四川动物  2015, Vol. 34 439-443

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陈林1, 杨德英1, 古小彬1, 汪涛1, 赖松家2, 任永军3, 赖为民1, 杨光友1*
CHEN Lin1, YANG Deying1, GU Xiaobin1, WANG Tao1, LAI Songjia2, REN Yongjun3, LAI Weimin1, YANG Guangyou1*
豆状带绦虫四川株的生物学研究
Biological Characteristics of Taenia pisiformis Sichuan Strain
四川动物, 2015, 34: 439-443
Sichuan Journal of Zoology, 2015, 34: 439-443
10.3969/j.issn.1000-7083.2015.03.023

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收稿日期:2014-08-30
接受日期:2014-12-26
豆状带绦虫四川株的生物学研究
陈林1, 杨德英1, 古小彬1, 汪涛1, 赖松家2, 任永军3, 赖为民1, 杨光友1     
1. 四川农业大学动物医学院, 四川雅安625014;
2. 四川农业大学动物科技学院, 四川雅安625014;
3. 四川省畜牧科学研究院养兔研究所, 成都610081
摘要目的 对豆状带绦虫四川株的生物学特性进行深入研究,为豆状囊尾蚴病的防控提供基础数据.方法用豆状带绦虫虫卵经口感染兔后,于第60天剖杀采集豆状囊尾蚴并记录其在兔体内的寄生部位.用豆状囊尾蚴经口感染实验犬,观察犬首次排出孕节的时间、每天排出孕节的数目及排孕节持续时间;选取55个孕节,记录孕节中虫卵的数目及大小;用1%次氯酸钠溶液激活虫卵,观察虫卵孵化过程.结果 5只犬在感染豆状囊尾蚴后分别在感染后39 d、43 d、45 d、50 d和57 d开始排出孕节;最多一天排出158片孕节;孕节中虫卵含量在60~26 480个之间,平均为3372个,虫卵大小为(41.32±4.53) μm×(36.23±4.92) μm;虫卵孵化需要4~5 min.豆状囊尾蚴在家兔体内主要寄生于胃大网膜和直肠浆膜.结论 犬感染豆状囊尾蚴后,在犬体内发育成熟的豆状带绦虫排孕节持续时间长,孕节内虫卵量大,排出的虫卵可对环境造成较大的污染,极易引起中间宿主的感染.
关键词豆状带绦虫               生物学    
Biological Characteristics of Taenia pisiformis Sichuan Strain
CHEN Lin1, YANG Deying1, GU Xiaobin1, WANG Tao1, LAI Songjia2, REN Yongjun3, LAI Weimin1, YANG Guangyou1     
1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Ya'an, Sichuan Province 625014, China;
2. College of Animal Science & Technology, Sichuan Agricultural University, Ya'an, Sichuan Province 625014, China;
3. Rabbit Breeding Research Institution, Sichuan Academy of Husbandry and Veterinary, Chengdu 610081, China
Abstract:Objective To further investigate the biological characteristics of Taenia pisiformis Sichuan strain, as well as to provide basic knowledge for future prevention and control of Cysticercus pisiformis infection. Methods Eight rabbits were infected with T. pisiformis eggs and then killed for larvae collection on day 60 post-infection (PI). Meanwhile, the number and location of C. pisiformis were determined. Subsequently, five dogs were infected with C. pisiformis under standard experimental conditions. The time of first discharged gravid proglottids, the number of daily evacuated gravid prolottids and the duration of gravid proglottids evacuation were recorded. Furthermore, fifty-five gravid proglottids were selected to examine the numbers and sizes of eggs in each gravid proglottid using microscope. Microscopy was also conducted to observe the hatching process of eggs activated by 1% sodium hypochlorite solution. Methods The infected dogs were first observed evacuating gravid progottids on day 39 PI, 43 PI, 45 PI, 50 PI and 57 PI, respectively. The largest number of gravid proglottids evacuated per day was 158. Representatively, the amount of eggs within a single gravid proglottid ranged from 60 to 26 480, with an average of 3372, while the egg size was (41.32 ± 4.53) μm×(36.23 ± 4.92) μm. Egg hatching took about 4 to 5 min in vitro. In rabbits, C. pisiformis mainly parasitized great omentum and mesentery. Conclusion The discharge of gravid proglottid by mature T. pisiformis lasted for a considerable time, and the gravid proglottid releasing a significant number of eggs, which could cause great environmental contamination and increase the risk of infection in intermediate host.
Key words: Taenia pisiformis     dog     rabbit     biology    

豆状带绦虫Taenia pisiformis为带科Taeniidae带属Taenia绦虫,寄生于犬、狼、豺、狐、北极狐、貉、猫、远东猫、草原猫、山猫等犬科和猫科动物的小肠中,其幼虫(豆状囊尾蚴Cysticercus pisiformis)通常寄生在啮齿动物,如家兔、雪兔、松鼠、小家鼠、褐家鼠、黑家鼠、欧洲棕背鼹、普通田鼠、豚鼠和鼹鼠等动物的肝包膜、大网膜、肠系膜及直肠浆膜中(杨光友等,2013)。该种广泛分布于世界各地,在我国各省区均有分布(Allan et al.,1999;Foronda et al.,2003;Saeed et al.,2006;周永学等,20062008;Martinez-Moreno et al.,2007),对家兔危害严重。家兔轻度感染豆状囊尾蚴时仅表现为消化不良、生长迟缓和消瘦,严重感染会引起肝损害,导致消化紊乱,甚至引起死亡,对养兔业危害很大(孙晓林等,2008; 周永学等,2008; 杨光友,2009;Yang et al. ,20122013;Chen et al.,2013) 。

尽管豆状带绦虫的生活史与发育过程已有研究报道(Shield et al.,1973;Beveridge & Rickard,1975;Coman & Rickard,1975;杨世广等,1986),但有关该绦虫的产卵量及产卵持续时间等基础生物学问题仍缺乏研究。为此,本研究以豆状带绦虫四川株为材料,通过人工感染试验观察了豆状带绦虫的产卵量、产卵持续时间、虫卵孵化过程,以及豆状囊尾蚴在家兔体内的分布等生物学特征,为家兔豆状囊尾蚴病预防与控制措施的制定提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 仪器和试剂

台式离心机购自Eppendorf Centrifuge公司,型号为5804;显微镜和显微测微尺购自Olympus公司,型号为CH20;震荡恒温箱购自常州恒德仪器制造有限公司,型号为ZD-85;计数器等由本校动物医学院提供。

胃蛋白酶购自北京赛而生物药业有限公司;次氯酸钠溶液(20 mL·L-1);生理盐水(9 g·L-1);人工肠液(胰蛋白酶、兔胆汁、NaHCO3的混合液)由四川农业大学动物医学院寄生虫实验室提供。 1.2 虫种样品及实验动物

豆状带绦虫虫卵由本实验室提供;豆状囊尾蚴采自患豆状囊尾蚴病的病兔;5只健康犬(4月龄,体质量4 kg)购自四川某农户,使用前用吡喹酮和左旋咪唑驱虫;8只家兔(体质量约1.5 kg)购自四川某养兔场。 1.3 兔的感染及豆状囊尾蚴在兔体内的分布

兔通过人工灌胃的方式感染含豆状带绦虫感染性虫卵,每只感染5000个虫卵,于第60天剖杀,采集豆状囊尾蚴并记录其在兔体内的寄生部位,随机选取50个豆状囊尾蚴,压片后在显微镜下观察囊尾蚴头节的蚴钩数目。 1.4 犬的感染及排出孕节的收集与保存

豆状囊尾蚴从兔体分离后,立即经口感染5只实验犬,每只犬感染10个豆状囊尾蚴。犬感染豆状囊尾蚴后,记录下感染时间、感染后粪便中首次出现孕节的时间、每天排出的孕节数量等。将排出的新鲜孕节用加双抗(青霉素和链霉素)的生理盐水反复漂洗后,4 ℃冰箱保存备用。 1.5 孕节内虫卵数量及大小测定

1号、2号、4号、5号犬随机选取5片孕节(共20片),3号犬选取每月25号或26号排出的孕节各5片(7个月×5片=35片),共计55片孕节。取一次性EP管55只,分组并编号,加入胃蛋白酶溶液(1%)各0.5 mL和1片孕节,剪碎孕节,放置于37 ℃震荡培养箱40~50 min,轻轻摇动试管,直至无肉眼可见碎片,将试管内的悬液充分混匀后,立即用微量移液器吸取10 μL混合卵液,置载玻片上进行显微镜检,记录10 μL液体中虫卵的数量,每个试管中混合液连续检查5次,计算出平均含卵数,每个孕节随机抽取7个虫卵,测量其长径和短径(共计7个×55=385个),并对测量结果进行统计分析。 1.6 虫卵孵化及六钩蚴的观察

取次氯酸钠溶液(20 g·L-1)10 μL于一张载玻片上,加入10 μL虫卵悬液,充分混合均匀,使次氯酸钠溶液终浓度为10 g·L-1。显微镜下观察虫卵孵化所需时间,发育成熟的虫卵在显微镜下能见到六钩蚴,待所有虫卵孵化后,用9 g·L-1生理盐水终止孵化。 2 结果 2.1 孕节排出时间及数量观察

5只犬在感染豆状囊尾蚴后分别在第39天、第43天、第45天、第50天和第57天开始排出孕节。1号、2号和5号犬分别在感染后的第57天、第53天和第60天死亡,所以记录到每天排出孕节的天数较少。3号和4号犬每天排出孕节数记录的天数较多(图 1图 2)。3号犬排出孕节最多的一天为38个,平均每天排出4.95个;而4号犬排出孕节最多的一天达到158个,从第33天到第70天没有孕节排出,第71天又重新开始排出孕节,平均每天排出4.19个,最长记录排出孕节时间为213 d。

图 1 3号犬每日排出孕节数量 Fig. 1 Number of gravid proglottids of Taenia pisiformis produced per day in dog 3

图 2 4号犬每日排出孕节数量 Fig. 2 Number of gravid proglottids of Taenia pisiformis produced per day in dog 4
2.2 孕节内虫卵数量及大小

对收集的55个孕节中虫卵的数目进行了观察和记录,发现最少的为60个,最多达到16 280个,平均虫卵短径为37.49 μm±5.68 μm,长径为42.19 μm±5.22 μm。大多数孕节中虫卵数目少于2000个(图 3)。为评估不同时间段排出孕节中虫卵数目的变化,从3号犬每个月排出的孕节中抽取5个,将每个孕节内虫卵进行计数和统计,发现感染后第5个月每个孕节中虫卵数目最多,平均达到10 392个±12 231个,最少的为感染后第2个月的,平均只有192个±154个(图 4)。

图 3 豆状带绦虫孕节中的虫卵数量 Fig. 3 The number of eggs in gravid proglottids of Taenia pisiformis

图 4 3号犬不同时间排出孕节中的虫卵数量 Fig. 4 The average number of eggs per gravid proglottidof Taenia pisiformis in dog 3
2.3 虫卵形态

虫卵形态为椭圆形或圆形,棕黄色。卵壳薄。发育成熟的虫卵在显微镜下能见到六钩蚴(图 5:A,B)。

图 5 豆状带绦虫虫卵、六钩蚴和豆状囊尾蚴头节上的钩 Fig. 5 Eggs,oncospheres of Taenia pisiformis and the hooks of Cysticercus pisiformis A. 孕节内的虫卵(10×40),B. 六钩蚴(10×100),C. 豆状囊尾蚴头节上的钩(10×20)。
A. microscopic examination of T. pisiformis eggs(10×40),B. viability of oncospheres(10×100),C. hooks of C. pisiformis(10×20).
2.4 豆状囊尾蚴在兔体内的分布

豆状囊尾蚴在兔体内主要寄生在大网膜(80.2%)和直肠浆膜(14.7%),肠系膜(4.2%)和肝脏(1.0%)则分布较少(表 1)。大部分成熟的豆状囊尾蚴似豌豆或黄豆样囊泡,囊壁很薄,透明,囊内充满半透明液体,囊壁上有一小米粒大的乳白色小头节。其中有2只兔在感染后第18天和第24天消瘦死亡,剖检后在腹腔中检测到45个和100个囊尾蚴,且病兔肝表面布满虫体结节,并可看到虫体移行过程中留下的移行道。随机取50个豆状囊尾蚴压片后在显微镜下观察,可见囊尾蚴头节顶突周围分布一圈蚴钩,数目在36~44个之间(图 5:C)。

表 1 豆状囊尾蚴在兔组织器官中的分布统计 Table 1 Statistics of Cysticercus pisiformis distribution in organs of 6 diseased rabbits
3 讨论 3.1 豆状囊尾蚴在犬体内的发育时间及犬排出孕节的规律

犬感染豆状囊尾蚴实验中,囊尾蚴头节翻出主要发生在小肠中,头节附着主要发生在感染后的第3~5天,孕节排出的时间主要在第35~46天(Beveridge & Rickard,1975;Coman & Rickard,1975)。本实验发现犬首次排出孕节的时间在感染后第39~50天,这种差异可能与宿主种类、年龄及健康状况等有关。

5只犬中,1号、2号、5号感染豆状囊尾蚴后因病排孕节时间较短,本实验详细记录了3号和4号犬每日排出孕节的变化情况,发现4号犬排出孕节最多的一天达到158个,从第33天到第70天,共38 d未发现孕节排出,第71天又重新开始排出孕节,杨世广等(1986)也报道有间隔排孕节的现象,这可能与被感染犬的品种、年龄及体况有关。 3.2 孕节中虫卵的数目

带科绦虫不同虫种间孕节中虫卵数目不同,多头绦虫平均每个孕节中虫卵数为5278个(牟静等,2010),猪带绦虫和牛带绦虫每个孕节内的虫卵数量平均可达28 300个(马云祥等,2002)和80 000个(赵辉元,1998)。Coman和Rickard(1975)报道豆状带绦虫释放到肠道中的孕节平均含有1370个虫卵。本实验研究表明:随粪便排出的孕节中平均含有3372个虫卵,这种差异可能与寄生虫虫株有关。 3.3 囊尾蚴在兔体内的发育及头节周围小钩数目

兔食入含六钩蚴的豆状带绦虫虫卵后,六钩蚴从胚膜中释放出来,随血流进入相应肝脏等组织或器官发育成囊尾蚴。感染后第13天,兔肝脏表面有大量虫体正在穿过肝包膜;第15天开始进入腹腔,第32天虫体外观发育完全,在胆汁中能翻出头节,但活动力弱,尚无感染力,第39天活动力增强,且具备感染力(Shield et al. ,1973;杨世广等,1986)。本实验分别用5000个豆状带绦虫虫卵感染8只兔后,有2只兔分别在感染后第18天和第24天死亡,剖检分别检测到45个和100个囊尾蚴,第24天死亡的兔体内检测得到的囊尾蚴,镜检能看到小钩的雏形和吸盘,但都不完整,在胆汁中也未翻出头节,都为未成熟囊尾蚴,与以前学者报道一致(Shield et al. ,1973)。

本实验随机抽取50个成熟囊尾蚴,用胆汁激活,头节翻出后计数头节周围小钩数目为36~44个,与杨世广等(1986)报道一致,但与Worley(1974)观察结果(34~48个)有差异。

综上所述,犬感染豆状囊尾蚴后,每天能排出几个甚至上百个孕节于外界环境中,排出孕节持续时间长,排出虫卵量大,对环境造成较大污染,严重威胁家兔等动物的健康。

参考文献
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