蛹虫草(Cordyceps militaris)，别名蛹草、北虫草、北冬虫夏草，是著名药材冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的近缘种，也是虫草属真菌的模式种，具有和冬虫夏草类似的活性成分和医疗保健功效(梁宗琦，2007)。冬虫夏草生境特殊，需生长在青海、四川、西藏等海拔3 000~5 000 m的高寒地区，蛹虫草则不需要严格的生态环境，我国湖北、河北、吉林、陕西、安徽、江苏、江西、河南、云南、广西、贵州、四川、台湾等省区均有发现。蛹虫草常发生在次生林地带的阔叶林及混杂林下，要求林间郁闭度在0.6左右，土质疏松，含水量70%~80%，一般以鳞翅目昆虫的蛹或幼虫为寄主，其次为鞘翅目和双翅目昆虫的幼虫与蛹，6—9月从地面长出子座，对林区害虫的自然控制起着重要作用(梁宗琦，2007；蒲蛰龙等，1996)。蛹虫草寄主面较广、寄生性较强，如深入研究，有望制成防治森林害虫的新型生物制剂。

到目前为止，对蛹虫草进行的研究，主要还是其活性成分和医疗保健功效，这也是目前开发利用的重点。冬虫夏草由于生境特殊、寄主单一，难以进行人工培育，加之滥采滥挖，导致资源破坏，产量锐减，使市场价格暴涨；蛹虫草则具有不苛求生境和寄主、已可人工培育及活性成分含量不亚于冬虫夏草等优点，使之成为冬虫夏草代用品的首选。蛹虫草的活性成分主要有虫草酸、虫草多糖、腺苷和虫草素等，特别是虫草素的含量远高于冬虫夏草(韦会平等，2004)。但不同林区的蛹虫草在活性成分含量上有无不同，还未见研究比较。笔者对来自河南伏牛山、江西井冈山、苏南紫金山和苏北老子山林区的4株蛹虫草进行检测比较，现将研究情况报告如下。

1 材料与方法 1.1 材料

1) 样品   A来自河南伏牛山，由河南大学生物工程研究所刘德育研究员提供；B来自江西井冈山，由江西农科院农业应用微生物研究所张诚副研究员提供；C来自江苏南京紫金山，由江苏省农科院食用菌研究开发中心蒋宁助理研究员提供；D来自江苏盱眙老子山，由淮阴师范学院资源微生物研究所自行采集。以上菌株经转接活化，用相同培养基在同一条件下进行固体培养，取培养物于60 ℃烘干粉碎，然后进行各项检测。

2) 试剂  虫草素和腺苷标准品由上海化学试剂公司进口分装，磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、四氢呋喃、氯化钠，D-甘露醇、鼠李糖、高碘酸钠、乙酸铵、冰醋酸、乙酰丙酮、盐酸，葡萄糖、无水乙醇、苯酚、浓硫酸等，均为国产分析纯试剂，试验用水为二次蒸馏水。

3) 设备  培养设备：高压灭菌器，洁净工作台，恒温培养箱等；样品处理设备：电热恒温鼓风干燥箱，多功能食品加工机，电子天平，微波炉，台式离心机，水浴锅等；检测设备：Waters 600E高效液相色谱系统，Waters 2487紫外检测器，Empower色谱数据管理系统，721S分光光度计等。其余玻璃器材为实验室常规仪器。

1.2 方法

1) 活性成分提取  采用微波提取法(夏敏等，2006)。用100 mL试剂瓶，加入精确称量的样品和准确量度的提取液，每6瓶1组，不够6瓶时用盛有同量自来水的试剂瓶补充，在家用微波炉中排成一圈，用适当火力的微波进行提取。不同活性成分的提取火力和时间，需用试验确定，以获得最佳提取效果。提取后用离心机离心，取上清液进行后续步骤的操作。

2) 虫草素和腺苷测定  采用高效液相色谱法(夏敏等，2007)。色谱柱为Waters NOVA-PAK C₁₈反相柱，3.9 mm×300 mm，4 μm；流动相为KH₂PO₄-K₂HPO₄缓冲液(pH=6.86，0.01 mol·L^-1)+1%四氢呋喃，流速1.0 mL·min^-1；检测波长260 nm。虫草素标准曲线的回归方程为Y=3.10×10⁶X-1.34×10⁴，R²=0.999 9；腺苷标准曲线的回归方程为Y=3.55×10⁶X-5.72×10³，R²=0.999 9。式中Y为色谱峰面积，X为虫草素或腺苷的进样量(μg)。

样品提取时，向100 mL试剂瓶中加入0.250 0 g样品，再加25.00 mL生理盐水提取液，用中火(P50)处理2.0 min，将提取液离心，上清液用0.2 μm水系针头滤器压滤，压滤液进行高效液相色谱检测。

3) 虫草酸测定  采用高碘酸钠比色法(温鲁等，2004)。虫草酸的化学成分为D-甘露醇，准确称取甘露醇标准品0.500 0 g，配成5 mg·mL^-1的甘露醇标准溶液，再稀释成不同质量浓度的系列标准溶液；用微量取样器分别取不同质量浓度的标准溶液300 μL，加700 μL蒸馏水，然后加1.00 mL高碘酸钠试液，混匀，室温放置10 min，加2 mL 0.1%鼠李糖，再加4 mL新配制的Nash试剂(用冰醋酸和乙酰丙酮等配制)，53 ℃水浴15 min，用分光光度计在420 nm处测吸光度，得甘露醇含量C与吸光度A的回归方程：C=0.396 2A-0.004 8，R²=0.999 9。

样品提取时，称取0.100 0 g样品放入试剂瓶，加入25.00 mL蒸馏水，以中火(P 50)处理1 min，离心后取上清液300 μL，其余操作与标准溶液测定步骤相同。测得吸光度后，按回归方程计算提取液的虫草酸含量，则样品中的虫草酸含量(mg·g^-1)= C×25/m，式中C为样品溶液中虫草酸含量(mg·mL^-1)，25是样品提取液体积(mL), m为称取样品的质量(g)。

4) 虫草多糖测定  采用苯酚-硫酸法(来永斌等，2001)。多糖在酸性条件下水解成葡萄糖等单糖，以葡萄糖为标样配制系列标准溶液，分别取各质量浓度标准溶液1.00 mL，加入5%苯酚溶液1.5 mL，浓H₂SO₄ 7.5 mL，常温显色30 min，于490 nm处测定吸光度，得葡萄糖含量C与吸光度A的回归方程：C=0.153 1 A-0.002 4，R²=0.999 1。

样品提取时，称取0.500 0 g样品放入试剂瓶，加入20.00 mL蒸馏水，以中火(P 50)处理3.5 min，离心后取上清液5.00 mL，加20 mL无水乙醇，待多糖沉降，离心去上清液，将沉淀晾干，加热水溶解，定容至10 mL，从中取0.10 mL，用水补足1.00 mL，其余操作与标准溶液测定步骤相同。样品中多糖含量(mg·g^-1)= C×100×4/m，式中C为0.10 mL测试液中多糖含量(mg)，100是多糖测试液总体积10 mL与0.10 mL取出液的体积比，4为微波提取液总体积20 mL与醇沉时取出液5 mL的体积比，m为称取样品的质量(g)。

2 结果和分析 2.1 结果

测定结果见表 1，表中数据为平均值(n=5)，各项测定的相对标准偏差(RSD)分别在1.04%~1.92%之间。

2.2 分析

1) 从上表可以看出，来自不同林区的蛹虫草，主要活性成分虫草素的含量存在较大差异，含量最低的是井冈山林区的菌株，其次为伏牛山林区的菌株；江苏紫金山和老子山2个林区菌株的虫草素含量均很高，最高的紫金山菌株是井冈山菌株的3.14倍。虫草素是蛹虫草最重要的活性成分(梁宗琦，2007；刘东泽，2004)，其含量高低在很大程度上影响着蛹虫草的医疗保健功效。腺苷含量则以紫金山菌株最低，用高效液相色谱未能检出，而井冈山菌株的腺苷含量最高。

2) 虫草酸含量以伏牛山菌株最高，井冈山菌株最低，前者是后者的1.65倍；江苏2个菌株相近，均处于较高水平。虫草多糖则以伏牛山菌株最低，江苏老子山菌株最高，紫金山菌株与老子山菌株基本一致，井冈山菌株也很高。

3) 综合4种主要活性成分总量，江苏2个菌株仍然相近并处于最高水平，伏牛山菌株次之，井冈山菌株最低。

3 小结与讨论

1) 来自不同林区蛹虫草的活性成分含量，存在较为明显的差距，这里既有菌株之间的差异，也有林区条件(如林木种类和郁闭度、昆虫种类和习性、土壤质地和酸碱度、气温和降水量等)不同所产生的影响。江苏2个林区自然条件相近，所以2个菌株的活性成分含量很接近，而且均处于很高水平。

2) 本研究仅对不同林区蛹虫草菌株的固体培养物进行了检测比较，未检测自然采集的野生蛹虫草和代料栽培的人工蛹虫草。据研究，蛹虫草固体培养物的活性成分含量，较野生蛹虫草和人工蛹虫草高得多(温鲁等，2008)，而且含量高低同样体现出野生蛹虫草和人工蛹虫草的差异。

3) 受菌种来源制约，对国内其他林区的蛹虫草未能进行检测比较，今后将创造条件，扩大检测比较的范围。

4) 不同林区蛹虫草的活性成分含量和对昆虫的寄生能力之间，是否有某种相关性，如果有，可否通过改变活性成分含量来提高蛹虫草对林区害虫的防治能力，是一个值得研究的新问题。