白蚁是世界性害虫，广泛危害房屋建筑、水库堤坝、农林作物、塑料电缆、交通通讯设备以及图书、档案、纸张、布匹和丝绸等纤维物质(夏传国等，2001)。食饵诱杀技术因具有效果好、操作简便、成本低廉等优点，已经成为白蚁监测和防治的重要措施。研究白蚁采食行为，可为食饵诱杀技术的开发提供参考。根据采食场所，白蚁可分为露天和隐蔽采食2类。露天采食白蚁采食活动较易观察，其采食行为已得到较多研究(Sands， 1961； Heidecker et al.， 1984； Miura et al.， 1998； 丁芳等，2014)。隐蔽采食的白蚁采食活动几乎全部在蚁道内进行，蚁道结构的破损则导致白蚁的防卫反应，难以进行观察研究。目前，仅对桑特散白蚁(Reticulitermes santonensis)采食行为的研究较为详细，该白蚁在寻找食物时，先锋工蚁进入露天区域，摇摆头部和触角，感知空气中的气味物质，前进几厘米后便返回蚁巢并沿途释放踪迹信息素，召募其他工蚁沿此途径继续向前探索。在没有食物时，其探索方向是随机的，发现食物后，白蚁能感知食物气味，进行定向搜索。 白蚁到达食物源后对食物进行确认，然后按原路返回，召募其他个体，修筑蚁巢与食物源之间以及覆盖食物的泥被，泥被修筑完成后开始进行取食活动(Reinhard et al.， 1997； 丁芳等，2014)。黑翅土白蚁(Odontotermes formosanus(Shiraki)(等翅目Isoptera：白蚁科Termitidae)是中国南方的主要害虫，属于隐蔽采食的高等培菌白蚁。虽然对其习性及防治方法等已有较多报道(徐志德等，2007； Cheng et al.， 2007； Jiang et al.， 2011； 唐宏等，2014)，但对其采食行为仍缺乏系统了解。黄求应(2006)曾利用室内沙盘试验，观察其觅食行为过程中蚁道修筑情况，比较采食与掘道行为在蚁道修筑方面的差异。

取食记忆(feeding memory)指昆虫因取食经历(feeding experience)所形成的食物偏好。昆虫对不同食物的取食经历可能导致神经感觉系统的适应，形成取食记忆，进而影响食物选择。目前，鳞翅目、同翅目、鞘翅目及等翅目昆虫均有取食记忆的报道(Bernays et al.， 1994； Fernandez et al.， 2007； 刘佳佳等，2015)。黑翅土白蚁取食记忆的强度与采食工蚁原来的食物有关，取食记忆主要表现在取食开始阶段，经一段时间取食，取食记忆逐渐减退(刘佳佳等，2015)。研究取食记忆对白蚁食饵引诱技术开发具有较重要的参考价值。

早在1935年，人们就发现白蚁对真菌腐朽木的嗜食现象(Hendee，1935)。此后，发现密黏褶菌(Gloeophyllum trabeum) (褐褶菌目Gloeophyllales:褐褶菌科Gloeophyllaceae)侵染的木材或人工培养物对白蚁具有较强的引诱作用(Esenther et al.， 1961； Lund，1962； 高道蓉等，1987； 李秋剑等，2007； 徐正刚，2013)，密黏褶菌腐朽物常被用作毒饵的优良基饵。关于引诱机制，许多研究认为白蚁对密黏褶菌腐朽木的嗜食性主要是因为密黏褶菌腐朽木含有白蚁踪迹信息素(Smythe et al.， 1967； Matsumura et al.， 1968； 1969； 韩美贞等，1980； 罗钧泽等，1988a； 1988b)，踪迹活性物质为(Z，Z，E)-3，6，8-十二碳三烯-1-醇，为白蚁常见的踪迹信息素成分(Ohmura et al.， 1995)。也有研究发现除踪迹活性物质外，密黏褶菌腐朽物还具有引诱活性(韩美贞等，1980)。还有作者认为相对于踪迹信息素，引诱活性物质在毒饵防治中具有更加广阔的应用前景(谭速进等，1999)。

本研究通过人工培养获得密黏褶菌马尾松(Pinus massoniana)木粉发酵产物(腐木粉)，以未经密黏褶菌感染的马尾松木粉(松木粉)及腐木粉为食物源，以Y形嗅觉仪为主要部件构建采食场，研究黑翅土白蚁觅食行为、腐木粉的引诱活性以及取食记忆的影响，研究白蚁取食习性，可为开发毒饵诱杀技术提供基础资料。

2014年9月于南京林业大学北大山树木园，采集在树表泥被下采食的黑翅土白蚁工蚁，剥除树干下部的泥被，用底部衬有湿滤纸的培养皿收集泥被破损处出现的工蚁个体。试验虫源分别采于香樟(Cinnamomum camphora)、水杉(Metasequoia glyptostroboides)和杂交鹅掌楸(Liriodendron chinense × L. tulipifera)，分别标记为香樟、水杉和杂交鹅掌楸工蚁。试验前将工蚁放在底部衬有湿滤纸的培养皿内，黑暗环境下静置12 h [温度(25±1)℃、湿度70％±5％]，期间加水保持滤纸润湿。

密黏褶菌购自中国科学院普通微生物菌种保藏管理中心。将购买获得的菌种在无菌操作条件下接种到PDA斜面培养基上，26 ℃条件下培养14天，使菌种活化； 挑取少许菌丝接种于平板中央，置于26 ℃恒温箱中培养14天，待菌丝铺满整个培养皿时，作为腐木粉培养的接种源。

腐木粉培养：马尾松木粉150 g，放入塑料袋(12 cm×28 cm)内，灭菌处理(125 ℃，1.5 kg·cm^-2压力，1 h)。利用接种针在平板培养基上挑取约0.75 g密黏褶菌菌丝，与无菌水混匀，定容至300 mL后加入松木粉中(空白对照加入300 mL无菌水)，25 ℃条件下培养6周后，置室内风干后备用。

Y形嗅觉仪规格：主臂长10 cm，两侧臂各长15 cm，侧臂间夹角为45°，管内径1 cm。管道内壁下侧及交叉处采用标准磨口制成，管道内壁为毛玻璃面，便于工蚁爬行。两侧臂分别与2个10 mL味源瓶相连。以气体采样仪作为气流动力系统，在气流进入味源瓶之前，先经过活性炭过滤器和蒸馏水瓶，以净化空气和调节空气湿度，各部分之间用Telfon管连接。

觅食行为观察：取干土9.00 g，加入2 mL超纯水搅拌均匀后置于Y形管的交叉处。取0.100 0 g腐木粉，加入少许超纯水使其湿润后作为食源放入侧臂管距交叉口10 cm处，对照侧臂放入松木粉； 另在测试味源瓶中加0.20 g的腐木粉，对照味源瓶中加0.20 g松木粉，以增强Y形管中挥发性物质浓度。从采集的工蚁中选取大小相近的健壮工蚁100头置于底部衬有湿滤纸的塑料培养皿内(直径5.7 cm，高1.5 cm)，作为等候室，每等候室侧边钻一个直径6 mm的小孔与Y形管基端相连(图 1)。

	图 1 Y形嗅觉仪的结构① Fig. 1 The structure of Y-tube olfactometer a.空气泵Air pump； b.气流分支件Airflow branches； c.气体流量计Gas flowmeter； d.空气净化柱Air purifier； e.加湿瓶Humidifier； f.样品瓶Sample bottle； g.三通管Three-way tube； h.泥土Soil； i.食料Food； j.聚四氟乙烯管 PTFE tube； k.硅胶管Silicon tube;n.等候室Waiting room.

采食场构建条件见1.1.3。测试时，打开气体采样仪供气，调整流量计保证气流稳定，每个侧臂气流流速300 mL·min^-1。上述装置整体置于黑暗条件下，红光条件下观察。以采自不同树种的采食工蚁为供试虫，观察其觅食行为，重复观察3次，记录其在等候室与Y形管交界处停留时间、工蚁在各侧臂首次出现的时间及头数、到达食物源时间、泥被出现时间和食物取食量； 取食腐木粉和松木粉工蚁的数量，从试验开始0.5 h记录，每隔1 h分别记录两侧臂中白蚁数量，持续20 h。在试验开始48 h后，小心去掉两侧臂中木粉上的泥土，取出各木粉的剩余部分，置于55 ℃干燥箱中烘干至恒质量并称量，计算各木粉的被食量。

Y形嗅觉仪各装置及连接方式同1.1.3。测定时，在味源瓶中加0.20 g腐木粉，在对照味源瓶中加0.20 g松木粉。打开气体采样仪供气，气体流速及试验观察方式同1.1.3。供试工蚁从Y形管主臂管口引入，当其处于主臂长1/2处开始计时，观察记录工蚁5 min内对气味源的行为反应。当工蚁爬过侧臂的1/3处以上或达到侧臂出口者，判定为该虫对该臂气味源做出选择； 引入5 min仍不做出选择则结束观察，记为不反应。每次接入5头工蚁，重复30次。每测一次更换一洁净的Y形管，每5次调换味源的位置。更换后的Y形管、Telfon管及味源瓶用95%乙醇彻底清洗，150 ℃高温烘干，晾至常温。

数据结果采用SPSS 19.0和Microsoft Excel 2010统计软件处理分析。

黑翅土白蚁觅食行为包括嗅觉感受、食物探索与确认以及召募采食个体等内容。当Y形嗅觉仪的等候室与Y形管接通后，等候室内的采食工蚁中有1~2头出现在等候室与Y形管交界处，摆动触角停留4~7 s，对食源气味进行辨别，然后沿Y形管主管前行，直至到达Y形管分叉处的土堆。此时，等候室中大部分工蚁也沿Y形管主管进入土堆，与先锋工蚁一起在土堆下修建临时泥被，从土堆向等候室方向也会修筑一小段泥被，但Y形管侧臂尚无泥被修筑。此后，少数工蚁离开土堆泥被继续前进搜索食物源。约2 min后，1~2头工蚁进入装有腐木粉的Y形管侧臂(简称腐木粉侧臂)，摆动触角辨别食物气味，缓慢前进一段后按原路返回土堆，其他白蚁个体离开土堆前行寻觅食物源，每次探索路程不断延长。在觅食工蚁逐渐接近食物源时，土堆中其他工蚁个体即开始构建指向食物源的泥被。3~9 min后，2~3头工蚁到达腐木粉，用触角触碰腐木粉，并进行试探性啃食，返回土堆后召募更多白蚁参与，开始出现将腐木粉搬运到土堆下的行为。从气味感受、食物确认、召募其他个体到食物搬运，约需8~10 min。黑翅土白蚁对松木粉的觅食行为与对腐木粉的觅食行为相似，但在行为出现的时间上有差异，采食工蚁在松木粉侧臂首次出现、到达松木粉、泥被出现的时间皆晚于腐木粉侧臂。

在Y形嗅觉仪的腐木粉侧臂，来源于水杉的工蚁在等候室与Y形管交界处停留时间最短，并与来自香樟和杂交鹅掌楸的工蚁有显著差异(表 1)； 在侧臂中出现的时间依次是杂交鹅掌楸、香樟、水杉工蚁，但三者之间差异不显著。到达腐木粉的时间依次是杂交鹅掌楸、香樟、水杉工蚁。但来自杂交鹅掌楸工蚁与其他两者间、来自香樟和水杉的工蚁间差异显著； 工蚁泥被出现时间差异均达到极显著水平； 来自杂交鹅掌楸工蚁对腐木粉的取食量与后两者差异显著。上述结果表明，来自杂交鹅掌楸的工蚁对腐木粉的觅食反应最敏感，其次为香樟工蚁、水杉工蚁。

表 1 黑翅土白蚁对腐木粉和松木粉的觅食行为的比较^① Tab.1 The comparison of the foraging behavior of O.formosanus to the pine wood powder infected by G.trabeum and the pine wood powder

表 1 黑翅土白蚁对腐木粉和松木粉的觅食行为的比较① Tab.1 The comparison of the foraging behavior of O.formosanus to the pine wood powder infected by G.trabeum and the pine wood powder mean±SD 项目Item 腐木粉 P. massoniana wood powder infected by G. trabeum 松木粉 P. massoniana wood powder Cc Mg Lc Cc Mg Lc 交界处停留时间Residence time at the junction/s 6.18±0.44aAB 4.71±0.13bB 7.12±0.58aA 6.18±0.44aAB 4.71±0.13bB 7.12±0.58aA 侧壁首次出现工蚁时间Period between the beginning and workers appearance in arms/min 2.34±0.33aA 3.59±0.52aA 2.19±0.36aA 66.62±1.92aA 17.10±0.55bB 2.67±0.37bB 到达食物源时间Period between the beginning and workers getting to the food/min 6.47±0.50bA 8.22±0.47aA 3.39±0.08cB 118.10±0.94bA 138.85±3.77aA 4.09±0.34cB 侧壁泥被出现时间Period between the beginning and the mud shelter appearance in arm/min 18.09±0.38cC 24.39±1.41bB 50.29±1.09aA 144.58±2.01bB 130.35±3.88cC 191.28±2.00aA 取食量Food consumption/mg 30.70±0.78bB 30.57±1.40bB 48.22±0.75aA 13.79±0.38cC 17.37±0.76bB 22.99±0.34aA ①同行数据后不同字母表示差异显著，小写字母表示0.05水平 ，大写字母表示0.01水平 (下同)。 Cc，Mg，Lc分别表示采自香樟、水杉、杂交鹅掌楸的工蚁(下同)。 The data with different letters in the same row show significant difference; The lowercase letters show level of significant difference at 0.05， the capitals show level of significant difference at 0.01 (The same below). Cc，Mg，Lc are workers collected from C. camphora， M. glyptostroboides， L. chinense × L．tulipifera，respectively(The same below).

在松木粉侧臂中，来自杂交鹅掌楸的工蚁出现时间最早，来自香樟的工蚁与其他两者间差异极显著(表 1)。到达松木粉时间依次是杂交鹅掌楸、水杉、香樟工蚁，杂交鹅掌楸的工蚁与其他两者间差异极显著。泥被出现时间依次是水杉、香樟、杂交鹅掌楸的工蚁，对松木粉的取食量由高到低依次是杂交鹅掌楸、水杉、香樟工蚁，除泥被出现时间与取食量外，其他项目与腐木粉侧臂相似。

在Y形嗅觉仪的腐木粉侧臂中，来自不同树种工蚁的取食动态呈2个峰期，第1个峰期的个体数量较多(图 2a)。但来自不同树种工蚁的觅食高峰期及结束时间差异明显，杂交鹅掌楸工蚁取食活动最高峰在0.5~1.5 h，7.5 h为低谷，11.5 h左右为次高峰，18.5 h后无个体外出取食。香樟工蚁取食最高峰为3.5~5.5 h，7.5 h为低谷，12.5 h为次高峰，15.5 h后无外出取食。水杉工蚁仅0.5~5.5 h和10.5~13.5 h期间有工蚁觅食活动，其余时段无白蚁外出取食。

	图 2 松木粉侧臂中工蚁数量的时间动态 Fig. 2 The real time dynamic of workers number in the arm a.腐木粉Pine wood powder infected by G. trabeum; b.松木粉The pine wood powder.

在松木粉侧臂中取食的工蚁数量明显较少(图 2b)，杂交鹅掌楸工蚁在整个观察期只有2~6头，高峰时段不明显。香樟工蚁0~7.5 h有少数个体出现，3.5 h数量最大，其余时段无白蚁活动。水杉工蚁出现于(7.5~15.5 h)，个体数量也较少。

来自不同树种的工蚁均对腐木粉有较强的嗜好性(表 2)，2种木粉处理组间的采食个体数量均达到极显著差异； 腐木粉对香樟和水杉工蚁具有更强的引诱活性，与杂交鹅掌楸相比差异显著(P<0.05)，香樟和水杉工蚁之间在腐木粉侧臂中的数量差异不显著。总之，腐木粉对黑翅土白蚁采食工蚁具有明显的引诱活性，其辨认食物依靠嗅觉器官。

表 2 工蚁对腐木粉和松木粉的趋性反应^① Tab.2 The selective preferences of workers between the pine wood powder infected by G. trabeum and the pine wood powder

表 2 工蚁对腐木粉和松木粉的趋性反应① Tab.2 The selective preferences of workers between the pine wood powder infected by G. trabeum and the pine wood powder 工蚁来源Source of workers 工蚁数量The number of workers Sig. 腐木粉Pine wood powder infected by G. trabeum 松木粉Pine wood powder Lc 85a 49a *** Cc 104b 29b *** Mg 114b 28b *** ①***表示 相同处理组两臂之间工蚁数量， 差异极显著。 同一列中 ，bb差异不显著，ab差异显著(P<0.01)。*** shows extremely significant difference for workers between two arms in the same treatment. The data in the column bb shows no significant difference， ab shows significant difference(P<0.01).

白蚁隐蔽采食，对其取食活动研究多采用沙盘法或培养皿生测法，根据泥路情况、食物消耗及食物中采食个体数量等分析采食行为(Reinhard et al.， 1997； Souto et al.， 1999； Campora et al.， 2001； Su，2005； 黄求应，2006； Olugbemi，2011)。本研究应用Y形嗅觉仪为主要部件构建的采食场，便于观察和研究采食行为。该装置能够通过全黑暗模拟采食蚁道内环境，同时玻璃管道隔离了环境中空气流动的干扰。在连续20 h观察中，工蚁未出现明显防御行为，工蚁的觅食、召募、食物确认和觅食行为也有较好的重复性，表明该系统较为接近自然状况。如果将上述采食场内气流导出，则可应用于信息化合物组分的实时采集分析。试验中笔者发现，在20 h后少有白蚁外出采食，这可能与Y形嗅觉仪采食场未与蚁巢连接有关。如果进一步研究，可将Y形嗅觉仪采食场管道与蚁巢相连，使其更接近白蚁群体结构的自然状态，可观察研究其觅食以及其他行为。

本文结果表明，对于隐蔽采食的白蚁，其嗅觉感受依然具有重要作用，这与Reinhard等(1997)对桑特散白蚁的研究结果类似。在食物搜索、确认等环节，黑翅土白蚁的觅食行为与桑特散白蚁的也基本类似，但桑特散白蚁的取食活动在蚁路修筑完成之后进行，而黑翅土白蚁蚁路修筑与取食活动同时进行。本研究中，工蚁仅修筑一小段指向食物源的泥被，可能由于试验在黑暗条件下进行，使白蚁感受到一个黑暗、安全、类似蚁道的环境，从而停止了对泥被的修筑。预试验中还发现，黑翅土白蚁觅食过程中每次搜索的距离较短，这可能属于避免离开泥被长时间裸露的保护性适应，当食物距工蚁较远时，搜索行为则不会发生。预试验中将泥土置于等候室，仅在侧臂中加入食源，味源瓶中不加入，工蚁则不进入Y形管中进行觅食。将泥土置于Y形管分叉处，并在味源瓶中加入木粉增加Y形管中食物源挥发性物质浓度，工蚁立即进入Y形管开始觅食。除搜索距离方面的原因外，食物气味浓度以及食物与背景(泥土)气味可能也是采食行为的重要影响因子。

刘佳佳等(2015)曾报道黑翅土白蚁取食记忆的持续时间与工蚁原来的食物在可供选择食物资源中的嗜食序列有关：如果原食物属于食物选择试验中最嗜食物质，取食记忆可持续存在，否则，一段时间后将发生食物选择的改变。本研究发现，取食记忆可能涉及觅食行为的各个环节，表现程度因食物种类而异。食物是腐木粉时，工蚁在食料上首次出现及泥被出现时间较早； 食物是松木粉时，则泥被出现时间晚而且取食量较小。虽然来源于不同树种的工蚁在觅食行为、采食个体数量等方面存在差异，但均表现出对腐木粉强烈的嗜食性，原有食物导致的取食记忆并不影响白蚁对腐木粉的取食。已有的关于腐木粉引诱活性的报道(Watanabe et al.， 1963； 韩美贞等，1980)，均采用培养皿生测法；本研究使用嗅觉仪构建的采食场进行测定，避免了不同食物气味之间的相互干扰，且测定直观简便，结果重复性高。本研究结果表明，腐木粉中可能存在引诱活性物质，这为进一步研究其化学成分以及采食工蚁的感受机制，设计新型高效饵料提供了依据。