四川动物  2015, Vol. 34(1) 81-83

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孙爱群, 田应洲, 李松, 熊荣川, 陈红
SUN Aiqun, TIAN Yingzhou, LI Song, XIONG Rongchuan, CHEN Hong
龙里瘰螈与织金瘰螈的核型
Comparative Studies on Karyotypes of Paramesotriton longliensis and P. zhijinensis
四川动物, 2015, 34(1): 81-83
Sichuan Journal of Zoology, 2015, 34(1): 81-83
10.3969/j.issn.1000-7083.2015.01.013

文章历史

收稿日期:2014-09-10
接受日期:2014-09-25
龙里瘰螈与织金瘰螈的核型
孙爱群, 田应洲 , 李松, 熊荣川, 陈红    
六盘水师范学院, 贵州六盘水 553004
摘要:用常规涂片法对贵州产龙里瘰螈Paramesotriton longliensis与织金瘰螈P. zhijinensis的染色体核型进行了研究。结果显示,龙里瘰螈的核型为2n=24=16m+8sm,染色体臂数NF=48,其中No.7、10、11、12为亚中着丝粒染色体(sm),其余均为中着丝粒染色体(m);织金瘰螈的核型为2n=24=20m+4sm,NF=48,其中No.9、11为sm,其余均为m。2种瘰螈的核型存在差异,可为2个物种的成立提供细胞遗传学佐证。
关键词瘰螈属     龙里瘰螈     织金瘰螈     核型    
Comparative Studies on Karyotypes of Paramesotriton longliensis and P. zhijinensis
SUN Aiqun, TIAN Yingzhou , LI Song, XIONG Rongchuan, CHEN Hong    
Liupanshui Normal University, Liupanshui, Guizhou Province 553004, China
Abstract:The karyotypes of Paramesotriton longliensis and P. zhijinensis were studied with conventional smears. The results showed that, the karyotype of P. longliensis was 2n=24=16m+8sm, NF=48, in which the No.7, 10, 11, 12 were submetacentric chromosome (sm), while the others were metacentric chromosome (m); the karyotype of P. zhijinensis was 2n=24=20m+4sm, NF=48, in which No. 9, 11 were sm, while the others were m. The karyotype difference between P. longliensis and P. zhijinensis provideed new evidence to support the validity of the two species.
Key words: Paramesotriton     Paramesotriton longliensis     Paramesotriton zhijinensis     karyotype    

两栖纲Amphibia蝾螈科Salam and ridae瘰螈属Paramesotriton动物已报道有12种(费梁等,200520062009李松等,2008a2008bGu et al.,20112012王超等,2013),即尾斑瘰螈P. caudopunctatus、中国瘰螈P. chinensis、德氏瘰螈P. deloustali、尔宓瘰螈P. ermizhaoi、富钟瘰螈P. fuzhongensis、广西瘰螈P. guangxiensis、香港瘰螈P. hongkongensis、龙里瘰螈P. longliensis、茂兰瘰螈P. maolanensis、武陵瘰螈P. wulingensis、云雾瘰螈P. yunwuensis、织金瘰螈P. zhijinensis。其中龙里瘰螈与织金瘰螈是李松等(2008a2008b)发现的新种,前者分布于贵州省龙里县水场乡,后者分布于贵州省织金县城双堰塘。瘰螈属动物的染色体研究,国内仅见谷晓明(1995)谷晓明和高晓东(1997)章菊明等(1985)分别对尾斑瘰螈与中国瘰螈的报道,未见龙里瘰螈与织金瘰螈的染色体核型报道。笔者采用常规涂片法,对贵州产龙里瘰螈与织金瘰螈的染色体核型进行分析,旨在为瘰螈属的遗传、进化、发育、系统分类等研究提供基础资料。1 材料与方法

龙里瘰螈(4♀♀,5♂♂)与织金瘰螈(4♀♀,5♂♂)于2008年采于贵州省龙里县和织金县。

染色体制片按30 μg·g-1体质量的剂量对供试动物腹腔注射秋水仙素(含量0.5 mg·mL-1),14~18 h后活体解剖。分别取2种瘰螈的精巢与小肠,精巢于1%柠檬酸钠溶液中剪成约1.5 mm小块,小肠剖开后用1%柠檬酸钠溶液洗净,再剪成约1.5 mm左右的小块;吸去柠檬酸钠溶液,分别加KCl溶液(0.046 mol·L-1),室温下低渗30~40 min,甲醇与冰乙酸混合液(3∶1)固定2次,每次30 min,60%冰乙酸涂片,空气干燥。Giemsa(pH6.8)染色30 min,镜检,拍照。选择染色体分散良好的10个细胞进行测量,计算染色体的相对长度和臂比值。染色体分类按Levan等(1964)的标准划分。2 结果

2种瘰螈的染色体参数见表 1,染色体中期形态及核型见图 1

表 1 龙里瘰螈与织金瘰螈的染色体参数 Table 1 The parameters of chromosomes of Paramesotriton longliensis and P. zhijinensis
种名 Species序号 Number相对长度 Relative length /%(x±SE)臂比值 Arm ratio(x±SE)类型 Type
龙里瘰螈 Paramesotriton longliensis111.83±0.091.426±0.08m
211.64±0.221.128±0.03m
310.76±0.071.356±0.04m
410.03±0.131.445±0.03m
59.94±0.231.039±0.07m
69.06±0.141.185±0.02m
78.24±0.111.945±0.07sm
87.79±0.131.055±0.14m
96.06±0.131.323±0.08m
105.34±0.102.347±0.04sm
114.80±0.152.224±0.09sm
123.35±0.091.73±0.01sm
织金瘰螈 P. zhijinensis113.87±0.201.114±0.03m
211.76±0.081.310±0.06m
310.68±0.081.329±0.08m
410.31±0.151.047±0.10m
58.91±0.191.407±0.11m
67.92±0.191.104±0.02m
77.32±0.211.636±0.12m
87.12±0.141.075±0.02m
96.35±0.162.564±0.03sm
106.27±0.171.437±0.10m
115.15±0.051.831±0.10sm
124.33±0.151.528±0.04m
图 1 2种瘰螈染色体中期形态及核型(Bar=10 μm) Fig. 1 The metaphase chromosomes and karyotypes in two species of Paramesotriton(Bar=10 μm)

龙里瘰螈的2n=24=16m+8sm,染色体臂数(NF)=48,其中No.7、10、11、12为亚中着丝粒染色体(sm),其余均为中着丝粒染色体(m)。按其相对长度可以分为3组:第1组(No.1~4)相对长度大于10,均为m;第2组(No.5~8)相对长度在7~10之间,No.7为sm,其余全为m;第3组(No.9~12)相对长度在7以下,除No.9为m外,其余为sm,并且No.12明显小于其他各对。

织金瘰螈的2n=24=20m+4sm,NF=48,其中除No.9、11为sm,其余均为m。按其相对长度也可以分为3组: 第1组(No.1~4)相对长度大于10,均为m;第2组(No.5~8)相对长度在7~10之间,均为m;第3组(No.9~12)相对长度在7以下,其中No.9、11为sm,No.10、12为m。

2种瘰螈均未发现与性别相关的异形染色体。3 讨论

我国蝾螈科已知有5属(叶昌媛,1993),可以划分为2支,蝾螈属Cynops、肥螈属Pachytriton、瘰螈属为一支,其核型极为相似,无近端着丝粒染色体(ST);疣螈属Tylototriton和棘螈属Echinotriton为另一支,有ST(谷晓明,田应洲,2000)。

瘰螈属动物基于线粒体Cyt b序列的系统发育树又可分为2支,一支为尾斑瘰螈种组,包括尾斑瘰螈、龙里瘰螈、茂兰瘰螈、武陵瘰螈及织金瘰螈,另一支为中国瘰螈种组,包括中国瘰螈、富钟瘰螈、香港瘰螈、广西瘰螈、德氏瘰螈、尔宓瘰螈(陈学平,2008王会,2009王超等,2013)。

从核型上看,中国瘰螈雌性2n=24=16m+8sm,雄性2n=24=17m+7sm,NF=48,其中No. 6、9、10、11为sm(章菊明等,1985李树深,2007);尾斑瘰螈染色体数目2n=24=18m+6sm,NF=48,其中No.7、10、11为sm(谷晓明,高晓东,1997);龙里瘰螈的2n=24=16m+8sm,NF=48,其中No.7、10、11、12为sm;织金瘰螈的2n=24=20m+4sm,NF=48,其中No.9、11为sm。已知的4种瘰螈均属单型的对称核型(表 2)。龙里瘰螈与中国瘰螈均有4对近中着丝粒染色体,只是sm染色体所在序号不同而已,尾斑瘰螈有3对近中着丝粒染色体,织金瘰螈有2对近中着丝粒染色体。根据分子系统学研究,在尾斑瘰螈种组中,尾斑瘰螈与武陵瘰螈的亲缘关系较近,茂兰瘰螈、龙里瘰螈及织金瘰螈的亲缘关系较近。从核型上可看出,龙里瘰螈与中国瘰螈的亲缘关系较近,织金瘰螈与尾斑瘰螈的亲缘关系较近。

表 2 瘰螈属4个种的核型比较 Table 2 The comparison of the karyotypes in four species of Paramesotriton
种 Species核型组成 Karyotypic componentsm染色体编号 Number of sm chromosome文献来源 Referrences
尾斑瘰螈 P. caudopunctatus2n=24=18m+6sm7,10,11谷晓明等,1997
中国瘰螈 P. chinensis♀2n=24=16m+8sm ♂2n=24=17m+7sm6,9,10,11章菊明,1985
龙里瘰螈 P. Longliensis2n=24=16m+8sm7,10,11,12本文
织金瘰螈 P. zhijinensis2n=24=20m+4sm9,11本文

Wu等(2010)研究龙里瘰螈和织金瘰螈的线粒体ND2基因,结果表明两者的ND2遗传距离较小(p-distance<1.84%),据此判断2个物种的遗传分化不足以达到种级分化。本研究表明,织金瘰螈只有2对sm染色体,而龙里瘰螈有4对sm染色体,可为2个物种的成立提供核型上的佐证。

另外,近期野外调查发现,织金瘰螈成体有退化的3个鳃迹,繁殖期雄体尾椎骨外部皮肤呈浅黄色,而龙里瘰螈无鳃迹,繁殖期雄体尾部皮肤呈粉红色。繁殖季节的形态特征差异提供了不同物种间生殖前隔离基础,对于物种的识别更具生物学意义,可进一步说明龙里瘰螈与织金瘰螈应为2个相互独立的有效物种。龙里瘰螈与织金瘰螈的C带带型差异有待进一步研究。

参考文献
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