嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)可引起肺炎，同时可合并其他系统损害造成感染性疾病。1977年美国退伍军人聚会后集体发病，人们第一次发现病原体^[1]。我国首例军团菌病自1982年在南京发现后，全国各地陆续报道多起军团菌病的暴发、流行及散发病例^[2]。嗜肺军团菌在自然界广泛存在，如人工建筑的供水系统、淋浴热水系统及空调系统中，因潮湿和水环境的存在而大量繁殖，传播方式以气溶胶吸入为主，可导致个体及群体发病。已确定的军团菌属共有48个种，70个血清型，与人类致病关系最为密切是嗜肺军团菌。嗜肺军团菌已成为社区获得性肺炎中第二位病因，病死率相对很高，应引起警觉，及时治疗。空调冷却塔中的嗜肺军团菌文献报道较多，西城区早在2006年已经进行过空调冷却塔嗜肺军团菌污染状况的调查^[3]，目前卫生行政部门也比较重视。而热水系统的嗜肺军团菌污染状况文献报道较少，本次对西城区公共场所的淋浴热水系统嗜肺军团菌污染状况做一次系统的监测，为淋浴热水系统嗜肺军团菌的预防控制工作提供参考依据。

1 材料与方法 1.1 材料

1.1.1

样品来源：将2017年7—11月卫生监督送检的西城区公共淋浴场所所有样本纳入分析，以管网水二次供水的采样方法，用灭菌广口瓶采集淋浴热水水样500 mL。

1.1.2

主要试剂：GVPC、BCYE培养基购置于北京君力康公司，军团诊断血清购置于天津生物技术有限责任公司，荧光PCR反应试剂盒购自ABI公司。

1.1.3

主要仪器：高效过滤器(GM-0.33Ⅱ)，生物安全柜(Therm Forma)，荧光定量PCR仪(ABI7500 FAST)。

1.2 方法

1.2.1 淋浴热水样本检验

将水样摇匀后静置15 min，取500 mL水样倒入过滤器样本杯中，通过0.45um孔径的滤膜抽吸过滤，将滤膜剪碎放入20 mL灭菌蒸馏水振荡2 min，吸取2 mL混合振荡后的液体，加同体积酸处理液(pH 2.0缓冲液)充分混合10 min后, 取0.2 mL接种到GVPC培养基, 36℃培养，每日观察结果, 如有疑似菌落，转种BCYE培养基和普通血琼脂培养基进行鉴别。在普通血琼脂培养基上未生长而在BCYE培养基上生长的疑似的菌落，则做血清凝集试验和生化试验。同时满足血清凝集试验阳性、明胶液化阳性和水解马尿酸试验阳性，判定为嗜肺军团菌阳性菌株，再使用荧光PCR试验进一步复核。

荧光PCR反应试剂盒：ABI AgPath-IDTM One-step RT-PCR kit。

引物和探针^[3]：

上游引物5′-GCTTGCAATGTCAACAGC-3′，

下游引物5′-CCTTTAGCCATTGCTTCC-3′，

探针5′(FAM)-CTGCAACCGATGCCACATCATTA-(TAMRA)3′。

由北京六和通公司合成。

1.2.2 统计学分析

采用Excel 2007软件录入实验数据，使用SPSS 13.0进行数据统计分析。率的比较用χ²检验，P < 0.05判断为差异有统计学意义。

1.2.3 质量控制

以标准菌株(ATCC33152LP1型嗜肺军团菌和ATCC33154LP2型嗜肺军团菌)作为阳性对照，对实验过程进行全程质量控制。

2 结果 2.1 一般情况

如表 1所示，130份样本中，共检出嗜肺军团菌阳性28份，总阳性率为21.8%，其余样本未检出嗜肺军团菌。

2.2 时间分布情况

如表 1和图 1所示，7—11月中，9月份的阳性率最高，为39.0%，11月阳性率最低为0，总体来说，是从7月份开始，呈现阳性率逐渐升高再下降的走势。

2.3 菌型分布情况

共检出嗜肺军团菌阳性28份，如表 1和图 2所示，其中LP1型阳性13份(46.4%)，LP2-14型阳性15份，再对LP2-14型进行血清分型，结果显示，检出LP7型最多，为7份(25.0%)，其它的LP5和LP8各2份，LP4，LP6，LP11和LP14各1份。

3 讨论

共130份淋浴热水样本中，检出嗜肺军团菌阳性28份，总阳性率为21.8%。淋浴热水系统嗜肺军团菌阳性率比较高的原因可能是：第一，如果淋浴热水系统温度能保持在60℃左右，能杀死大多数细菌，据宾馆工程人员介绍，出于使用成本和淋浴热水系统使用寿命方面考虑，淋浴热水管道中的水长期保持在40℃左右, 而军团菌适宜生长的温度为25℃~42℃，军团菌在40℃非常适宜生长和繁殖。第二，淋浴热水系统相对封闭，消耗量小，水容易滞留，嗜肺军团菌在橡胶垫和拐弯处特别容易积蓄、生长。长期以来，工作人员重视冷却塔的消毒，而忽视淋浴热水系统的清洁消毒，淋浴热水系统中嗜肺军团菌控制基本还是空白。淋浴热水系统嗜肺军团菌阳性率虽然没有文献报道的空调冷却塔中的嗜肺军团菌的阳性率高(52.4%)^[4]但淋浴热水系统放出的水，不管是用于洗手还是沐浴，均直接接触人体，从传播途径角度考虑，危险程度更高。文献报道，北京曾发生浴室淋浴热水引起的军团菌病暴发，在查找传染源的过程中，淋浴喷头分离出了大量嗜肺军团菌^[5]，因此，淋浴热水系统军团菌污染的控制工作必须加强。

淋浴热水系统中的嗜肺军团菌，阳性率7—11月呈现阳性率逐渐升高再下降的走势，尤其在8—10这3个月嗜肺军团菌的污染水平较高，同文献报道空调冷却塔的嗜肺军团菌高发季节相吻合^[6]，目前，淋浴热水系统的清洗消毒工作几乎处在空白，很少有单位开展。而淋浴热水系统不同于中央空调系统，且与人们密切接触，淋浴热水中的嗜肺军团菌容易感染接触者，因此，淋浴热水系统的清洗消毒工作应该得到重视，因淋浴热水系统全年都在运行，对淋浴热水系统应进行全年的监测，以全面系统地掌握其污染状况，对淋浴热水系统嗜肺军团菌阳性率是否与季节相关进行调查验证。另据文献报道^[7]，公共场所从业人员军团菌病相关知识的总知晓率较低，为54.2%，说明淋浴热水系统作用者的军团菌感染的健康教育工作刻不容缓，使用过程中注意清晨用水前放掉过夜水，经常用清洁剂洗手等几项简单易操作的措施就能起到很好的预防作用。

嗜肺军团菌菌型分布情况显示，阳性最多的是LP1型阳性13件，构成比为46.4%，这与国内文献报道的情况一致^{[6, 8]}。其次为检出LP7型，构成比为25.0%，其它的LP5和LP8各2份，LP4，LP6，LP11和LP14各1份。LP7型远高于除LP1型以外的其他型别，LP7型是否会成为今后的另一个嗜肺军团菌优势菌株值得在后续的监测工作中加以关注。

嗜肺军团菌已经成为现代都市发展中直接面对的一个重要公共卫生问题^[9]。据文献报道^[10]，政府重视流感预防控制工作，加大了流感疫苗接种费用的减免力度，疫苗接种率大幅提高，使得2009—2012年本市老年人群流感患病率显著下降，收到了很好的预防效果。在城市淋浴热水系统中嗜肺军团菌的污染现状、预防及控制工作，希望也能得到政府部门的高度重视，制定相关政策，协调公共卫生部门，更好的指导和构建宾馆、饭店等公共设施管理部门的防控工作，保障广大群众的健康！