苦楝(Melia azedarach)不仅生长快、材质好，是优良的建筑用材和家具用材，而且用途广，是植物源杀虫剂原料树种(Xu et al., 2009; 2010; 2011)。苦楝广泛分布于我国18°—40°N、海拔2 100 m以下的常绿阔叶林、落叶林，以及溪谷、田地的边缘和道路两旁(Peng et al., 2008)。从北方的河北保定、山西运城和甘肃陇南到南方的海南崖县，从东部的台湾、福建沿海到西部的四川成都和云南保山，分布范围覆盖中国陆地的三分之一(程诗明等，2006)。苦楝也分布于热带和亚热带其他的国家和地区，如斯里兰卡、泰国、越南、土耳其、菲律宾、不丹、尼泊尔、巴布亚新几内亚、印度、印度尼西亚、老挝、澳大利亚的热带地区以及太平洋群岛。由于苦楝对环境适应性强以及广泛的栽培，其起源中心尚不清楚(Peng et al., 2008)。

国内对苦楝表型遗传变异研究较多(程诗明等，2006; 陈丽君等，2014； 廖柏勇等，2014)，而遗传多样性研究报道仅限于少数引物组合和有限的群体数量(夏海涛，2009； 程诗明，2005)。然而，苦楝分布相当广泛，只有广泛搜集种质资源，才有可能准确地开展遗传多样性分析。

SRAP分子标记基于PCR技术，利用长度为17～18个核苷酸的引物针对开放阅读框进行扩增分析(Li et al., 2001)，常用于基因连锁作图和基因标记，具有简便、高重复率的特性。相对于其他分子标记方法，SRAP分子标记在植物物种的遗传多样性和亲缘关系分析中将能获得更多的信息。本研究采用SRAP分子标记，对中国17个省份的31个苦楝种源进行遗传多样性分析，为苦楝种质资源的保存和育种计划的制订提供依据。

试验选取苦楝主要地理分布区的31个种源(表 1)，分别来自广东、广西、贵州、海南、江西、湖南、四川、安徽、河北、湖北、河南、山东、山西、福建、浙江、甘肃和云南17个省(区)。2014年2月，在华南农业大学播种育苗。从每个种源中抽取15个或者14个(GS，HANI，HEN和YN3种源)不同家系，记录家系编号，每个家系中随机抽取1株苦楝幼苗代表该家系，共计461个单株参与试验。按单株采集叶片样品，保存在-70 ℃冰箱，用于DNA提取。

表1 31个苦楝种源资料汇总 Tab.1 Summary of the Melia azedarach provenances collected for this study

表 1 31个苦楝种源资料汇总 Tab.1 Summary of the Melia azedarach provenances collected for this study 序号 No. 种批号 Accession No. 种源代号 Provenance code 采样点 Location 纬度 Latitude(N) 经度 Longitude(E) 海拔 Elevation/m 1 ma140101 AH 安徽滁州Chuzhou，Anhui 32°18′ 118°19′ 15 2 ma130201 FJ 福建永安Yong’an，Fujian 25°49′ 117°06′ 255 3 ma140301 GS 甘肃陇南Longnan，Gansu 33°24′ 104°55′ 1 106 4 ma130401 GD1 广东开平Kaiping，Guangdong 22°25′ 112°43′ 7 5 ma130402 GD2 广东仁化Renhua，Guangdong 25°19′ 113°55′ 99 6 ma130501 GX1 广西桂林Guilin，Guangxi 25°16′ 110°17′ 166 7 ma130502 GX2 广西钦州Qinzhou，Guangxi 21°58′ 108°39′ 17 8 ma140503 GX3 广西都安Du’an，Guangxi 23°55′ 108°06′ 373 9 ma130601 GZ1 贵州兴义Xingyi，Guizhou 25°03′ 104°37′ 1 407 10 ma130602 GZ2 贵州册亨Ceheng，Guizhou 24°57′ 105°41′ 1 117 11 ma130603 GZ3 贵州黎平Liping，Guizhou 26°13′ 109°08′ 618 12 ma140604 GZ4 贵州遵义Zunyi，Guizhou 27°43′ 106°55′ 1 168 13 ma130701 HAN1 海南五指山Wuzhishan，Hainan 18°47′ 109°29′ 280 14 ma130702 HAN2 海南屯昌Tunchang，Hainan 19°24′ 110°07′ 160 15 ma140801 HEB 河北保定Baoding，Hebei 38°52′ 115°27′ 22 16 ma140901 HUB 湖北荆门Jingmen，Hubei 31°02′ 112°11′ 98 17 ma141001 HEN 河南许昌Xuchang，Henan 34°02′ 113°51′ 71 18 ma131101 HUN1 湖南东安Dong’an，Hunan 26°22′ 111°14′ 205 19 ma131102 HUN2 湖南炎陵Yanling，Hunan 26°27′ 113°40′ 200 20 ma131103 HUN3 湖南浏阳Liuyang，Hunan 28°09′ 113°38′ 124 21 ma131201 JX1 江西于都Yudu，Jiangxi 25°59′ 115°25′ 132 22 ma141202 JX2 江西瑞昌Ruichang，Jiangxi 29°40′ 115°40′ 18 23 ma141301 SD1 山东济南Jinan，Sh and ong 36°39′ 117°07′ 122 24 ma141302 SD2 山东泰安Tai’an，Sh and ong 36°13′ 117°06′ 641 25 ma141401 SX 陕西渭南Weinan，Shaanxi 34°29′ 109°30′ 351 26 ma141501 SC1 四川成都Chengdu，Sichuan 30°34′ 104°03′ 495 27 ma141502 SC2 四川达州Dazhou，Sichuan 31°12′ 107°28′ 593 28 ma131601 YN1 云南勐腊Mengla，Yunnan 21°48′ 101°15′ 1 010 29 ma141602 YN2 云南麻栗坡Malipo，Yunnan 23°06′ 104°40′ 1 180 30 ma141603 YN3 云南楚雄Chuxiong，Yunnan 25°02′ 101°31′ 2 173 31 ma141701 ZJ 浙江临安Lin’an，Zhejiang 30°13′ 119°43′ 47

从保存的每份样品中取约150 mg叶片，采用EZNA high-performance DNA mini kit 试剂盒(Omega Bio-Tek，Norcross，GA，USA)提取基因组DNA，用1%的琼脂糖凝胶电泳检测其质量。并用NanoDrop 1000分光光度计(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA)检测每份DNA的浓度，再将其浓度调整为50 ng·μL^-1，-20 ℃低温保存备用。

SRAP分子标记操作方法参照Li等(2001)，试验中所用试剂由宝生物工程有限公司(Otsu，Japan)提供，PCR扩增采用25 μL反应体系，体系包括： 50 ng基因组DNA、200 μmol·L^-1 dNTPs、2.75 mmol·L^-1 MgCl₂、0.4 μmol·L^-1上游引物和下游引物、2.5 μLPCR缓冲液、0.75单位Taq DNA 酶和16.7 μL双蒸水。PCR程序在东胜热循环仪(EDC-810，苏州，中国)中进行，热循环体系程序如下： 94 ℃预变性5 min；前5个循环为94 ℃ 1 min，35 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min；随后进行的35个循环为94 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min；最后72 ℃延伸5 min，于4 ℃保存。

用8个不同种源的基因组DNA对783对引物组合(27条上游引物，29条下游引物，表 2)进行初筛选，再用16个不同种源的苦楝基因组DNA进行引物复筛，最后得到20对引物(12条上游引物，13条下游引物)，可以扩增可重复、清晰的多态带。PCR产物采用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析，随后以12.5 V·cm^-1的速度电泳1.5 h，再用银染法显色(Bassam et al., 1993)。将可靠、清晰、明显的扩增条带记录为1，没有条带扩增出来的位点记录为0，统计100～1 500 bp 区间的条带，构建SRAP数据1/0矩阵。

表2 SRAP引物 Tab.2 Primers used in sequence-related amplified polymorphism(SRAP)

表 2 SRAP引物 Tab.2 Primers used in sequence-related amplified polymorphism(SRAP) 上游引物 Primer F 下游引物 Primer R 名称Name 引物序列Sequence(5′—3′) 名称Name 引物序列Sequence(5′—3′) Me1 TGAGTCCAAACCGGATA Em1 GACTGCGTACGAATTAAT Me2 TGAGTCCAAACCGGAGC Em2 GACTGCGTACGAATTTGC Me3 TGAGTCCAAACCGGAAT Em3 GACTGCGTACGAATTGAC Me4 TGAGTCCAAACCGGACC Em4 GACTGCGTACGAATTTGA Me5 TGAGTCCAAACCGGAAG Em5 GACTGCGTACGAATTAAC Me6 TGAGTCCAAACCGGTAA Em6 GACTGCGTACGAATTGCA Me7 TGAGTCCAAACCGGTCC Em7 GACTGCGTACGAATTGAG Me8 TGAGTCCAAACCGGTGC Em8 GACTGCGTACGAATTGCC Me9 TGAGTCCAAACCGGACA Em9 GACTGCGTACGAATTTCA Me10 TGAGTCCAAACCGGACG Em10 GACTGCGTACGAATTCAA Me11 TGAGTCCAAACCGGACT Em11 GACTGCGTACGAATTGCA Me12 TGAGTCCAAACCGGAGG Em12 GACTGCGTACGAATTCAT Me13 TGAGTCCAAACCGGAAA Em13 GACTGCGTACGAATTCTA Me14 TGAGTCCAAACCGGAAC Em14 GACTGCGTACGAATTCTC Me15 TGAGTCCAAACCGGAGA Em15 GACTGCGTACGAATTCTT Me17 TGAGTCCAAACCGGTAG Em16 GACTGCGTACGAATTGAT Me18 TGAGTCCAAACCGGCAT Em17 GACTGCGTACGAATTATG Me19 TGAGTCCAAACCGGTTG Em18 GACTGCGTACGAATTAGC Me20 TGAGTCCAAACCGGTGT Em19 GACTGCGTACGAATTACG Me21 TGAGTCCAAACCGGTCA Em20 GACTGCGTACGAATTTAG Me22 TGAGTCCAAACCGGGCA Em21 GACTGCGTACGAATTTCG Me23 TGAGTCCAAACCGGATG Em22 GACTGCGTACGAATTGTC Me24 TGAGTCCAAACCGGGAT Em23 GACTGCGTACGAATTGGT Me25 TGAGTCCAAACCGGGCT Em24 GACTGCGTACGAATTCAG Me26 TTCAGGGTGGCCGGATG Em25 GACTGCGTACGAATTCTG Me27 TGGGGACAACCCGGCTT Em26 GACTGCGTACGAATTCGG Me28 TGAGTCCAAACCGGATC Em27 GACTGCGTACGAATTCCA Em28 GACTGCGTACGAATTCGA Em29 GACTGCGTACGAATTATT

采用 POPGEN 32 软件分析优选引物的总条带数、多态性条带数、多态带百分率(PPB)、多态性信息指数(PIC)，分析种源的多态位点百分率(P_p)、Nei’s遗传多样性指数(H)以及Shannon’s信息指数(I)(Nei，1978)。

多态带百分率(PPB)计算公式如下： PPB=(K/N)×100%。式中： K为多态带的条数；N为总条带数。多态性信息指数(PIC)作为评价引物鉴别能力的标记指标，计算公式如下： PIC_i =2f_i(1－f_i)。式中： PIC_i为第i个标记的PIC值；f_i 为第i个标记片段扩增出来的频率。

用POPGEN 32计算31个种源的遗传距离矩阵，然后采用Mega6.06软件中的邻接聚类法(Neighbour-Joining)建立种源亲缘关系聚类树状图(Saitou et al., 1987；Tamura et al., 2013)。采用GenAIEx 6.5(Peakall et al., 2012)软件，进行分子方差分析(AMOVA)，采用PCoA法进一步分析不同种源间、种源内个体间的亲缘关系远近。采用Mantel检验法估算种源间遗传距离和地理距离的相关性(Mantel，1967)。

20对引物在461个DNA样本中共扩增出257条清晰的条带，其中145条为多态带(58.24%)。Me6/Em10引物对的扩增效果如图 1所示。每对引物所扩增的总条带数、多态带条数、多态带百分率(PPB)、多态性信息指数值(PIC)列于表 3中。

	图1 引物Me6/Em10扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳 Fig.1 Amplified pattern on polyacrylamide gel with primer combinations of Me6/Em10 M： Marker 100 bp DNA ladder.其他泳道分别为YN1、JX1和HAN2种源各自15个单株。 YN1，JX1， and HAN2 represent their each 15 plants of provenance respectively.

表3 引物组合多态性条带数和多态性信息指数 Tab.3 Polymorphism number and PIC of 20 SRAP primer combinations

表 3 引物组合多态性条带数和多态性信息指数 Tab.3 Polymorphism number and PIC of 20 SRAP primer combinations 引物对 Primer combination 总条带数 Total number of b and s 多态性条带数 Number of polymorphic b and s(n) 多态带百分率 Percentage of polymorphic b and s(PPB) 多态性信息指数 Polymorphism information content(PIC) Me1/Em9 17 14 82.35 0.402 Me1/Em17 13 3 23.08 0.478 Me2/Em12 12 2 16.67 0.474 Me2/Em13 10 9 90.00 0.320 Me4/Em5 15 6 40.00 0.404 Me5/Em10 14 9 64.29 0.358 Me6/Em4 19 13 68.42 0.294 Me6/Em5 11 5 45.45 0.401 Me6/Em10 11 5 45.45 0.447 Me6/Em29 4 2 50.00 0.410 Me11/Em29 8 8 100.00 0.383 Me17/Em29 26 10 38.46 0.339 Me19/Em5 7 5 71.43 0.454 Me19/Em7 8 3 37.50 0.424 Me20/Em7 17 13 76.47 0.368 Me24/Em14 9 8 88.89 0.262 Me27/Em4 14 8 57.14 0.310 Me27/Em18 16 4 25.00 0.430 Me28/Em15 11 10 90.91 0.406 Me28/Em19 15 8 53.33 0.346 总计Total 257 145 均值Mean 12.85 7.25 58.24 0.385

20对引物的扩增条带数为4(Me6/Em29)～26(Me17/Em29)条，平均为12.85条。多态性条带数为2～14条，平均有7.25条。PPB值最高的是Me11/Em29引物组合(100%)，其次是Me28/Em15(90.91%)和Me24/Em14(88.89%)。引物组合Me1/Em17和Me2/Em12的PPB值最低，分别为23.08%和16.67%。PIC平均值为0.385，PIC值最高和最低的引物组合分别是Me1/Em17(0.478)和Me24/Em14(0.262)，表明引物组合Me1/Em17能提供的各种源遗传多样性信息最多。

31个种源的主要遗传多样性参数列于表 4。POPGEN 32 软件统计结果表明，样本的总遗传多样性(H_t)为0.37±0.01，种源遗传多样性(H_s)为0.20±0.01。多态位点百分率(P_p)变化范围为35.17%～76.55%，均值是58.24%。Nei’s遗传多样性指数为0.13～0.31，平均值为0.20。来自贵州册亨GZ2种源Nei’s遗传多样性指数最高。Shannon’s信息指数为0.18～0.45，均值为0.30。AMOVA(表 5)分析表明，在总遗传变异中，38.96%来自于种源间变异，61.04%来自于种源内变异，说明变异主要来源于种源内。

表4 31个苦楝种源遗传多样性参数 Tab.4 Genetic diversity parameters of the 31 provenances of M. azedarach

表 4 31个苦楝种源遗传多样性参数 Tab.4 Genetic diversity parameters of the 31 provenances of M. azedarach 序号 No. 种源代码 Code 多态性位点百分率 Percentage of polymorphic loci(Pp) Nei’s(1973)遗传多样性指数 Nei’s(1973)gene diversity(H) Shannon’s信息指数 Shannon’s information index (I) 1 AH 64.83 0.24 ± 0.20 0.35 ± 0.29 2 FJ 52.41 0.17 ± 0.19 0.25 ± 0.27 3 GS 67.59 0.25 ± 0.20 0.38 ± 0.28 4 GD1 56.55 0.17 ± 0.19 0.27 ± 0.27 5 GD2 55.17 0.18 ± 0.20 0.28 ± 0.28 6 GX1 62.76 0.22 ± 0.20 0.33 ± 0.29 7 GX2 54.48 0.18 ± 0.20 0.27 ± 0.29 8 GX3 53.10 0.18 ± 0.20 0.27 ± 0.29 9 GZ1 58.62 0.19 ± 0.20 0.28 ± 0.28 10 GZ2 76.55 0.31 ± 0.20 0.45 ± 0.27 11 GZ3 75.17 0.27 ± 0.20 0.41 ± 0.27 12 GZ4 61.38 0.21 ± 0.21 0.32 ± 0.29 13 HAN1 35.17 0.19 ± 0.17 0.18 ± 0.26 14 HAN2 40.00 0.13 ± 0.18 0.20 ± 0.27 15 HEB 48.28 0.15 ± 0.19 0.23 ± 0.28 16 HUB 57.24 0.21 ± 0.21 0.30 ± 0.29 17 HEN 50.34 0.17 ± 0.20 0.26 ± 0.28 18 HUN1 68.97 0.25 ± 0.20 0.37 ± 0.28 19 HUN2 73.79 0.26 ± 0.20 0.39 ± 0.28 20 HUN3 67.59 0.25 ± 0.21 0.37 ± 0.29 21 JX1 56.55 0.19 ± 0.19 0.29 ± 0.28 22 JX2 54.48 0.18 ± 0.19 0.27 ± 0.28 23 SD1 48.97 0.17 ± 0.20 0.26 ± 0.29 24 SD2 45.52 0.15 ± 0.19 0.23 ± 0.27 25 SX 46.90 0.16 ± 0.20 0.24 ± 0.29 26 SC1 50.34 0.17 ± 0.19 0.25 ± 0.28 27 SC2 71.72 0.27 ± 0.20 0.40 ± 0.28 28 YN1 70.34 0.25 ± 0.20 0.38 ± 0.28 29 YN2 69.66 0.25 ± 0.20 0.37 ± 0.28 30 YN3 55.86 0.18 ± 0.19 0.28 ± 0.28 31 ZJ 55.17 0.15 ± 0.18 0.23 ± 0.26 均值Mean 58.24 0.2 0.3

表5 苦楝31个种源分子方差分析^① Tab.5 Analysis of molecular variance(AMOVA)of 31 provenances of M. azedarach

表 5 苦楝31个种源分子方差分析① Tab.5 Analysis of molecular variance(AMOVA)of 31 provenances of M. azedarach 变异来源 Source 自由度 df 平方和Sum of squares 均方差 Mean squares 方差分量 Variance component 方差分量比例 Variance component proportion(%) 遗传分化系数Φst P 种源间 Among provenances 30 4 784.54 159.49 9.7 38.96 0.39 0.001 种源内 Within provenance 430 6 536.62 15.2 15.2 61.04 总变异 Total 460 11 321.16 24.9 100  ① Φst: 种源间遗传分化系数 Coefficient of genetic differentiation among provenances.

对31个苦楝种源Nei’s遗传距离进行邻接法聚类分析(图 2)。Nei’s遗传距离在31个种源的变动范围为0.039 5～0.532 3。邻接法根据Nei’s遗传距离计算各类群之间的聚类分支距离，31个种源紧密相关，分支距离最低为0.003，最高为0.076。根据分支距离从大到小顺序，将聚类群分为2类，2类的分支距离为 0.076。从图 2可以看出，第Ⅰ类群以贵州遵义(GZ4)、贵州兴义(GZ1)、四川成都(SC1)和云南楚雄(YN3)分支距离最小，联系最为紧密，其次是四川达州(SC2)、云南勐腊(YN1)、甘肃陇南(GS)以及贵州册亨(GZ2)，主要为我国西南、西北地区高原、盆地种源。第Ⅱ类群包括其他23个种源。根据聚类分支距离大小，第Ⅱ类群中又细分为5个聚类中心，其中济南(SD1)、保定(HEB)、泰安(SD2)、渭南(SX)、许昌(HEN)种源聚为Ⅱ1类；临安(ZJ)、滁州(AH)和瑞昌(JX2)聚为Ⅱ2类；荆门(HUB)和永安(FJ)种源聚为Ⅱ3类；屯昌(HAN1)、五指山(HAN2)、钦州(GX2)和仁化(GD2)种源聚为Ⅱ4类；于都(JX1)和开平(GD1)种源分支距离更接近Ⅱ3类；东安(HUN1)和浏阳(HUN3)聚为Ⅱ5类；都安(GX3)种源分支距离介于Ⅱ4类与Ⅱ5类之间，但与Ⅱ4类更加紧密，桂林(GX1)则与Ⅱ5类更加接近。麻栗坡(YN2)、炎陵(HUN2)和黎平(GZ3)种源归于类群Ⅱ，但是与类群Ⅱ其他种源分支距离相距较远。

	图2 31个苦楝种源邻接聚类系统树 Fig.2 Neighbour-Joining dendrogram of the 31 M. azedarach provenances

遗传距离是遗传变异在种源之间的分布，它是检测种源间及其种源内个体间遗传差异相关性的指标。种源间遗传距离的PCoA分析表明前3个主分量在总变异中所占的比例分别为71.79%，6.33%，4.06%(合计82.17%)。主分量1和主分量2的二维双标图(图 3)明显将31个苦楝种源聚为2类，与邻接聚类的分析结果基本保持一致。种源内个体间遗传距离矩阵PCoA分析(图 4)表明，主分量1和主分量2将整体试验样本大致分为2类，相同种源内的个体基本都聚集在一起。其分析结果与种源间主分量分析结果大致相同，细节有差异。

	图3 种源间主分量分析 Fig.3 Biplots of PCoA1 and PCoA2 for the 31 M. azedarach provenances 图中数字为表 1中的序号，分别代表 31个不同的种源。Numbers in the figure above for the serial number in Tab. 1，representing 31 different provenances，respectively.

	图4 种源内主分量分析 Fig.4 Biplots of PCoA1 and PCoA2 within 31 M. azedarach provenances

利用Mantel检验计算种群的地理距离和遗传距离相关性，当 P< 0.05 时，认为地理距离和遗传距离具有显著相关性。Mantel检验经过1 000次随机置换计算，运算结果表明遗传距离矩阵和地理距离矩阵呈极显著相关，相关系数为0.256(P=0.003，图 5)。以上结果证明苦楝种源存在地理变异，也为进一步研究苦楝空间遗传结构以及地理变异模型提供理论依据。

	图5 遗传距离和地理距离相关性 Fig.5 Correlation between the geographic distance and Nei’s genetic distance

本研究将SRAP分析标记用于苦楝的遗传多样性研究。相比于AFLP，RAPD以及ISSR分子标记，SRAP分子标记可以提供更多的信息(Youssef et al., 2011; Liu et al., 2008; Shao et al., 2010; Budak et al., 2004a)。研究结果表明，SRAP分子标记是分析苦楝种源间和种源内个体间遗传多样性的有效工具(Li et al., 2001; Budak et al., 2004b; Valdez-Ojeda et al., 2014; Jehan et al., 2014)。

从783对SRAP引物中共筛选出20对引物，可以从31个苦楝种源中扩增出清晰的特异条带。PIC是用于遗传多样性研究的重要指标，是引物鉴别能力和信息可靠性的反映值(Talebi et al., 2012; Barkley et al., 2006; Milla-Lewis et al., 2012; Uzun et al., 2011)。一般来说，当PIC>0.5 时，位点多态性非常好，遗传标记提供的信息度高；当 0.5>PIC>0.25 时，遗传标记可以提供较合理的信息；当PIC< 0.25 时，遗传标记可提供的信息较少(Vaiman et al., 1994; Xie et al., 2010)。本研究中PIC平均值为0.385，表明苦楝SRAP分子标记可以较好地反映苦楝不同种源多样性，可用于不同种源苦楝的分类和鉴定。其中Me1/Em17，Me2/Em12，Me19/Em5，Me6/Em10，Me27/Em18，Me19/Em7，Me6/Em29，Me28/Em15，Me4/Em5以及Me1/Em9，共10对引物扩增的56条多态带，具有较高的PIC值，可以区分所有的种源。这些引物可以构建一种苦楝种源快速鉴定的SRAP方法。

SRAP标记AMOVA分析表明，种源内变异61.04%，38.96%来自于种源间变异。而ISSR的AMOVA分析结果也显示种源内变异为65.4%，种源间变异为34.6%；AFLP的AMOVA结果认为72.74%的变异来源于种源内，27.26%的变异来源于种源间(夏海涛，2009；程诗明，2005)。多种不同的分子标记都表明苦楝遗传多样性变异的主要来源是种源内，种源间的基因交流受到某些因素的限制。因此，在选择高遗传多样性种源的基础上，侧重苦楝种源内家系和单株选择，将更有利于苦楝遗传改良。

树种的遗传多样性主要受繁育系统、种源地理分布以及种源迁移历史的影响。苦楝种源遗传多样性偏低可能是种子扩散途径有限的结果。有些树种种子容易被动物消化，通过排泄分散到其他地方，这是林木树种提高遗传多样性最为重要的机制之一(Hamrick et al., 1992)。然而，与麻疯树(Jatropha curcas)及其他树种种子类似，苦楝种子含有相当多的三萜类有毒物质。这些树种的种子被消化过程中常具有致命性，因此，食果动物和大部分鸟类以及其他动物都避免食用它，这样就会导致苦楝种子扩散的几率降低(Hamrick et al., 1992; Ferreiro et al., 2010)，从而造成苦楝低水平的种源遗传多样性。

准确估算一个树种在其分布区的遗传多样性对于基因保存和优树选择非常重要。尽管苦楝的整体遗传多样性不高，但Nei’s 遗传多样性和Shannon’s 信息指数2项遗传多样性指标表明31个种源中有10个种源的遗传多样性高于ISSR和AFLP的结果(夏海涛，2009；程诗明，2005)。它们分别是贵州的册亨和黎平，云南的勐腊和麻栗坡，湖南的东安、炎陵和浏阳，四川达州，河北保定，安徽滁州种源。这10个种源Nei’s遗传多样性和Shannon’s信息指数值相对高于本研究中其他种源。而除了河北保定和安徽滁州以外，其他几个种源都来自容易形成局部地理生境气候的复杂山地地域。这种复杂山地地域也许是它们具有高遗传多样性的原因之一。

邻接聚类法将31个种源聚为两大类(图 2)。PCoA和Mantel 检验结果也证实该分析结果的正确性。聚类结果依中国地形及气候分布具有一定的规律。类群Ⅰ的遵义、兴义、成都、楚雄、达州、勐腊、陇南以及册亨种源都来自西南、西北地区的云贵高原、黄土高原以及四川盆地，这些地区降雨少、海拔高，具有气候一致性。类群Ⅱ跨度比较大，南北方种源都有，但是聚类小群从北往南，相同地理气候条件种源有聚为一类的趋势。例如，济南、保定、泰安、渭南和许昌种源都是典型的北方种源，聚为Ⅱ1类；华南地区的屯昌、五指山、钦州和仁化种源聚为Ⅱ4类；大致的趋势是从北往南相邻或相近的种源聚为一类。Mantel检验证实遗传距离和地理距离呈极显著相关(Liu et al., 2012)，从侧面证明了聚类结果随地理变化具有一定可靠性。该聚类结果与AFLP和ISSR的苦楝种源遗传多样性聚类分析的结果有相似的结论。AFLP分子标记UPGMA聚类法将8个种源中的渭南、保定、武都群体聚为一类，其他的聚为另一类(程诗明，2005)。ISSR分子标记UPGMA聚类法将云南保山种源单独聚为一类(夏海涛，2009)。这些种源的聚类结果都与SRAP分子标记类群Ⅰ结果保持一致。而苦楝果核、种子表型变异欧氏距离离差平方和聚类也显示，四川、陕西、甘肃的种源都聚为一类(陈丽君等，2014)。这种将大多数种源都聚为2类，而且存在明显的地域特点的现象表明，苦楝的遗传多样性起源中心或许存在于2类种源的过渡地区。本研究中云南和贵州种源大多聚于类群I，而麻栗坡(YN2)和黎平(GZ3)种源聚归于类群Ⅱ，或许它们之间就是两大苦楝类群生态过渡区存在的体现。

对苦楝的过度开发和人为的破环，将降低苦楝遗传多样性。因此，应建立种质基因库或种子园，加强对苦楝优质种质的保护。

SRAP分子标记可以准确、有效地用于苦楝遗传多样性分析。苦楝遗传变异来源于种源内，而种源间基因交流有限。种源遗传多样性整体偏低，而部分山区种源遗传多样性较高。在选择高遗传多样性种源的基础上，苦楝选育应侧重种源内家系和单株选择。苦楝种源特征明显，地理环境差异对其遗传多样性具有一定的影响。31个种源大致可分为东、西2类，我国苦楝遗传多样性起源中心或许存在于2类不同种源的生态过渡区。