低氧环境下蛋内注射CuSO<sub>4</sub>对藏鸡和肉鸡鸡胚发育的影响

http://dx.doi.org/10.7685/jnau.201910038

文章信息

姚宏, 郑玉才, 李志雄, 王云浩, 谈永萍, 徐亚欧, 王爱林, 董传豪, 冯卫东, 饶开晴

YAO Hong, ZHENG Yucai, LI Zhixiong, WANG Yunhao, TAN Yongping, XU Ya'ou, WANG Ailin, DONG Chuanhao, FENG Weidong, RAO Kaiqing

低氧环境下蛋内注射CuSO₄对藏鸡和肉鸡鸡胚发育的影响

Effects of in ovo injection of CuSO₄ on the development of Tibetan chicken and broiler chicken embryos hatched under hypoxia conditions

南京农业大学学报, 2020, 43(6): 1079-1086

Journal of Nanjing Agricultural University, 2020, 43(6): 1079-1086.

http://dx.doi.org/10.7685/jnau.201910038

文章历史

收稿日期: 2019-10-24

引用本文

姚宏, 郑玉才, 李志雄, 等. 低氧环境下蛋内注射CuSO₄对藏鸡和肉鸡鸡胚发育的影响[J]. 南京农业大学学报, 2020, 43(6): 1079-1086.

YAO Hong, ZHENG Yucai, LI Zhixiong, et al. Effects of in ovo injection of CuSO₄ on the development of Tibetan chicken and broiler chicken embryos hatched under hypoxia conditions[J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 2020, 43(6): 1079-1086. DOI: 10.7685/jnau.201910038

低氧环境下蛋内注射CuSO₄对藏鸡和肉鸡鸡胚发育的影响

姚宏¹ , 郑玉才¹ , 李志雄¹ , 王云浩¹ , 谈永萍¹ , 徐亚欧¹ , 王爱林¹ , 董传豪¹ , 冯卫东² , 饶开晴¹

1. 西南民族大学生命科学与技术学院, 四川成都 610041;
2. 甘孜州畜牧业科学研究所, 四川康定 626000

收稿日期：2019-10-24

基金项目：四川省科技支撑计划"十三五育种攻关"项目（2016NYZ0043）

作者简介：姚宏, 硕士研究生

通信作者：饶开晴, 副教授, 博士, 研究方向为动物生长调控, E-mail:wkxwzz6@163.com.

摘要：[目的]本文旨在研究低氧环境下改变种蛋内铜离子（Cu²⁺）含量对藏鸡、科宝肉鸡两品种鸡胚发育、血管生成和机体抗氧化性能的影响及机制。[方法]选择质量相近的藏鸡、科宝肉鸡种蛋各132枚，随机分为3组。孵化前蛋内注射不同Cu²⁺浓度的CuSO₄注射液100 μL：对照组（仅注射100 μL 90 μg·mL^-1 NaCl溶液）、低剂量组（75 μg·mL^-1 Cu²⁺），高剂量组（300 μg·mL^-1 Cu²⁺），低氧环境下孵化。12胚龄时固定和采集尿囊膜，采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件对鸡胚尿囊膜血管面积、条数进行测量；记录出雏率，采集1日龄血清及各组织并测定其质量；使用试剂盒检测与抗氧化相关的指标；采用RT-qPCR检测肝脏和尿囊膜中血管内皮生长因子（VEGF）基因的表达。[结果]肉鸡出雏率随蛋内注射Cu²⁺浓度增加而升高；与对照组相比，低剂量组肉鸡出雏质量/蛋质量、腿体比以及高剂量组肝体比均显著提高（P < 0.05），藏鸡低剂量组肝体比显著升高（P < 0.05）。与对照组相比，肉鸡高剂量组的尿囊膜血管面积和中血管数显著增加（P < 0.05），高剂量组的藏鸡尿囊膜上大、中、小血管形成以及血管面积增加（P < 0.05），低剂量组的藏鸡尿囊膜中、小血管数量显著增加（P < 0.05）。藏鸡、肉鸡试验组血清中铜锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）活性均显著高于对照组（P < 0.05），丙二醛（MDA）含量显著低于对照组（P < 0.05），而谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性不受Cu²⁺的影响。注射高剂量的CuSO₄能显著上调藏鸡、肉鸡肝脏和尿囊膜中VEGF基因的表达量（P < 0.05），且藏鸡尿囊膜和肝脏中VEGF基因的表达量均显著高于肉鸡（P < 0.05）。[结论]低氧环境下种蛋内注射CuSO₄可提高藏鸡和肉鸡机体的抗氧化能力，促进两品种鸡胚血管生成以应对低氧环境；肉鸡机体抗氧化能力强于藏鸡，而藏鸡的血管生成能力强于肉鸡。

关键词：低氧蛋内注射铜离子血管生成抗氧化

Effects of in ovo injection of CuSO₄ on the development of Tibetan chicken and broiler chicken embryos hatched under hypoxia conditions

YAO Hong¹, ZHENG Yucai¹, LI Zhixiong¹, WANG Yunhao¹, TAN Yongping¹, XU Ya'ou¹, WANG Ailin¹, DONG Chuanhao¹, FENG Weidong², RAO Kaiqing¹

1. College of Life Science and Technology, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China;
2. Ganzi Prefectural Livestock Research Institute, Kangding 626000, China

Abstract: [Objectives] The present experiment was conducted to study the effects of changing the copper ion content on embryonic development, angiogenesis and anti-oxidant performance of Tibetan chickens and Cobb broilers under hypoxic conditions, and to explore the mechanism of these effects. [Methods] Each of 132 fertilized eggs with similar quality of Tibetan chickens and Cobb broilers were selected and randomly allocated into three groups. 100 μL of CuSO₄ injection with different Cu²⁺ concentrations were in ovo injection before incubation. 90 μg·mL^-1 NaCl solution in the control group, 75 μg·mL^-1 Cu²⁺ in the low-dose group, and 300 μg·mL^-1 Cu²⁺ in the high-dose group were hatched under hypoxia conditions. Chorioallantoic membrane(CAM) was fixed and collected on 12 embryonic age(E12). Image-Pro Plus 6.0 image analysis software was used to measure the blood vessel area and number of strips in CAM on E12;the hatching rate was observed at hatching, and each tissue sample was collected and measured on the quality on one-day-old; the anti-oxidation related indexes were detected using the kit; the expression of VEGF gene in liver and CAM was detected by RT-qPCR. [Results] The hatching rate of broiler chickens enhanced with the increase concentration of Cu²⁺ injected into the eggs. Compared with the control group, the hatching weight/egg weight, leg-body ratio of the low dose group and liver-body ratio of the high dose group significantly increased(P < 0.05). The liver-body ratio of Tibetan chickens in the low-dose group was significantly higher than that of the control group(P < 0.05). The vascular area and the number of middle blood vessels in CAM were significantly increased in broiler chicken group with high dose(P < 0.05). The high dose of copper ion could promote the formation of large, medium and small blood vessels and increase the vascular area in CAM of Tibetan chickens(P < 0.05). The number of small and medium blood vessels in CAM of Tibetan chickens in the low-dose group significantly increased(P < 0.05). The activity of Cu, Zn-superoxide dismutase(Cu/Zn-SOD) in the serum of Tibetan chickens and broiler chickens experimental group was significantly higher than that of the control group(P < 0.05), and malondialdehyde(MDA) content was significantly lower than those in the control group(P < 0.05). However, glutathione peroxidase(GSH-Px) activity was not affected by copper. Injection of high dose CuSO₄ could significantly up-regulate the expression of VEGF gene in the liver and CAM of Tibetan chickens and broiler chickens(P < 0.05), and the expression of VEGF gene in the CAM and liver of Tibetan chickens was higher than that of broiler chickens(P < 0.05). [Conclusions] In ovo injection of CuSO₄ in hypoxic environment could improve the anti-oxidant performance of the body of Tibetan chickens and broiler chickens, and promote the angiogenesis of embryo of two breeds of chicken to cope with the hypoxia environment; the anti-oxidant performance of broiler chickens was stronger than that of Tibetan chickens, and the angiogenesis capacity of Tibetan chickens was stronger than that of broiler chickens.

Keywords: hypoxia in ovo injection copper ion angiogenesis antioxidation

藏鸡是我国肉蛋两用型的地方家禽品种, 主要生活在海拔2 200~4 000 m的西藏的高原地区, 四川西北地区亦分布广泛^[1]。藏鸡长期生活在高原低氧环境中, 低氧环境不仅是制约藏鸡生长繁殖的重要因素, 也是致使低海拔鸡无法在高原地区饲养的主要原因。氧气对鸡胚血管生成和抗氧化性能的调控是影响鸡胚发育的主要因素^[2-3]。Cu²⁺作为机体必需的微量元素之一, 它不仅是蛋内营养物质的重要组成部分^[4], 而且Cu²⁺还是铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的活性中心^[5], 它能够提高机体的抗氧化能力; 同时Cu²⁺也是血管形成的重要辅助因子, 调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因的表达, 从而影响血管内皮细胞的出芽和迁移, 促进血管生成^[6-8]。Cu²⁺的缺乏将导致新血管生成受阻^[9]; Urso等^[10]研究发现, 血管生成障碍所引发的局部贫血与血清中Cu²⁺水平相关; 饲粮中添加Cu²⁺可以提高小鼠心肌VEGF蛋白的表达, 促使心肌血管形成^[11]; 种蛋内注射纳米铜可有效增加9胚龄鸡胚尿囊膜上的血管数量和长度, 上调20日龄鸡胚胸肌组织VEGF基因的表达^[12], 以上研究均表明Cu²⁺在血管生成中的重要作用。目前在低氧环境下改变种蛋内Cu²⁺含量对鸡胚血管生成和抗氧化性能影响的研究尚未见报道。因此本试验通过向藏鸡和科宝肉鸡种蛋内注射CuSO₄的方式, 探讨Cu²⁺在低氧条件下对鸡胚发育的影响及机制, 从而为提高藏鸡的生产力及低海拔家禽的高原环境适应力提供科学的参考依据。

1 材料与方法 1.1 试验设计

选择产蛋中期质量相近的藏鸡种蛋(甘孜州海螺沟畜牧业有限责任公司)和科宝肉鸡种蛋(温江正大畜禽有限公司)各132枚, 随机平均分成3组:对照组(90 μg·mL^-1 NaCl溶液)、低剂量组(Cu²⁺质量浓度为75 μg·mL^-1的CuSO₄溶液)、高剂量组(Cu²⁺质量浓度为300 μg·mL^-1的CuSO₄溶液)。

1.2 蛋内注射CuSO₄及鸡胚的孵化

种蛋小头端用体积分数为75%乙醇消毒后打孔, 对照组使用1 mL一次性灭菌注射器抽取高压灭菌后的生理盐水100 μL, 垂直进针约1 cm注入蛋清; 低剂量、高剂量组以相同的方法注入100 μL不同质量浓度的CuSO₄注射液。在高原低氧环境(海拔约2 000 m的四川省甘孜州康定县)孵化, 孵化条件参照科裕孵化箱使用说明书中禽类种蛋的孵化条件。藏鸡、肉鸡种蛋孵化至12胚龄时, 从每组编号前10的种蛋各取活着的6枚鸡胚进行尿囊膜的固定和采集。1日龄时每组各取10只小鸡采集血清和肝脏, 血清于-20 ℃冰箱保存, 肝脏置于液氮速冻后移至-80 ℃冰箱保存。

1.3 12胚龄鸡胚尿囊膜固定及血管面积、血管数量测定

在12胚龄的鸡胚气室端开孔, 将甲醇-丙酮(1:1)固定液2 mL从孔滴入, 固定1 h后, 将尿囊膜和壳膜一并剪下贴于载玻片, 干燥30 min, 于显微镜下观察拍照, 用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行图像分析, 以血管面积/尿囊膜面积的比值作为最终结果。根据直径大小将血管分为3类进行统计, 分别为大血管(直径≥100 μm)、中血管(50 μm≤直径 < 100 μm)、小血管(直径 < 50 μm)。

1.4 出雏率和组织质量的测定

出雏率等指标由每组编号为21~44的24枚种蛋提供, 出雏率=出雏数量/受精种蛋数量。各组织质量使用电子天平称量, 计算出雏质量/蛋质量和组织体比(组织质量/体质量)。

1.5 与抗氧化相关指标的测定

用试剂盒检测1日龄小鸡血清中Cu/Zn-SOD和GSH-Px活性以及MDA含量。将0.1 g肝脏加入装有0.9 mL生理盐水的EP管中, 在冰上匀浆, 2 500 r·min^-1离心后得到体积分数为10%肝脏匀浆液, 取上清液用生理盐水按1:9稀释成体积分数为1%的肝脏匀浆液。1%匀浆液用作蛋白含量的测定以及Cu/Zn-SOD和GSH-Px活性的检测, 10%匀浆液用于MDA含量的检测。具体方法参照试剂盒说明书。

1.6 肝脏中VEGF基因表达的测定

使用RNAiso Reagent试剂盒(Invitrogen公司)提取1日龄小鸡肝脏总RNA, 再用反转录试剂盒(TaKaRa公司)将肝脏总RNA进行反转录(RT)获得cDNA。用Primer Premier 5.0和Oligo 6.0软件设计目的基因(VEGF)和内标基因(β-actin)引物。引物信息见表 1, 由苏州金唯智生物科技有限公司合成。用荧光定量PCR(qPCR)分析肝组织中VEGF基因和β-actin基因的表达, 按SYBR GREENⅠ荧光定量试剂盒(TaKaRa公司)建议的反应体系, 混合反应物, 总体积10 μL。反应程序:95 ℃预变性15 s, 95 ℃变性15 s, 60 ℃退火30 s, 共40个循环。

表 1 基因引物序列 Table 1 Primer sequences of the target genes

目的基因 Target genes	GenBank登录号 GenBank accession No.	PCR产物长度/bp PCR products size	引物对序列 Primer pairs sequences (5′→3′)	退火温度/℃ Annealing temperature
β-actin	NM205518	300	TGCGTGACATCAAGGAGAAG/TGCCAGGGTACATTGTGGTA	60
VEGF	AY168004	261	GAAAGGGGAAGGGTCAA/GAGAAATCAGGCTCCAGAA	60
注:β-actin:β-肌动蛋白基因β-actin gene; VEGF:血管内皮生长因子基因Vascular endothelial growth factor gene.

表选项

1.7 数据处理

出雏质量/蛋质量、组织质量/体质量及基因表达、酶活性等数据采用SPSS 19.0软件进行多重比较分析, 出雏率使用SPSS 19.0软件进行卡方检验。用2^-ΔΔC_T法对基因进行相对定量表达分析。所有数值均以平均值±标准误(x±SE)表示。

2 结果与分析 2.1 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对藏鸡、肉鸡出雏率和出雏质量/蛋质量和出雏组织体比的影响

如图 1所示:低氧孵化下肉鸡出雏率随蛋内注射CuSO₄剂量的增加而上升, 且高剂量组显著高于对照组(P < 0.05);肉鸡低剂量组出雏质量/蛋质量和腿体比显著高于对照组(P < 0.05), 高剂量组肝体比显著高于对照组(P < 0.05);其他组织体比(脑、胸肌、心、肺)3组之间均无显著差异(P>0.05)(图未列出)。藏鸡蛋内注射CuSO₄组与对照组相比出雏率差异不显著(P < 0.05);藏鸡蛋内注射CuSO₄组与对照组相比出雏质量/蛋质量差异不显著(P>0.05);低剂量组肝体比显著高于对照组(P < 0.05);其他组织体比(脑、胸肌、腿肌、心、肺)各组之间均无显著差异(P>0.05)(图未列出)。

图 1 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对肉鸡和藏鸡出雏率、出雏质量/蛋质量及1日龄组织体比的影响 Fig. 1 Effects of in ovo injection of CuSO₄ on hatching rate, hatching weight/egg weight, tissue weight/body weight in one-day-old broiler chickens and Tibetan chickens under hypoxia condition 不同小写字母表示同一品种差异显著(P < 0.05)。图 2同此。 The data with different lowercase letters indicate significant difference on the same breed(P < 0.05). The same as in the Fig. 2.

图选项

	图 2 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对12胚龄肉鸡、藏鸡尿囊膜血管面积及血管数的影响 Fig. 2 Effects of in ovo injection of CuSO₄ on chorioallantoic membrane(CAM)vascular area and number in chickens and broiler Tibetan chickens of 12 embryonic age(E12)under hypoxia conditions
图选项

2.2 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对12胚龄藏鸡、肉鸡尿囊膜血管面积及血管数量的影响

蛋内注射CuSO₄能有效促进低氧孵化下肉鸡的血管生成, 其中高剂量组尿囊膜血管面积以及中血管数都显著高于对照组(P < 0.05), 而对小血管数没有影响(P>0.05)(图 2); 蛋内注射CuSO₄也能促进低氧孵化下藏鸡尿囊膜上血管的生成, 高剂量组血管面积和大、中、小血管数均高于对照组, 且差异显著(P < 0.05), 低剂量组中血管数和小血管数也显著高于对照组(P < 0.05)(图 2)。

2.3 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对1日龄藏鸡、肉鸡血清和肝脏中Cu/Zn-SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响

种蛋内注射低、高剂量的CuSO₄均能提高低氧孵化1日龄肉鸡血清Cu/Zn-SOD的活性(P < 0.05), 而藏鸡仅在低剂量组与对照组间有显著差异(P < 0.05), 3组中肉鸡的Cu/Zn-SOD活性均高于藏鸡; 蛋内注射CuSO₄对低氧孵化下藏鸡、肉鸡血清内GSH-Px活性均无显著影响, 但藏鸡低剂量组GSH-Px活性显著高于高剂量组(P < 0.05), 并极显著高于低剂量组的肉鸡(P < 0.01);高剂量CuSO₄能显著降低低氧孵化下1日龄藏鸡和肉鸡血清中MDA含量(P < 0.05);肉鸡各组的MDA含量均极显著低于藏鸡(图 3)。Cu²⁺对于低氧孵化下肉鸡肝脏内Cu/Zn-SOD和GSH-Px活性均无显著影响(P>0.05), 但高剂量CuSO₄可显著降低肉鸡肝脏中MDA的含量(P < 0.05), 并且还显著提高低氧孵化藏鸡肝脏中Cu/Zn-SOD活性(P < 0.05)和显著降低MDA含量及GSH-Px活性(P < 0.05);肉鸡低剂量组Cu/Zn-SOD活性、MDA含量和高剂量组GSH-Px活性都显著高于同组藏鸡。

图 3 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对1日龄藏鸡、肉鸡血清和肝脏中Cu/Zn-SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响 Fig. 3 Effects of in ovo injection of CuSO₄on the activities of Cu/Zn-SOD, GSH-Px and content of MDA in serum and liver of Tibetan chickens and broilers at one-day-old under hypoxia condition 不同小写字母表示同一品种不同处理组间差异显著(P < 0.05);^*和^**表示两品种间差异显著(P < 0.05)和极显著(P < 0.01)。下同。 The data with different lowercase letters indicate significant difference in the different of the same breed(P < 0.05);^* and ^** indicate significant difference in the two breeds at 0.05 and 0.01 levels. The same as follows.

图选项

2.4 低氧环境下种蛋内注射CuSO₄对12胚龄藏鸡、肉鸡尿囊膜及1日龄肝脏中VEGF基因表达的影响

蛋内注射CuSO₄对低氧孵化下12胚龄藏鸡和肉鸡尿囊膜上VEGF基因的表达均有影响。其中肉鸡低剂量组VEGF基因表达量显著高于对照组(P < 0.05), 藏鸡低、高剂量组VEGF基因表达量均显著高于对照组(P < 0.05)。各组藏鸡尿囊膜VEGF基因的表达量均高于肉鸡。在对照组两品种间比较有显著差异(P < 0.05), 在低剂量组和高剂量组两品种间比较差异为极显著(P < 0.01)(图 4-A)。

	图 4 种蛋内注射CuSO₄对12胚龄肉鸡、藏鸡尿囊膜和1日龄肉鸡、藏鸡肝脏VEGF基因表达量的影响 Fig. 4 Effects of in ovo injection of CuSO₄on the expression level of VEGF gene in CAM and liver of broiler chickens and Tibetan chickens of E12 and one-day-old under hypoxia condition
图选项

与对照组相比, 高剂量CuSO₄能显著上调低氧孵化1日龄藏鸡和肉鸡肝脏中VEGF基因的表达量(P < 0.05), 而低剂量CuSO₄对其影响不大(P>0.05)。3组中藏鸡VEGF基因表达量均极显著高于肉鸡(P < 0.01)(图 4-B)。

3 讨论

氧气是影响鸡胚发育和出雏的重要因素, 低氧不仅影响藏鸡的繁殖和生产性能, 也制约着高原地区平原鸡种的养殖^[13]。本试验结果显示, 蛋内注射CuSO₄能有效提高低海拔肉鸡在高原环境的出雏率, 增加肉鸡的出雏质量及肝体比和腿体比, 促进胚胎的生长, 但Cu²⁺对长期生活在低氧环境下藏鸡的作用效果不如肉鸡明显, 仅对鸡胚的肝体比有影响。本试验中, 藏鸡孵化率的增高趋势不明显, 可能是由于藏鸡的受精率较低导致用于孵化率统计的样本数减少, 致使试验组与对照组孵化率差异不显著。因此提高藏鸡种蛋受精率也是未来藏鸡生产中应着重关注的问题。

Cu²⁺能降低低氧孵化的1日龄肉鸡和藏鸡血清中MDA含量, 表明低氧环境下, Cu²⁺在鸡胚机体抗低氧过程中起着重要作用, 而血清中Cu/Zn-SOD和GSH-Px活性的变化情况显示这种作用是通过增强血清中Cu/Zn-SOD活性而不是GSH-Px活性来实现的^[14-17]。低剂量CuSO₄对藏鸡和肉鸡肝脏Cu/Zn-SOD、GSH-Px活性和MDA含量均无显著影响, 而高剂量CuSO₄能提升藏鸡Cu/Zn-SOD活性、降低藏鸡和肉鸡MDA含量, 但藏鸡GSH-Px活性下降, 分析原因可能是由于Cu²⁺会影响硒的吸收, 而硒是GSH-Px的重要组成部分^[18], 所以GSH-Px活性因此而受到影响。这进一步证实了Cu²⁺对低氧环境下机体抗氧化能力的提升是通过增强Cu/Zn-SOD活性来实现的。藏鸡和肉鸡的对比结果显示, 肉鸡血清各组中Cu/Zn-SOD活性均高于藏鸡, 同时MDA含量均低于藏鸡, 说明在低氧环境下肉鸡比藏鸡具有更强的抗氧化能力, 这可能与肉鸡是生活在氧含量较高的平原环境中有关。

本试验结果显示藏鸡、肉鸡种蛋内注射高剂量的CuSO₄, 能增加尿囊膜上的血管面积和中血管数, 同时对藏鸡的大、小血管的血管生成也具有促进作用, 证实了在鸡胚发育过程中, Cu²⁺对血管生成的调控作用。鸡胚尿囊膜是血管生成试验的常用模型^[19-22], 大量研究证实尿囊膜上血管面积和数量的改变能有效调节鸡胚死亡率、出雏率和胚胎发育^[23-25]。所以, 本试验中Cu²⁺能提高低氧环境下肉鸡出雏率、出雏质量和关键组织质量, 可能是其通过促进肉鸡血管生成来实现的。

VEGF调节内皮细胞的有丝分裂和增殖、血管的修复和生成^[26]。低氧能使低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor, HIF)逃脱PHD酶的降解, 造成HIF-1大量蓄积, 从而使低氧下VEGF基因的表达发生变化^[27-29]。在此过程中铜离子发挥着重要作用, 包括调控低氧诱导因子抑制因子(HIF inhibiting factor, FIH)的活性和促进HIF-1与VEGF基因间的亲和力等^[19]。本试验结果显示, 低、高剂量的CuSO₄能有效上调藏鸡尿囊膜中的VEGF基因表达, 这与尿囊膜上中、小血管数量的研究结果一致; 此外高剂量的CuSO₄能有效上调藏鸡和肉鸡肝脏中VEGF基因的表达量。本试验还发现, 无论在尿囊膜还是肝脏组织中, 3个组藏鸡VEGF基因的表达量均高于肉鸡, 这可能是由于藏鸡长期生活在高原低氧环境中, 形成了通过上调血管生成相关基因的表达量来促进血管生成, 提高血氧运输效率, 从而增强其对低氧环境的适应能力。

综上所述, 低氧下在种蛋内注射CuSO₄能提高肉鸡孵化率, 促进藏鸡、肉鸡鸡胚尿囊膜血管生成及藏鸡、肉鸡鸡胚肝脏的发育。推测这与Cu²⁺上调藏鸡、肉鸡鸡胚肝脏和尿囊膜组织VEGF基因表达量及提高藏鸡、肉鸡机体的的抗氧化能力有关。在低氧下蛋内注射CuSO₄使藏鸡的血管生成能力强于肉鸡, 而肉鸡机体抗氧化能力强于藏鸡。

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