酶(AST)液体试剂盒[德赛诊断系统(上海)有限公司]；TB，钒酸盐氧化法，总胆红素测定试剂盒(温州东瓯津玛生物科技有限公司)；DB，钒酸盐氧化法，直接胆红素测定试剂盒(温州东瓯津玛生物科技有限公司)；TP，双缩脲法，总蛋白液体试剂盒[德赛诊断系统(上海)有限公司]；ALB，双缩脲法，白蛋白液体试剂盒[德赛诊断系统(上海)有限公司]；CHOL，胆固醇氧化酶法，胆固醇液体试剂盒(德国HUMAN公司)；TG，GPO-POD法，甘油三酯液体试剂盒(德国HUMAN公司);HDL，选择性遮蔽法，高密度脂蛋白液体试剂盒(日本第一化学株式会社)；LDL，选择性遮蔽法，低密度脂蛋白液体试剂盒(日本第一化学株式会社)；GLU，氧化酶法，葡萄糖氧化酶法液体试剂盒(德国HUMAN公司)；BUN，尿酶法，尿素液体试剂盒(温州东瓯津玛生物科技有限公司)；CREA，酶法，肌酐液体试剂盒(上海科学生物技术有限公司)；K+、Na+、Cl-，间接离子选择法，雅培原装试剂(美国雅培公司)；Ca2+，偶氮砷Ⅲ法，钙液体单试剂盒(北京利德曼公司)。
1.2.6 统计处理数据用“均数±标准差”表示，SPSS 14.0进行方差分析，P < 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果喜马拉雅旱獭血液生化指标测定结果显示：雄性ALT和AST水平明显高于雌性；人工喂养1年后，血清ALT、AST、白蛋白、总蛋白和肌酐水平降低，提示饲料中可适当增加蛋白的含量；冬眠后血清总蛋白含量明显下降，白蛋白水平略低于冬眠前(表 1~表 3)。
| 指标 Indices | 性别Gender | 年龄Age | 饲养时间Feeding time | ||||||
| 雌性Female (n=16) | 雄性Male (n=30) | P值 P value | 2年以下 < 2 years(n=15) | 2年及以上 ≥2 years (n=31) | P值 P value | 1年以内 < 1 year (n=27) | 1年以上 >1 year (n=19) | P值 P value | |
| 谷丙转氨酶ALT/(U·L-1) | 16.50±13.74 | 7.90±9.72 | 0.036* | 12.67±13.12 | 10.03±11.35 | 0.487 | 14.48±13.94 | 5.79±5.01 | 0.005* |
| 天门冬氨酸氨基转移酶AST/(U·L-1) | 59.88±38.82 | 34.60±18.61 | 0.024* | 50.73±39.28 | 39.84±23.46 | 0.246 | 49.63±35.36 | 34.53±15.36 | 0.056 |
| 总胆红素TB/(μmol·L-1) | 3.83±2.94 | 4.00±3.03 | 0.854 | 5.53±2.13 | 3.17±3.03 | 0.004* | 5.54±2.26 | 1.65±2.28 | 0.000* |
| 直接胆红素DB/(μmol·L-1) | 0.36±0.72 | 0.19±0.14 | 0.383 | 0.39±0.73 | 0.18±0.14 | 0.285 | 0.30±0.56 | 0.18±0.14 | 0.353 |
| 总蛋白TP/(g·L-1) | 70.18±12.66 | 69.52±10.47 | 0.853 | 72.31±7.00 | 67.26±5.89 | 0.067 | 73.46±9.00 | 64.48±11.98 | 0.006* |
| 白蛋白ABL/(g·L-1) | 29.98±7.15 | 28.27±6.30 | 0.409 | 32.26±6.91 | 27.22±5.84 | 0.013* | 32.65±4.98 | 23.48±4.53 | 0.000* |
| *P < 0.05; 下表同, the same below. | |||||||||
| 指标 Indices | 性别Gender | 年龄Age | 饲养时间Feeding time | ||||||
| 雌性Female (n=16) | 雄性Male (n=30) | P值 P value | 2年以下 < 2 years(n=15) | 2年及以上 ≥2 years (n=31) | P值 P value | 1年以内 < 1 year (n=27) | 1年以上 >1 year (n=19) | P值 P value | |
| 总胆固醇CHOL/(mmol·L-1) | 4.69±0.80 | 4.98±1.09 | 0.348 | 5.11±1.04 | 4.77±0.98 | 0.280 | 4.75±1.03 | 5.07±0.95 | 0.290 |
| 甘油三酯TG/(mmol·L-1) | 2.36±1.07 | 2.35±1.22 | 0.988 | 2.19±1.46 | 2.43±1.00 | 0.516 | 2.33±1.33 | 2.38±0.89 | 0.891 |
| 高密度脂蛋白LDL/(mmol·L-1) | 2.90±0.74 | 3.17±0.98 | 0.334 | 2.95±0.79 | 3.14±0.96 | 0.516 | 2.86±0.79 | 3.38±0.99 | 0.054 |
| 低密度脂蛋白HDL/(mmol·L-1) | 1.24±0.31 | 1.30±0.42 | 0.617 | 1.46±0.50 | 1.20±0.28 | 0.073 | 1.34±0.45 | 1.20±0.27 | 0.211 |
| 葡萄糖GLU/(mmol·L-1) | 9.64±2.35 | 10.3±3.08 | 0.703 | 10.30±3.23 | 9.91±2.47 | 0.733 | 10.03±2.97 | 10.60±1.47 | 0.723 |
| 指标 Indices | 性别Gender | 年龄Age | 饲养时间Feeding time | ||||||
| 雌性Female (n=16) | 雄性Male (n=30) | P值 P value | 2年以下 < 2 years(n=15) | 2年及以上 ≥2 years (n=31) | P值 P value | 1年以内 < 1 year (n=27) | 1年以上 >1 year (n=19) | P值 P value | |
| 尿素氮BUN/(mmol·L-1) | 6.69±1.86 | 5.93±1.61 | 0.155 | 5.78±1.26 | 6.40±1.89 | 0.197 | 5.83±1.75 | 6.71±1.59 | 0.090 |
| 肌酐CREA/(μmol·L-1) | 66.44±23.07 | 62.07±19.38 | 0.499 | 75.50±22.67 | 57.82±17.04 | 0.005* | 75.95±16.93 | 46.02±9.49 | 0.000 |
| 钾K+/(mmol·L-1) | 5.41±0.918 | 5.46±1.15 | 0.879 | 5.27±1.57 | 5.53±0.72 | 0.559 | 5.23±1.14 | 5.74±0.89 | 0.113 |
| 钠Na+/(mmol·L-1) | 148.37±41.98 | 152.21±23.73 | 0.693 | 144.49±48.64 | 153.96±17.21 | 0.475 | 156.44±38.21 | 142.96±12.78 | 0.147 |
| 氯Cl-/(mmol·L-1) | 107.21±11.01 | 102.96±17.56 | 0.385 | 104.35±23.70 | 104.48±10.13 | 0.984 | 108.53±18.31 | 98.62±7.94 | 0.032* |
| 钙Ca2+/(mmol·L-1) | 2.24±0.23 | 2.25±0.26 | 0.930 | 2.23±0.35 | 2.25±0.19 | 0.835 | 2.25±0.277 | 2.23±0.20 | 0.819 |
喜马拉雅旱獭作为新的试验动物应用于人类乙肝动物模型、抗核苷酸药物线粒体毒性评价、心血管疾病和肥胖症等疾病研究，将其实验动物化的工作正在进行。本次研究初步建立了人工饲养条件下喜马拉雅旱獭血液生化指标，对其饲养管理、繁殖、保护、临床疾病的诊断与治疗以及下一步的应用研究提供了参考依据。本研究中喜马拉雅旱獭各项参数基本稳定，说明建立的人工饲养管理方法可保证动物血液生化指标的稳定性，所测血液生化指标也可作为喜马拉雅旱獭饲养管理和疫病检测判断的参考依据。
| 刘恩岐. 2014. 人类疾病动物模型[M]. 北京:人民卫生出版社:145-152. |
| 陶元清, 范微, 王忠东, 等. 2010. 喜马拉雅旱獭血液生理指标测定[J]. 四川动物, 29(5):625-626. |
| 陶元清, 王忠东. 2006. 提高人工饲养条件下喜马拉雅旱獭成活率的几点体会[J]. 四川动物, 25(2):889-890. |
| 陶元清, 王忠东. 2007. 喜马拉雅旱獭动物实验基本技术和方法的建立[J]. 四川动物, 26(3):704-706. |
| 张评浒, 张陆勇. 2012. 喜马拉雅旱獭-核苷类药物线粒体毒性评价体系的建立[C]//第二届中国药物毒理学会年会会议论文集:66. |