2020, Vol. 47文章信息
- miR-96与miR-103在肝癌组织中的表达及其与预后的关系
- Expressions of miR-96 and miR-103 in Hepatocellular Carcinoma and Their Correlation with Prognosis
- 肿瘤防治研究, 2020, 47(6): 446-450
- Cancer Research on Prevention and Treatment, 2020, 47(6): 446-450
- http://www.zlfzyj.com/CN/10.3971/j.issn.1000-8578.2020.19.1284
- 收稿日期: 2019-10-14
- 修回日期: 2020-02-07
引用本文 |
原发性肝癌具有侵袭性强、致死率高及预后差等特点，而肝细胞癌是原发性肝癌的主要病理分型，约占原发性肝癌的90%[1]。目前临床治疗肝癌的方式有根治术、化疗及放疗等，这些治疗方式可在一定程度上遏止癌细胞扩散、转移，但复发率较高、生存率较低[2]。研究表明[3-4]，miRNAs是一种微小的非编码单链RNA分子，其可参与细胞生长、分化、增殖及凋亡等过程，且部分miRNAs的表达与肝癌细胞的增殖、分化有紧密联系。miR-96和miR-103在肿瘤组织中呈异常表达，与癌症的发生、发展及转移有一定的关系[5-6]，为了研究原发性肝癌的发病机制，改善患者预后、延长患者生存期，本研究探讨miR-96与miR-103在肝癌组织中的表达及其与预后的关系，旨在为临床提供依据。
1 资料与方法 1.1 一般资料选取2013年3月—2014年5月期间我院收治肝细胞癌患者122例，其中男67例，女55例；年龄40~70岁，平均年龄55.8±5.2岁；肝癌直径2.0~10.0 cm，平均直径4.59±0.68 cm；TNM分期：Ⅰ~Ⅱ期82例，Ⅲ~Ⅳ期40例；肿瘤分化程度：低分化51例，中高分化71例；淋巴结转移患者41例，未转移者81例。本研究方案经我院伦理委员会审核与批准（伦理学批准文号：ky201302）。
纳入标准：（1）所有患者均经影像学和病理组织活检等确诊为肝细胞癌，且首次诊断为肝癌；（2）年龄18~75岁；（3）患者临床病例资料齐全；（4）能耐受根治术、化疗或放疗等治疗手段，且入院前未行相关治疗；（5）患者及其家属知情同意。
排除标准：（1）合并自身免疫系统疾病者；（2）合并其他恶性肿瘤；（3）心脏、肝及肾等器官有损伤者；（4）合并肝癌转移癌患者；（5）随访丢失或不配合者。
1.2 qPCR法检测肝癌组织中miR-96和miR-103表达选取新鲜的肝癌和癌旁组织各约50 mg，分别用研棒碾碎后应用美国Invitrogen的TRIzol试剂提取肝脏组织总RNA，同时使用Thermo NanoDrop 2000超微量紫外分光光度计测量RNA浓度，260 nm和280 nm吸光度比值范围为1.8~2.0。将RNA反转录后行PCR定量检测法测量miR-96和miR-103的相对表达量。引物选择和设计：miR-96上游引物：5’-TCTGGGTACCGCACTGGTAGAATTCACTG-3’，下游引物：5’-CCTTTCTAGACCACGGCACCATTCAGGA-3’；miR-103上游引物：5’-AGAGCCTGTGGTGTCCG-3’，下游引物：5’-CATCTTCAAAGCACTTCCCT-3’，采用Veriti7500实时荧光定量PCR仪行PCR反应，每组数据各测3次，取平均值。miR-96和miR-103表达均以U6为参数值，得到ΔCt值，ΔCt=CtmiR-96/CtmiR-103-CtU6，而2-ΔΔCt即为miR-96和miR-103的相对值。RQ < 2为低表达，而RQ≥2为高表达。
1.3 随访对所有入组患者行治疗后随访，为期5年，随访时间从患者行手术、化疗等治疗措施的第2天开始，至患者复发、死亡或随访时间到达为止，随访截至2019年5月31日，记录研究患者半数生存期。
1.4 统计学方法应用SPSS19.0软件进行数据处理，计量资料以x±s表示，行配对t检验；数据间的比较采用χ2检验；等级资料行Kruskal-Wallis秩和检验，近似χ2分布；生存分析单因素行Log rank检验，多因素分析行Cox回归分析，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 肝癌组织中miR-96和miR-103的表达肝癌组织中miR-96和miR-103相对表达水平均显著高于癌旁正常组织（均P < 0.05），见表 1、图 1。
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| 图 1 qPCR法检测肝癌组织中miR-96和miR-103的相对表达量 Figure 1 Relative expression of miR-96 and miR-103 in hepatocellular carcinoma tissues detected by qPCR |
肝癌组织中miR-96和miR-103表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期及分化程度均有关（均P < 0.05），而与性别、年龄及合并肝硬化等无关（均P > 0.05），见表 2。
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单因素分析结果显示，肝细胞癌患者中位生存时间与肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期、病理分化程度、miR-96和miR-103表达水平均有统计学意义（均P < 0.05）。多因素分析显示，TNM分期为Ⅲ~Ⅳ（OR=1.335, 95%CI: 1.029~1.733）、分化程度为低分化（OR=2.018, 95%CI: 1.026~3.968）、淋巴结发生转移（OR=1.505, 95%CI: 1.146~1.977）、miR-96高表达（OR=2.319, 95%CI: 1.902~2.826）和miR-103高表达（OR=2.006, 95%CI: 1.449~2.777）是肝癌患者中位生存时间独立危险因素。见表 3~4、图 2。
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| 图 2 miR-96(A)和miR-103(B)不同表达肝癌患者的生存曲线 Figure 2 Survival curves of hepatocellular carcinoma patients with different expression of miR-96(A) and miR-103(B) |
肝细胞癌是国内外常见的恶性肿瘤之一，死亡率仅次于肺癌，而肝癌隐匿性较强，患者有明显临床症状时多为中晚期，且肝癌易发生侵袭和转移，严重威胁患者生命安全[7]。有研究[8]显示，病毒性肝炎、肝硬化、黄曲霉素、环境污染及遗传等因素是肝细胞癌的主要独立危险因素。目前肝癌根治术是治疗肝癌最经济、现实和可靠的首选方法，但肝癌患者确诊时多为中晚期，预后较差[9]。现阶段肝癌预后评估尚无统一标准，年龄、肝功能状态、肿瘤分型和大小、肝癌扩散程度及手术治疗均可影响患者预后[10]，但无法通过上述诸因素准确评估，因而找寻有效的高敏感度和高特异性的诊断和预后判断因子，对准确评估患者预后、延长患者生存期有重要的价值。miRNAs可参与蛋白的转录和翻译过程调节目标基因，在多种生物学信号通路中发挥作用[11]。现阶段有研究表明[12]，有部分miRNA与肝癌细胞的生长、分化、增殖及凋亡等过程密切相关。miR-103在肝癌患者体内呈异常表达，且可介导肿瘤细胞的生长和侵袭过程，与肝癌临床分期相关[13]。而张国强等[14]证实miR-96可通过调节新型转录抑制因子锌指和同源框2（zinc-fingers and homeoboxes 2, ZHX2）诱导正常机体肝细胞转录翻译过程，参与肝癌的发生、发展及转移恶化等过程。
本研究结果显示，肝癌组织miR-96和miR-103表达水平均显著高于癌旁正常组织，说明miR-96和miR-103高表达可能参与了肝癌的发生、发展。进一步分析其表达水平与患者临床病理参数的关系，肝癌组织miR-96和miR-103表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期及分化程度均有关（均P < 0.05），而与性别、年龄及合并肝硬化等无关（均P > 0.05）。说明肿瘤直径越大、TNM分期越晚、淋巴结发生转移及分化程度越低，miR-96和miR-103表达率越高。单因素分析结果显示，肝细胞癌患者中位生存时间与肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期、病理分化程度、miR-96和miR-103表达水平均有统计学意义。将上述单因素分析中有统计学意义的因素行Cox多因素分析发现，TNM分期为Ⅲ~Ⅳ、低分化、淋巴结转移、miR-96和miR-103高表达是肝癌患者中位生存时间独立危险因素。分析认为，淋巴结转移是肿瘤细胞转移的常见方式，浸润的肿瘤细胞穿透淋巴管壁，脱落后以淋巴结为中心继续生长分化相同的癌细胞，加重患者病情[15]。中高分化型肿瘤细胞多表现为成熟形态，生长缓慢，恶性程度较低，转移发生时间较晚[16]；TNM分期的评判标准是原发肿瘤位置、淋巴结转移及远处转移的情况，病理分化程度越差，癌细胞恶性程度越高，预后越差[17]。
研究表明[12]，miRNA与癌细胞生长、增殖等有一定的相关性，miR-96可增强肝癌细胞骨桥细胞的转录和表达水平，增强肝癌细胞恶性增殖、转移及侵袭的能力，介导肝癌的发生、发展过程，进而影响预后[18]。赵新阳等[19]研究表明，蛋白酪氨酸磷酸酶的高表达可通过信号转导等途径发挥抑癌作用，而miR-96则通过下调其表达增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。miR-103高表达可有机结合其潜在靶向基因LATS2，进而拮抗其作用，以发挥诱导肝癌细胞分化、转移及侵袭等功效，患者病情恶化，生存时间缩短[20]。本研究对象仅限于指定时间内来我院救治的122例肝癌患者，在人文环境、家庭教育、医院环境及治疗手段等方面存在的差异可能会使分析结果造成误差，仍需扩充研究对象样本验证实验结果。但除去以上因素，本研究选用经验丰富的主治医生和高年资护理人员，尽量避免人为误差对结果的影响。
综上所述，肝癌组织中miR-96和miR-103高表达是肝癌患者预后差的独立危险因素，对术后评估患者预后和生存时间有一定临床意义和价值。
作者贡献
肖维：数据收集及文章撰写
李泉：数据收集
张洪昌：实验数据的统计学分析
韦杨年：文章校对
| [1] |
Cui H, Zhang Y, Zhang Q, et al. A comprehensive genome-wide analysis of long noncoding RNA expression profile in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Med, 2017, 6(12): 2932-2941. DOI:10.1002/cam4.1180 |
| [2] |
程书蕙, 陈波, 李晔雄. 原发性肝癌术后辅助治疗的研究进展[J]. 中华放射肿瘤学杂志, 2019, 28(3): 233-237. [Chen SH, Chen B, Li YX. Research developments of adjuvant therapies for hepatocellular carcinoma after resection[J]. Zhonghua Fang She Zhong Liu Xue Za Zhi, 2019, 28(3): 233-237. DOI:10.3760/cma.j.issn.1004-4221.2019.03.016] |
| [3] |
Xu Q, Liu X, Liu Z, et al. MicroRNA-1296 inhibits metastasis and epithelial-mesenchymal transition of hepatocellular carcinoma by targeting SRPK1-mediated PI3K/AKT pathway[J]. Mol Cancer, 2017, 16(1): 103. DOI:10.1186/s12943-017-0675-y |
| [4] |
徐钢, 高轶, 闫茂生. miR-155/PTEN调控轴在肝癌中的表达及其机制[J]. 肿瘤防治研究, 2018, 45(2): 67-72. [Xu G, Gao T, Yan MS. Expression of miR-155/PTEN Axis in Hepatocellular Carcinoma and Its Mechanism[J]. Zhong Liu Fang Zhi Yan Jiu, 2018, 45(2): 67-72. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2018.17.0931] |
| [5] |
Zhou Y, Chen Y, Ding W, et al. LncRNA UCA1 impacts cell proliferation, invasion, and migration of pancreatic cancer through regulating miR-96/FOXO3[J]. IUBMB Life, 2018, 70(4): 276-290. DOI:10.1002/iub.1699 |
| [6] |
Zheng J, Liu YZ, Qiao YC, et al. miR-103 Promotes Proliferation and Metastasis by Targeting KLF4 in Gastric Cancer[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2017, 18(5): 910. DOI:10.3390/ijms18050910 |
| [7] |
张爽, 王锋, 孟庆玲, 等. 原发性肝癌患者流行病学与乙型肝炎病毒感染调查[J]. 中国疫苗和免疫, 2018, 24(2): 133-136, 151. [Zhang S, Wang F, Meng QL, et al. Epidemiology of hepatitis B virus infection among primary liver cancer patients[J]. Zhongguo Yi Miao He Mian Yi, 2018, 24(2): 133-136, 151.] |
| [8] |
郑传芬, 曾惠, 王佳, 等. 重庆地区黄曲霉毒素暴露与原发性肝癌关联的病例-对照研究[J]. 中华预防医学杂志, 2017, 51(6): 539-545. [Zheng CF, Zeng H, Wang J, et al. The association between aflatoxin exposure and primary hepatocellular carcinoma risks: a case-control study in Chongqing[J]. Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi, 2017, 51(6): 539-545. DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2017.06.016] |
| [9] |
文天夫. 原发性肝癌诊疗规范(2017年版)解读[J]. 中国普外基础与临床杂志, 2018, 25(1): 32-34. [Wen TF. Interpretation of the code for diagnosis and treatment of primary hepatocellular carcinoma (2017 Edition)[J]. Zhongguo Pu Wai Ji Chu Yu Lin Chuang Za Zhi, 2018, 25(1): 32-34.] |
| [10] |
孙志德, 程利民, 平萍, 等. 影响原发性肝癌患者手术治疗预后的危险因素分析[J]. 临床和实验医学杂志, 2017, 16(12): 1204-1207. [Sun ZD, Chen LM, Ping P, et al. Analysis of the risk factors for prognosis of surgical treatment patients with primary liver cancer[J]. Lin Chuang He Shi Yan Yi Xue Za Zhi, 2017, 16(12): 1204-1207. DOI:10.3969/j.issn.1671-4695.2017.12.021] |
| [11] |
Schueller F, Roy S, Vucur M, et al. The Role of miRNAs in the Pathophysiology of Liver Diseases and Toxicity[J]. Int J Mol Sci, 2018, 19(1): pii: E261. DOI:10.3390/ijms19010261 |
| [12] |
Ruhl R, Rana S, Kelley K, et al. microRNA-451a regulates colorectal cancer proliferation in response to radiation[J]. BMC Cancer, 2018, 18(1): 517. DOI:10.1186/s12885-018-4370-1 |
| [13] |
Fang JH, Zhang ZJ, Shang LR, et al. Hepatoma cell-secreted exosomal microRNA-103 increases vascular permeability and promotes metastasis by targeting junction proteins[J]. Hepatology, 2018, 68(4): 1459-1475. |
| [14] |
张国强, 张伟忠, 张玉惠, 等. 肝细胞肝癌患者miR-495、miR-96表达水平及其与新型转录抑制因子锌指和同源框2的相关性[J]. 中国卫生检验杂志, 2017, 27(8): 1143-1145. [Zhang GQ, Zhang WZ, Zhang YH, et al. The expression levels of miR-495, miR-96 and their correlation with zinc-fingers and homeoboxes 2 in patients with hepatocellular carcinoma[J]. Zhongguo Wei Sheng Jian Yan Za Zhi, 2017, 27(8): 1143-1145.] |
| [15] |
Kang S, Nam JH, Bae DS, et al. Preoperative assessment of lymph node metastasis in endometrial cancer: A Korean Gynecologic Oncology Group study[J]. Cancer, 2017, 123(2): 263-272. |
| [16] |
杨伯文, 廖锦堂, 王译斌, 等. 胆管细胞癌与不同分化程度肝细胞癌CEUS特征的对比研究[J]. 中国医学影像技术, 2017, 33(5): 713-717. [Yang BW, Liao JT, Wang YB, et al. Comparison of contrast-enhanced ultrasound in diagnosis of cholangiocarcinoma and different differentiated hepatocellular carcinoma[J]. Zhongguo Yi Xue Ying Xiang Ji Shu, 2017, 33(5): 713-717.] |
| [17] |
In H, Solsky I, Palis B, et al. Validation of the 8th Edition of the AJCC TNM Staging System for Gastric Cancer using the National Cancer Database[J]. Ann Surg Oncol, 2017, 24(12): 3683-3691. DOI:10.1245/s10434-017-6078-x |
| [18] |
Yang S, Chen Z, Fan D, et al. MiR-182-5p and miR-96-5p increased hepatocellular carcinoma cell mobility, proliferation and cisplatin resistance partially by targeting RND3[J]. RSC Advances, 2018, 8(61): 34973-34983. DOI:10.1039/C8RA07055E |
| [19] |
赵新阳, 肖朝文, 郑小林, 等. miR-96的表达对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响[J]. 中国普通外科杂志, 2017, 26(7): 877-882. [Zhao XY, Xiao CW, Zheng XL, et al. Influence of miR-96 expression on migration and invasion of hepatocellular carcinoma cells[J]. Zhongguo Pu Tong Wai Ke Za Zhi, 2017, 26(7): 877-882.] |
| [20] |
李明, 李庆军, 周进学, 等. miR-103通过抑制LATS2促进肝细胞肝癌侵袭转移的机制[J]. 肝胆外科杂志, 2017, 25(4): 312-316. [Li M, Li QJ, Zhou JX, et al. MiRNA-103 promotes tumor growth and metastasis in hepatocellular carcinoma through LATS2[J]. Gan Dan Wai Ke Za Zhi, 2017, 25(4): 312-316. DOI:10.3969/j.issn.1006-4761.2017.04.025] |