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  波谱学杂志   2020, Vol. 37 Issue (4): 469-483.  DOI: 10.11938/cjmr20202802
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保秋连, 杨云汉, 魏可可, 等. 水溶性磷酸盐柱[5]芳烃与吖啶橙的络合行为[J]. 波谱学杂志, 2020, 37(4): 469-483. DOI: 10.11938/cjmr20202802.
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BAO Qiu-lian, YANG Yun-han, WEI Ke-ke, et al. Complexation Analysis of Water-Soluble Phosphate Salt Pillar[5]arene with Acridine Orange[J]. Chinese Journal of Magnetic Resonance, 2020, 37(4): 469-483. DOI: 10.11938/cjmr20202802.
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基金项目

国家自然科学基金资助项目(21562048,21762051);云南省高校有机功能分子及材料科技创新团队资助项目;云南省教育厅科学研究基金资助项目(2020Y0261)

通讯联系人

杨丽娟, Tel:13648710918, E-mail:yangljyang@sina.com

文章历史

收稿日期:2020-01-15
在线发表日期:2020-05-21
水溶性磷酸盐柱[5]芳烃与吖啶橙的络合行为
保秋连 , 杨云汉 , 魏可可 , 罗建萍 , 古捷 , 鲁佳佳 , 杨丽娟     
云南民族大学 化学与环境学院, 云南省高校智能超分子化学重点实验室, 生物基材料绿色制备技术国家地方联合工程中心, 云南 昆明 650500
摘要: 本文首先构建了水溶性磷酸盐柱[5]芳烃(PP5A)与阳离子荧光染料吖啶橙(AO)主-客体络合物.然后通过紫外光谱(UV)、红外吸收光谱(IR)、分子荧光光谱(MFS)、一维和二维核磁共振(NMR)波谱技术(包括1H NMR和NOESY)研究了PP5A与AO的络合行为.此外,还研究了pH及两种表面活性剂——十二烷基硫酸钠(SDS)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对AO/PP5A络合体系的荧光强度的影响.最后,采用分子对接计算了PP5A与AO和CTAB的络合模式及络合能.研究表明,AO与PP5A形成1:1的主-客体络合物;在pH=3~11范围内,PP5A均能使AO的荧光强度发生减弱或淬灭;SDS和CTAB的加入并不会对AO/PP5A络合体系的荧光强度产生显著影响.AO与PP5A络合时产生的荧光强度变化可为荧光传感器的设计提供理论基础.
关键词: 络合    分子对接    水溶性磷酸盐柱[5]芳烃    吖啶橙    
Complexation Analysis of Water-Soluble Phosphate Salt Pillar[5]arene with Acridine Orange
BAO Qiu-lian , YANG Yun-han , WEI Ke-ke , LUO Jian-ping , GU Jie , LU Jia-jia , YANG Li-juan     
Key Laboratory of Intelligent Supramolecular Chemistry at the University of Yunnan Province, National and Local Joint Engineering Research Center for Green Preparation Technology of Biobased Materials, School of Chemistry & Environment, Yunnan Minzu University, Kunming 650500, China
Abstract: The host-guest complex of water-soluble phosphate salt pillar[5]arene (PP5A) and cationic fluorescent dye acridine orange (AO) was constructed, and studied with ultraviolet spectrum (UV), infrared absorption spectrum (IR), molecular fluorescence spectroscopy (MFS), and nuclear magnetic resonance (NMR) spectra (1H NMR and NOESY). And then, the effect of pH and two surfactants, including sodium dodecyl sulfate (SDS) and cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) on the fluorescence intensity of AO/PP5A complex system were investigated. Finally, the complexation mode and energy of PP5A with AO and CTAB were calculated by molecular docking. The results showed that AO and PP5A formed a 1:1 host-guest complex. PP5A reduced or quenched the fluorescence intensity of AO in the pH range of 3~11. The addition of SDS and CTAB did not affect the fluorescence intensity of AO/PP5A complex significantly. The fluorescence changes generated by AO and PP5A complexation can provide a theoretical basis for the design of fluorescence sensors.
Key words: complexation    molecular docking    water-soluble phosphate salt pillar[5]arene    acridine orange    
引言

主-客体分子识别和组装是当今超分子化学的研究热点之一.2008年,Ogoshi[1]以廉价易得的芳香族原料合成了一类结构新颖的芳香族大环化合物,由于其具有刚性的柱状结构,因而得名柱芳烃(pillar arenes).柱芳烃的发现掀起了超分子化学领域的研究热潮,各类柱芳烃衍生物,例如羧基柱芳烃、磷酸化柱芳烃、季铵化柱芳烃等被大量报道.柱芳烃具备易于修饰、具有不同尺寸大小的刚性空腔[1-3]、热稳定性高、配体作用专一、结构刚性强、高度对称等特点,与客体分子表现出独特的主客体络合性能[4, 5].因此,它成为继冠醚[6-9]、环糊精[10-12]、杯芳烃、葫芦脲[13, 14]之后的第5代经典大环宿主分子[15].经过十多年的发展,有关柱芳烃的研究已经从合成方法上的探索转移到了应用研究,如今,柱芳烃已在荧光检测[16]、电化学传感[17]、跨膜通道[18-20]、药物递送[21-25]和吸附材料[26]等领域得到了广泛应用.

基于大环分子与荧光染料的主-客体络合研究已被广泛报道[27],例如葫芦脲与荧光染料的络合行为的光谱学研究[28, 29].Zhou等[30]通过分子荧光光谱(molecular fluorescence spectroscopy,MFS)研究吖啶橙(acridine orange,AO)与葫芦脲[7]在水溶液中的主-客体络合行为,发现葫芦脲[7]与AO具有较强的络合能力.刘青等[31]报道了葫芦脲[8]与AO的相互作用,构建了葫芦脲[8]与AO主-客体络合物,并将其作为荧光探针,用于生物细胞内多菌灵的识别检测.杨红瑞等[32]报道了β-环糊精通过主-客体相互作用与亚甲基蓝形成络合物,该络合物可以作为增敏剂测定左氧氟沙星的含量.林梁斌等[33]报道了共轭芳香基桥联的双杯[4]芳烃与染料维多利亚蓝和橙黄Ⅰ的主-客体络合行为,结果表明杯芳烃与两种染料均可形成主-客体络合物,可用于染料的快速识别.严祯曦等[34]研究了结构与识别性能独特的杯[4]芳烃衍生物与4种有机染料分子(橙黄Ⅰ、茜绿素、维多利亚蓝和亚甲基蓝)的主-客体络合作用,结果表明其对4种有机染料均显示出较强的络合能力.Yang等[35]构建了一种水溶性磷酸盐柱[6]芳烃功能化石墨烯与AO的主-客体络合物,并将该络合物用于农药百草枯的检测.Hua等[36]报道了阴离子水溶性柱[6]芳烃与AO通过主-客体电荷-转移的相互作用形成络合物,并将络合物应用于胆碱类化合物的检测和酶促反应的监测.但是目前,关于阴离子大环水溶性磷酸盐柱[5]芳烃(water-soluble phosphate salt pillar[5]arene,PP5A)与阳离子型染料AO的主-客体络合行为的光谱学研究还未见报道.

特定的荧光染料在水溶液中与大环主体发生主-客体相互作用后,会呈现出明显的荧光变化.但是pH会影响主-客体络合时的荧光光谱变化及络合物的稳定性,为了讨论AO与PP5A形成的络合物的稳定性,本文研究了pH对其络合行为的影响.染料是环境水体中含量较高的有机污染物,表面活性剂的加入可以改变水溶液的微观环境和物理化学性质,它的加入对AO与PP5A络合行为的影响也有待研究,且具有重要意义.

本文通过紫外光谱(ultraviolet spectrum,UV)、红外吸收光谱(infrared absorption spectrum,IR)、MFS、一维和二维核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)波谱(包括1H NMR和NOESY)技术确定了PP5A与AO在水溶液中络合时的荧光强度变化、络合常数、化学位移变化及化学计量比等,并通过分子对接模拟计算出二者的络合模式和络合能.同时进一步研究了pH以及两种表面活性剂,包括十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)和十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)对AO/PP5A络合体系的影响,该研究可为荧光传感器的设计提供理论.

1 实验部分 1.1 仪器与试剂

仪器:Bruker Avance 400型NMR谱仪(瑞士Bruker公司),Agilent 8453紫外-可见分光光度计(美国安捷伦公司),Agilent CARY ECLIPS荧光分光光度计(美国安捷伦公司),Nicolet IS10红外光谱仪(美国Thermo科技有限公司).

试剂:氢醌二(2-羟基乙基)醚、四溴化碳(CBr4)、三苯基磷(PPh3)、多聚甲醛、AO、SDS和CTAB、无水硫酸钠、乙腈、甲醇、三氟化硼乙醚络合物(BF3·(OEt)2)、乙醇、1, 2-二氯乙烷、二氯甲烷、亚磷酸三乙酯(P(OEt)3)、三甲基溴硅烷(TMSBr)、丙酮、氨水、溴化钾均为分析纯试剂,购于上海泰坦科技有限公司,实验用水为超纯水.

1.2 PP5A的合成

参照文献[37]合成PP5A,其合成路线如图 1所示.

图 1 PP5A的合成 Fig. 1 The synthetic route of PP5A

先后称取氢醌二(2-羟基乙基)醚(化合物1)(5.0 g,25.25 mmol)和PPh3(13.23 g,50.45 mmol)于250 mL双口烧瓶中,加入新蒸乙腈(CH3CN)120 mL.搅拌活化15 min后冰浴静置;再称取CBr4(16.73 g,0.45 mmol)至恒压漏斗中,加入新蒸乙腈30 mL使其完全溶解;N2保护下向上述双口烧瓶中逐滴加入CBr4乙腈溶液后,室温条件下反应约4 h;薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)监测至反应完全后,冰浴条件下向上述混合液中加入冰水2 mL,观察有白色沉淀析出,过滤收集沉淀物,并先后用无水乙醇、石油醚充分洗涤沉淀物,真空干燥后得到固体化合物2,产率72%.

称取化合物2(3.24 g,10 mmol)和多聚甲醛(0.90 g,30 mmol)溶于100 mL新蒸的1, 2-二氯乙烷(ClCH2CH2Cl)中,N2保护下搅拌活化15 min;用一次性注射器吸取1.5 mL BF3·(OEt)2(10 mmol),于冰浴条件下缓慢加入至上述溶液后,室温条件下反应3~4 h;TLC监测至反应完全后,加入5 mL水使反应淬灭;将反应液过滤,滤液用饱和食盐水进行萃取,合并有机相,加入无水硫酸钠进行干燥,过滤,减压蒸馏除去溶剂,柱层析纯化(石油醚:二氯甲烷=1:1,v/v)得到白色固体化合物3,产率50%.

称取化合物3(3.0 g,2 mmol)和P(OEt)3(6.8 g,40 mmol),在N2保护下165 ℃搅拌反应72 h,将混合液减压浓缩,柱层析纯化(甲醇:乙酸乙酯=1:2,v/v)得浅黄色油状物4,产率90%.

冰浴和N2保护下,将TMSBr(28.50 g,186.2 mmol)加至化合物4(6.0 g,2.66 mmol)的80 mL二氯甲烷溶液中,室温下搅拌反应72 h;反应结束后减压浓缩除去溶剂,加入60 mL水继续搅拌反应30 min;浓缩干燥后将得到的浅黄色固体用丙酮洗涤,即得白色固体化合物5,产率75%.

称取化合物5(0.2 g,0.118 mmol)和100 mL氨水于250 mL的圆底烧瓶中,室温下搅拌反应12 h;减压浓缩除去溶剂,真空干燥,得到淡黄色透明固体PP5A(0.2 g,0.09 mmol),产率98%.1H NMR(400 MHz,D2O):δH 6.92(s,10H),4.15(m,20H),3.86(s,10H),2.20(m,20H);13C NMR(100 MHz,D2O):δC 150.8,131.7,120.2,70.0,31.2,29.9,29.8;31P NMR(162 MHz,D2O):δP 17.00.

1.3 UV光谱检测 1.3.1 PP5A、AO、AO/PP5A溶液的UV光谱检测

纯水配制10 mL 4×10-5 mol/L的AO溶液、PP5A溶液,以及AO/PP5A体系(4×10-5 mol/L AO+4×10-5 mol/L PP5A),摇匀静置后室温25 ℃下测定其吸光度.

1.3.2 UV光谱滴定实验

向7支比色管中分别移取400 μL浓度为1×10-3 mol/L的AO溶液,依次加入3、4、5、6、7、8、9 eq.(PP5A与AO的摩尔浓度比)的PP5A溶液,纯水定容至10 mL(AO终浓度为4×10-5 mol/L,PP5A终浓度为1.2×10-4~3.6×10-4 mol/L),摇匀静置后室温25℃下测定其490 nm处的吸光度.

1.4 IR光谱检测

IR光谱能鉴别化合物中特征官能团,根据特征波数与吸收强度的变化可以判断络合物是否形成.将0.026 35 g AO与0.213 6 g PP5A(摩尔比为1:1)混合于玛瑙研钵中,滴加1~2滴超纯水,充分研磨后制得AO/PP5A络合物,将AO/PP5A络合物、KBr、AO和PP5A于红外灯下干燥1 h,采用压片法将样品与KBr以1:100的质量比混合后研磨成粉,压成薄片,室温25 ℃下测定IR光谱.

1.5 MFS光谱检测 1.5.1 PP5A溶液和AO溶液的MFS检测

纯水配制10 mL 8×10-6 mol/L的PP5A溶液和2×10-6 mol/L的AO溶液,摇匀静置后分别测定其荧光强度.参数设置为:①PP5A:激发波长为290 nm、激发狭缝和发射狭缝分别为5 nm和10 nm;②AO、AO/PP5A:激发波长为452 nm,激发狭缝和发射狭缝均为10 nm.

本文后续实验中PP5A、AO、AO/PP5A的MFS检测均使用以上参数.

1.5.2 MFS滴定实验

分别向9支比色管中移取1mL浓度为2×10-5 mol/L的AO溶液,依次加入0、1、2、3、4、5、6、8、10 eq.的PP5A溶液,纯水定容至10 mL(AO终浓度为2×10-6 mol/L,PP5A终浓度为0~2×10-5 mol/L),摇匀静置后测定AO/PP5A体系荧光强度.

1.5.3 动力学实验

分别向两支比色管中移取1 mL浓度为2×10-5 mol/L的AO溶液.向其中一支比色管加入200 μL浓度为1×10-3 mol/L的PP5A溶液,自加入PP5A溶液的瞬间开始计时,纯水定容至10 mL,摇匀,1 min时测定AO/PP5A体系的荧光强度,每间隔1 min测定一次,测定30次.另外一支比色管纯水定容至10 mL,摇匀后测定AO的荧光强度,作为对照.

1.5.4 Job曲线测定

分别配制50 mL 2×10-6 mol/L的AO溶液与PP5A溶液,分别向11支5 mL比色管中移取5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5、0 mL的AO溶液,然后再依次加入0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5 mL的PP5A溶液,摇匀后测定AO/PP5A体系的荧光强度.

1.5.5 pH对络合行为的影响

采用pH 3~13的水溶液(由0.1 mol/L的HCl和NaOH调节得到)配制2×10-6 mol/L AO、2×10-5 mol/L PP5A和AO/PP5A(2×10-6 mol/L AO+2×10-5 mol/L PP5A,AO与PP5A物质的量比为1:10)的待测溶液后,测定各自的荧光强度.

1.5.6 CTAB、SDS对络合行为的影响

向7支比色管中加入40 μL浓度为1×10-3 mol/L的PP5A溶液,分别加入3、4、5、6、7、8、9 eq.的CTAB溶液,纯水定容至10 mL(PP5A的终浓度为4×10-6 mol/L,CTAB的终浓度为1.2×10-5~3.6×10-5 mol/L),摇匀静置后测定其荧光强度.测试条件与PP5A一致.

向另外11支比色管中加入80 μL浓度为1×10-3 mol/L的PP5A溶液,分别加入0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 eq.的SDS溶液,纯水定容至10 mL(PP5A的终浓度为8×10-6 mol/L,SDS的终浓度为0~8×10-4 mol/L),摇匀静置后测定其荧光强度.测试条件与PP5A一致.

向9支比色管中分别加入1.2 mL AO/PP5A体系(1mL浓度为2×10-5 mol/L的AO溶液+0.2 mL浓度为1×10-3 mol/L的PP5A溶液),再分别加入0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5 mL浓度为2×10-5 mol/L的CTAB或SDS溶液,纯水定容至10 mL,摇匀静置后测定其荧光强度,测试条件与AO/PP5A一致.

1.6 AO/PP5A的1H NMR及NOESY谱图测定

配制40 μL浓度为20 mmol/L的PP5A(20 μL 40 mmol/L PP5A+20 μL D2O)、AO(20 μL 40 mmol/L AO+20 μL D2O)和AO/PP5A络合物(20 μL 40 mmol/L AO的D2O溶液与20 μL 40 mmol/L PP5A的D2O溶液混合,超声10 min得到AO/PP5A络合物)的D2O溶液,以三甲基硅基丙酸盐(trimethylsilyl propionic acid,TMSP,D2O中含量为0.05%)为内标.1H核共振频率为400.21 MHz,测试温度为25 ℃. 1H NMR谱宽为10 330.58 Hz.2D NOESY谱图采集采用标准脉冲程序,两维谱宽均为2 894.6 Hz,采样数据点阵t2×t1=2 048×256,累加次数为48.

1.7 分子对接模拟

采用分子对接计算了PP5A与AO和CTAB的络合模式.首先使用Gaussian View构建PP5A、AO及CTAB的初始结构,通过MM2力场优化得到最稳定的初始构型.设置PP5A受体的格点盒子尺寸为:2.5 nm×2.5 nm×3.5 nm,盒子中心坐标为(0.219,-0.387,0.024),网格间距为0.037 5 nm,采用半柔性对接和拉马遗传算法,将AO和CTAB对接到PP5A的空腔中对接完成后进行聚类分析.分子对接利用AutoDock 4.2程序[38]完成.

2 结果与讨论 2.1 AO/PP5A络合物形成的确定 2.1.1 PP5A溶液与AO溶液的UV光谱分析

本文首先通过UV光谱滴定实验研究了PP5A与AO的络合行为(图 2).AO水溶液在490 nm处有紫外吸收峰,如图 2(a)2(b)所示,随着溶液中PP5A浓度的升高,AO的吸光度逐渐增大;且在一定浓度范围内,吸光度与PP5A浓度具有良好的线性关系,拟合方程为y=0.62+0.498xR=0.9910,这表明PP5A通过形成络合物提高了AO单体的吸光度.由AO溶液、PP5A溶液与AO/PP5A络合体系的UV光谱[图 2(c)]可以看出与PP5A络合时,AO的UV光谱中266 nm处出现电荷转移特征吸收峰,说明两者之间存在电荷转移,也说明AO进入到PP5A空腔中.根据以上结果推测,UV光谱的变化可能是由PP5A与AO形成络合物引起的.

图 2 (a) PP5A滴定AO的UV光谱;(b) AO 490 nm处的吸光度与PP5A浓度的关系;(c) PP5A、AO、AO/PP5A水溶液的UV光谱 Fig. 2 (a) UV spectra of PP5A titration to AO; (b) The relationship between the absorbance of AO at 490 nm and PP5A concentration; (c) UV spectra of AO, PP5A, and AO/PP5A
2.1.2 AO/PP5A的IR光谱分析

AO、PP5A和AO/PP5A的IR光谱如图 3所示.AO在1 596和1 506 cm-1处有特征吸收峰,与PP5A络合之后依然存在该特征吸收峰(1 598和1 503 cm-1处);AO在1 200~919 cm-1之间有两个吸收峰(1 171、919 cm-1),络合物在该区域内存在AO的两个特征吸收峰(1 166、919 cm-1)及PP5A的特征吸收峰(1 031 cm-1);AO在813 cm-1处有吸收峰,而络合物中并不存在该吸收峰.PP5A位于1 403、1 213、1 039 cm-1处吸收峰在络合物中依然存在(1 405、1 212、1 031 cm-1),强度有所变化.AO/PP5A络合物与AO、PP5A的峰在波数及强度上存在一定差异,这也进一步证实了AO/PP5A络合物的形成.

图 3 AO、PP5A和AO/PP5A的IR光谱 Fig. 3 IR spectra of AO, PP5A and AO/PP5A
2.2 MFS光谱滴定实验及动力学测试分析

由于PP5A本身有荧光,为了确定PP5A与AO的荧光发射无重叠,我们分别测试了PP5A水溶液与AO水溶液的MFS光谱.如图 4(a)所示,PP5A在290 nm处激发,在327 nm处产生较强荧光;而AO水溶液在452nm处激发,在525 nm处荧光强度较强,两者荧光发射无重叠.

图 4 (a) AO水溶液和PP5A水溶液的荧光光谱,EX(AO)=452 nm,EX(PP5A)=290 nm;(b) PP5A滴定AO的荧光光谱;(c) AO荧光强度与PP5A浓度的关系;(d) AO与PP5A络合的动力学曲线 Fig. 4 (a) Fluorescence spectra of AO and PP5A solutions. EX(AO)=452 nm, EX(PP5A)=290 nm; (b) Fluorescence spectra of PP5A titration to AO; (c) The relationship between the fluorescence intensity of AO and PP5A concentration, (d) Kinetic curves of AO/PP5A complex

我们进一步采用滴定实验研究了在452 nm处激发,AO与PP5A的主-客体络合行为.如图 4(b)所示,在AO中加入不同当量(0~10 eq.)的PP5A时,AO的荧光强度随着PP5A浓度的升高而显著降低.由图 4(c)可以看出,在一定浓度范围内,荧光强度与PP5A浓度呈良好的非线性关系y=103.62+413.78e-x/0.67,相关系数R=0.994 5.PP5A为阴离子大环,AO是阳离子型染料,两者之间可以通过静电和π-π作用形成AO/PP5A络合物,从而使AO的荧光强度发生变化.

为进一步研究与PP5A络合时,AO荧光强度改变与时间的关系,我们进行了动力学测试. 以525 nm处荧光强度为纵坐标,相应时间为横坐标绘制动力学曲线,如图 4(d)所示,在AO溶液中加入PP5A时,AO的荧光强度瞬间降低,说明AO与PP5A的络合在短时间内完成,不具有时间响应性.

2.3 络合比分析

本文采用等摩尔连续变化法[39](Job曲线)推断PP5A与AO的络合比.实验过程中AO和PP5A以不同摩尔比混合,但体系总浓度保持不变,以AO与PP5A二者的荧光强度差值(ΔF)×比例系数(XHost=[PP5A]/([PP5A]+[AO]))为纵坐标,二者的比例系数为横坐标绘制的Job曲线如图 5所示,从图 5可知,最大相对荧光强度发生在比例系数=0.5时,由此可推断AO与PP5A的络合比为1:1.

图 5 AO与PP5A的Job曲线 Fig. 5 Job's plot of AO and PP5A
2.4 pH对络合体系的影响分析

pH对络合体系的荧光强度存在较大影响,本文探索了不同pH条件下PP5A、AO及AO/PP5A络合物的荧光强度(图 6),290 nm处激发,测定PP5A 327 nm处的荧光强度;452 nm处激发测定AO、AO/PP5A 525 nm处的荧光强度.结果显示在pH=3~6范围内时,AO和AO/PP5A的荧光强度随着pH值的增大呈现降低的趋势;在pH=7~9范围内时,AO荧光强度增加,基本达到最大值,而AO/PP5A体系荧光强度基本保持在400~500之间,表明此范围内形成的络合物较稳定;在pH=9~12范围内时,AO和AO/PP5A的荧光强度变化先减弱后增强,AO/PP5A体系荧光强度在pH=12基本达到最大值;pH > 12时,大量OH-与AO结合导致了负电荷增加,使AO与PP5A络合作用减弱、荧光强度降低.值得注意的是,PP5A的荧光强度在pH=3~13范围内基本不变.

图 6 不同pH溶液中,AO,PP5A,AO/PP5A络合物的荧光强度 Fig. 6 Fluorescence intensity of AO, PP5A and AO/PP5A complex in solutions with different pH values

此外,在pH=3~11范围内,PP5A均能使AO的荧光强度发生减弱或淬灭,推测使AO荧光强度发生变化是由于AO与PP5形成AO/PP5A络合物所导致的,也进一步说明在较宽pH范围内AO与PP5A能形成AO/PP5A络合物.

2.5 SDS和CTAB对络合行为的影响

为了进一步考察AO与PP5A的络合能力,本文分别选择了阴离子型(SDS)和阳离子型(CTAB)两种表面活性剂对络合体系的影响进行了研究.

图 7(a)可以看出,SDS的添加对AO/PP5A的荧光强度基本没有影响,说明带负电荷的SDS并不能促进AO从AO/PP5A络合物体系的解离;而CTAB的加入对AO/PP5A体系的荧光强度有影响,但影响不大,这可能是由于CTAB与PP5A的络合能力小于AO与PP5A的络合能力.在本文实验条件下,PP5A与AO的络合在瞬间完成,且加入PP5A后AO的MFS光谱发生显著变化,综上所述,PP5A在水中能快速识别AO.

图 7 (a) AO/PP5A的荧光强度随表面活性剂加入量的变化;(b) PP5A荧光强度随SDS浓度的变化;(c) CTAB滴定PP5A的MFS光谱;(d) PP5A荧光强度随CTAB浓度的变化 Fig. 7 (a) Fluorescence intensity change of AO/PP5A with the volume added of surfactants; (b) Fluorescence intensity change of PP5A with SDS concentration; (c) Fluorescence spectra of CTAB titration to PP5A; (d) Fluorescence intensity change of PP5A with CTAB concentration

图 7(b)~7(d)可以看出:SDS的添加对PP5A荧光强度影响不大;而添加适量的CTAB后,PP5A荧光强度明显增强,而且在一定浓度范围内,荧光强度与CTAB浓度具有良好的线性拟合关系,y=504.88+94.24xR=0.997 7,这可能是PP5A与CTAB形成络合物所引起的.

图 8所示,AO是醌亚胺类有机分子,其能提供孤对电子对,当AO进入PP5A空腔时,两者通过静电相互作用、π-π相互作用使得AO被包裹在PP5A空腔中.因此,AO在与PP5A形成络合物时,AO的荧光强度和吸光度均发生变化.此外,SDS和CTAB的加入不会对AO/PP5A络合体系荧光强度产生显著影响,我们推测是由于PP5A与CTAB的络合能力较弱,而SDS由于电荷排斥作用无法与阴离子大环PP5A形成主-客体络合物.

图 8 PP5A、AO、CTAB、SDS的结构及AO/PP5A、CTAB/PP5A的荧光变化示意图 Fig. 8 The structures of PP5A, AO, CTAB, SDS, and schematic diagram of fluorescence sensing of AO/PP5A and CTAB/PP5A
2.6 络合常数分析

求解络合常数对于推测AO与PP5A的络合行为具有重要意义,AO与PP5A的络合比为1:1,则满足(1)式平衡;络合常数可定义为(2)式,然后根据Benesi-Hildebrand曲线法[40],即(3)式可求得络合常数.

${\rm{AO}} + {\rm{PP5A}} \to {\rm{AO}}/{\rm{PP5A}}$ (1)
${K_{{\rm{AO}}/{\rm{PP5A}}}} = \frac{{{C_{{\rm{AO}}/{\rm{PP5A}}}}}}{{{C_{{\rm{AO}}}} \times {C_{{\rm{PP5A}}}}}}$ (2)
$\frac{1}{{F - {F_{\rm{0}}}}} = \frac{1}{{({F_\infty } - {F_{\rm{0}}}){K_{{\rm{AO}}/{\rm{PP5A}}}}{C_{{\rm{PP5A}}}}}} + \frac{1}{{{F_\infty } - {F_{}}}}$ (3)

(1)~(3)式中,${C_{{\rm{AO}}}}$${C_{{\rm{PP5A}}}}$${C_{{\rm{AO}}/{\rm{PP5A}}}}$分别表示AO、PP5A和AO/PP5A的平衡浓度;${F_{\rm{0}}}$代表在无PP5A存在下AO的荧光强度;${F_\infty }$表示与PP5A完全络合后,AO的荧光强度;F为不同浓度时,AO的荧光强度;KAO/PP5A为络合物的络合常数,由$1/(F - {F_{\rm{0}}})$$1/{C_{{\rm{PP5A}}}}$进行拟合,如图 9(a)所示,求得AO与PP5A的络合常数为1.55×105 L/moL.由荧光滴定实验可知CTAB与PP5A的络合比也为1:1[35],因此,用同样的方法求得CTAB与PP5A的络合常数为6.90×104 L/mol,如图 9(b)所示.CTAB与PP5A的络合常数低于AO与PP5A的络合常数,即CTAB与PP5A形成络合物的能力低于AO,也进一步说明了AO与PP5A的络合能力更强.

图 9 (a) AO/PP5A和(b) CTAB/PP5A络合常数判断 Fig. 9 Complexing constants determination of (a) AO/PP5A and (b) CTAB/PP5A

此外,我们还对比了不同大环主体,如葫芦[7]脲、羧酸盐柱[6]芳烃、磷酸盐柱[6]芳烃与AO的络合常数(表 1).对比发现AO与PP5A的络合能力较强,也进一步说明PP5A的空腔对AO具有较好的匹配性.

表 1 AO与不同大环化合物的络合常数对比 Table 1 Comparison of complexing constants between AO and different macrocyclic compounds
2.7 AO/PP5A的1H NMR和NOESY谱图分析

NMR是研究物质结构最有力的方法之一[41, 42],PP5A、AO及AO/PP5A络合物的1H NMR谱及各质子化学位移变化如图 10表 2所示:由图 10可知,AO/PP5A络合物的1H NMR中能检测到AO和PP5A的质子信号,且AO的H-a、H-b、H-c、H-d和H-e明显向低场方向移动,而PP5A的H-1、H-2、H-3和H-4向高场方向移动.由表 2可知,络合前后,PP5A和AO的质子化学位移变化较大.由此可推断客体分子AO进入到PP5A空腔之中.判断AO与PP5A之间络合行为的NOESY谱如图 11(a)所示,PP5A的H-1、H-2、H-3和H-4均与AO的H-e存在明显的核Overhauser效应(NOE)相关,推断出AO从烷基链一端进入到PP5A空腔中,并推测其络合模式如图 11(b)所示.

图 10 PP5A、AO、AO/PP5A(1:1络合)的1H NMR谱图(D2O) Fig. 10 1H NMR spectra (D2O) of PP5A, AO, AO/PP5A (1:1 complexing)
表 2 PP5A络合AO前后AO及PP5A质子化学位移变化 Table 2 The chemical shift changes of protons in PP5A and AO before and after complexing
图 11 (a) AO/PP5A络合物的NOESY谱(D2O);(b) AO/PP5A络合物可能的络合模式与NOE相关 Fig. 11 (a) NOESY spectrum of AO/PP5A complex (D2O); (b) Possible complexing mode and NOE correlation of AO/PP5A
2.8 分子对接分析

经聚类分析发现,PP5A与AO、CTAB形成的最稳定主客体对接模式如图 12所示.由图可知AO和CTAB分子并没有从PP5A空腔中脱离出来,说明PP5A与AO、CTAB均可在电荷驱动作用下形成络合物.PP5A与AO、CTAB客体分子形成的最稳定络合构型具有相似的特征,即PP5A与AO和CTAB的几何中心并没有重叠,两个分子均处于PP5A空腔的一端.AO分子斜靠于PP5A内壁,而CTAB只有带正电荷的一端进入到PP5A空腔中,烷基链的一端裸露在空腔外.AO/PP5A与CTAB/PP5A结合能分别为322.17 kJ/mol和32.43 kJ/mol,这也进一步从理论上解释了CTAB的加入不会对AO/PP5A荧光强度产生影响,因此PP5A是AO更好的寄主.

图 12 PP5A与AO、CTAB的分子对接络合模式:AO/PP5A-1和CTAB/PP5A-1代表俯视图;AO/PP5A-2和CTAB/PP5A-2代表正视图 Fig. 12 Molecular docking conformation diagram of PP5A with AO and CTAB. AO/PP5A-1 and CTAB/PP5A-1 represent the top view, AO/PP5A-2 and CTAB/PP5A-2 represent the front view
3 结论

本文构建了PP5A与AO的主-客体络合物,通过UV光谱、IR光谱、MFS光谱、1H NMR与NOESY技术研究了PP5A与AO的络合行为,以及PP5A与AO络合时的荧光性质、络合常数、络合比和络合模式.此外,还进一步研究了pH以及两种表面活性剂CTAB和SDS对AO/PP5A络合体系的影响.结果表明,AO与PP5A形成1:1的主-客体络合物,络合常数为1.55×105 L/mol;在较宽pH范围内(pH=3~11),PP5A的加入使得AO的荧光强度显著发生变化;SDS和CTAB的加入并不会对AO/PP5A络合体系的荧光强度产生显著影响,这是由于PP5A与SDS由于静电斥力并不会发生主客体络合,而CTAB虽然能与PP5A发生主-客体络合,但络合常数远小于AO与PP5A的络合常数.分子对接计算的结果也说明PP5A与AO的络合强于PP5A与CTAB.AO与PP5A络合时的荧光变化可为荧光传感器的设计提供理论参考.


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