锯谷盗危害对贮藏期金银花化学成分的影响 | [PDF全文] |
粮食、中药材、烟草等收获后大多贮藏在仓库里,由于仓库里的生态环境稳定,为仓储害虫提供了良好的生长条件,并且,仓储害虫具有个体较小、易隐蔽、适应性强等特点,对其防治比较困难,导致仓储害虫种群增殖迅速。许多研究表明,仓储害虫的危害不仅造成贮藏物数量减少,而且还引起贮藏物品质下降,造成严重的经济损失。如:郭长征等[1]报道,被谷蠹危害的小麦干湿面筋含量和吸水量、小麦发芽率和发芽势呈下降趋势,脂肪酸值呈升高趋势,随谷蠹虫口密度的增大和危害时间的延长,这种趋势越来越明显;王殿轩等[2]报道,随着玉米象虫口密度的增加和感染时间的延长,小麦干面筋与湿面筋含量、小麦发芽率与发芽势均降低,而脂肪酸值呈升高趋势;张玉荣等[3]报道,随着谷蠹虫口密度的增加和感染时间的延长,小麦水分增加,体积质量(容重)降低;白玉玲等[4]报道,随着玉米象虫口密度的增加和感染时间的延长,稻谷中过氧化氢酶和过氧化物酶活性逐渐降低,脂肪酸值、电导率、丙二醛含量逐渐升高;张玉荣等[5]还报道,经玉米象和米象不同程度感染后,小麦粗淀粉含量呈下降趋势,随着蛀蚀时间的延长和虫口密度的增加,全麦粉峰值黏度、最低黏度、最终黏度、衰减值和回生值均呈下降趋势,糊化温度呈上升趋势,峰值时间基本无变化,粗淀粉含量与峰值黏度、最低黏度、最终黏度、衰减值和回生值均呈极显著正相关,与糊化温度呈极显著负相关,与峰值时间无相关性。研究在贮藏过程中害虫危害与贮藏物品质变化的关系,可以为贮藏物的安全贮藏提供理论依据。目前的研究都是关于害虫危害对粮食品质的影响,而有关害虫危害对中药材品质的影响研究较少。
金银花(Lonicera japonica Thunb.)又名忍冬,医学上也称二花,为多年生半常绿缠绕性灌木,是我国常用名贵中药材之一,具有清热解毒、消炎祛肿等预防保健功能[6]。金银花在安徽已有多年的栽培历史,现已列为安徽地道中药材生产质量管理规范示范品种之一,在许多地区建立了金银花种植区,并且种植面积不断扩大,从事金银花收购和加工的企业也不断增多。因金银花在安徽省基本都种植在一些偏远的山区,收获后大都就地贮藏,由于仓储条件和管理措施较落后,使得金银花在贮藏过程中受到多种仓储害虫的危害[7],其中,锯谷盗[Oryzaephilus surinamensis(Linnaeus),隶属于鞘翅目,锯谷盗科]就是危害比较严重的一种害虫[7],给农民和企业造成极大的经济损失,已成为制约安徽地区金银花产业发展的重要原因之一。目前,关于锯谷盗危害对金银花化学成分的影响还未见相关报道。为此,笔者在室内研究了锯谷盗危害后金银花化学成分的变化,可以为进一步探索锯谷盗危害对金银花品质影响的机制以及金银花的安全贮藏提供科学依据。
1 材料与方法 1.1 供试昆虫锯谷盗采自安徽省明光市自来桥镇金银花收购站仓库,以m(全麦粉):m(酵母粉)=20:1作为饲料[8],使用前经80 ℃干燥箱消毒1 h;在人工气候箱(温度为28 ℃±1 ℃、相对湿度为75%±7%)中以连续黑暗的条件培养多代。
1.2 供试金银花以当年新收购的干燥金银花作为供试材料,购自安徽省明光市自来桥镇金银花收购站仓库。
1.3 仪器设备精密烘箱(20011243型,西班牙Selecta公司),高速万能粉碎机(FW80型,天津市泰斯特仪器有限公司),紫外可见分光光度计(UV-2600,日本岛津公司),自动凯氏定氮仪(HanonK9840,济南海能仪器股份有限公司),旋转蒸发仪(RE-52AA,上海亚荣生化仪器厂),循环水式多用真空泵(SHB-Ⅲ型,郑州长城科工贸有限公司),电子天平(CP224S型,西班牙赛多利斯公司)。
1.4 试虫侵害试验将新收购的金银花在烘箱中经60 ℃烘24 h,以杀死可能存在的害虫和虫卵。在干净的玻璃缸中放入0.3 kg金银花,接入新羽化7 d的锯谷盗成虫,设置200、400、600、800和1 000头/kg等5个虫口密度,每个密度设置5个玻璃缸,以纱网封口,放在人工气候箱中进行侵害试验,于7、14、21、28和35 d后测定金银花的化学成分。试验重复3次,以未接入锯谷盗的金银花作为对照组。
1.5 样品处理及化学成分测定将锯谷盗侵害后的金银花粉碎成粉末,过60目筛,收集备用。
1.5.1 蛋白质含量测定采用凯氏定氮法[9]:称取金银花粉末0.4 g,放入凯氏瓶中,加入10 mL浓硫酸浸泡过夜,经消煮炉消化60 min,冷却后用水将消煮液转移到100 mL容量瓶中定容。将消化管放入自动凯氏定氮仪中,在吸收缸中加入30 mL硼酸吸收液,再加入50 mL 40%的NaOH,充分反应,蒸馏,滴定和计算。每个样品测3份,取平均值。试验重复3次,每一批样品做1个空白。
1.5.2 总糖含量测定采用蒽酮比色法[10]:称取金银花粉末50 mg,加入4 mL 80%乙醇,置于80 ℃水浴中搅拌40 min,5 000 r/min离心10 min,取上清液,沉淀用乙醇重复提取1次,合并上清液,经活性炭80 ℃脱色,定容至10 mL,取1 mL提取液加入5 mL蒽酮试剂,于沸水浴中加热10 min,冷却后在620 nm处测定其吸光度值。称取干燥至恒量的葡萄糖配制成标准溶液,按上述方法测定其在620 nm处的吸光度值,绘制标准曲线,求出总糖含量。计算公式为:样品中总糖含量=通过标准曲线求得的糖含量×稀释倍数/样品质量×100%。每个样品测定3份,取平均值。试验重复3次。
1.5.3 总黄酮含量测定采用紫外分光光度法[11]:称取金银花粉末1.0 g,放入100 mL锥形瓶中,加入30 mL 60%乙醇,以超声波提取30 min,减压抽滤,滤渣再重复提取1次,合并2次滤液,转移至100 mL容量瓶中,用60%乙醇定容,摇匀即得供试样品溶液。以芦丁作为标准品配制标准溶液,在最大吸收波长处测定吸光度值,绘制标准曲线。将供试样品液于最大吸收波长处测定吸光度值,根据标准曲线,计算样品溶液中总黄酮的百分含量。计算公式为:样品中总黄酮含量=(样品黄酮浓度×提取液总体积)/样品质量×100%。每个样品测定3份,取平均值。试验重复3次。
1.5.4 绿原酸含量测定采用紫外分光光度法[12]:称取金银花粉末0.2 g,置于50 mL小烧杯中,加入适量的70%乙醇,以超声波提取10 min,离心后取上清液,沉淀重复提取1次,合并2次上清液,倒于25 mL容量瓶中,用70%乙醇定容,然后取1 mL溶液放于25 mL容量瓶中,定容至刻度。称取绿原酸标准品5.0 mg,用70%乙醇配制成标准品溶液,在最大吸收波长处测定吸光度值,绘制标准曲线,求出回归方程。取样品液于最大吸收波长处测定吸光度值,根据标准曲线的回归方程,计算样品溶液中绿原酸的百分含量。计算公式为:样品中绿原酸含量=(通过标准曲线求得的绿原酸浓度×样品溶液体积)/样品质量×100%。每个样品测定3份,取平均值。试验重复3次。
1.5.5 维生素C含量测定采用紫外分光光度法[13]:称取金银花粉末1.0 g,置于100 mL小烧杯中,加入少量酸化的蒸馏水溶解,经超声波提取5 min,静止10 min后过滤,滤液倒入100 mL棕色容量瓶中,用酸化的蒸馏水定容。取样品液1 mL于50 mL容量瓶中,加蒸馏水稀释,并用1% HCl和0.1 mol/L NaOH调节pH=6,定容至刻度,摇匀,以蒸馏水为参比,在243 nm处测定吸光度值。
准确称取标准抗坏血酸(分析纯)10 mg,放于100 mL棕色容量瓶中,加10% HCl 2 mL溶解,用蒸馏水定容,摇匀后形成100 μg/mL的标准溶液。取标准溶液配置成5个不同浓度的溶液,用1% HCl和0.1 mol/L NaOH溶液调节pH=6,快速在243 nm波长下测定吸光度值,并绘制标准曲线;根据标准曲线求出样品中维生素C的含量。每个样品测定3份,取平均值。试验重复3次。
1.6 数据处理所有数据采用SPSS 11.5软件进行分析处理。
2 结果与分析 2.1 锯谷盗危害对金银花蛋白质含量的影响从表 1可以看出,锯谷盗危害能引起金银花蛋白质含量下降。在200、400、600、800和1 000头/kg虫口密度下,危害7 d时金银花蛋白质含量分别比对照下降了1.43%、3.21%、5.14%、7.81%和9.54%;随着危害时间的延长,蛋白质含量不断下降,35 d时各虫口密度下蛋白质含量分别比对照下降了8.54%、10.32%、12.51%、14.50%和17.01%。在同一虫口密度下,不同侵害时间的金银花蛋白质含量差异有统计学意义;在同一时间下,蛋白质含量随着虫口密度的升高而下降,差异有统计学意义。相关性分析表明,锯谷盗危害后,金银花蛋白质含量与虫口密度和危害时间均呈显著的负相关(P<0.05),相关系数r分别为-0.999 7和-0.998 8。方差分析显示,锯谷盗虫口密度和危害时间的交互作用对金银花蛋白质含量的影响不显著(P>0.05)。
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从表 2可以看出,锯谷盗危害能引起金银花总糖含量下降。在200、400、600、800和1 000头/kg虫口密度下,危害7 d时金银花总糖含量分别比对照下降了0.24%、1.37%、2.15%、3.28%和4.17%;随着危害时间的延长,总糖含量不断下降,在各虫口密度下,危害35 d时的总糖含量分别比对照下降了5.25%、6.72%、8.37%、9.58%和11.05%。在同一虫口密度下,各侵害时间的金银花总糖含量差异有统计学意义。在同一时间下,总糖含量随着虫口密度的升高而下降,7 d时除200头/kg密度下的含量与对照差异无统计学意义外,其他密度均显著低于对照,从14 d开始,各虫口密度下的差异有统计学意义。相关性分析表明,锯谷盗危害后,金银花总糖含量与虫口密度和危害时间均呈显著的负相关(P<0.05),相关系数r分别为-0.999 8和-0.996 1。方差分析显示,锯谷盗虫口密度和危害时间的交互作用对金银花总糖含量的影响不显著(P>0.05)。
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从表 3可以看出,锯谷盗危害能引起金银花总黄酮含量下降。在200、400、600、800和1 000头/kg虫口密度下,危害7 d时金银花总黄酮含量分别比对照下降了1.25%、1.84%、2.43%、3.51%和4.32%;随着危害时间的延长,总黄酮含量不断下降,35 d时各虫口密度下的总黄酮含量分别比对照下降了3.99%、4.65%、5.26%、6.04%和6.75%。在同一虫口密度下,各侵害时间的金银花总黄酮含量差异有统计学意义;在同一时间下,总黄酮含量随着虫口密度的升高而下降,差异有统计学意义。相关性分析表明,锯谷盗危害后,金银花总黄酮含量与虫口密度和危害时间均呈显著的负相关(P<0.05),相关系数r分别为-0.998 0和-0.997 7。方差分析显示,锯谷盗虫口密度和危害时间的交互作用对金银花总黄酮含量的影响不显著(P>0.05)。
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从表 4可以看出,锯谷盗危害能引起金银花绿原酸含量下降。在200、400、600、800和1 000头/kg虫口密度下,危害7 d时金银花绿原酸含量分别比对照下降了0.29%、0.60%、0.93%、1.28%和1.56%;随着危害时间的延长,绿原酸含量不断下降,35 d时各虫口密度下绿原酸含量分别比对照下降了1.34%、1.61%、1.88%、2.17%和2.53%。在同一虫口密度下,各侵害时间的金银花绿原酸含量差异有统计学意义;在同一时间下,绿原酸含量随着虫口密度的升高而下降,差异有统计学意义。相关性分析表明,锯谷盗危害后,金银花绿原酸含量与虫口密度和危害时间均呈显著的负相关(P<0.05),相关系数r分别为-0.999 8和-0.996 5。方差分析显示,锯谷盗虫口密度和危害时间的交互作用对金银花绿原酸含量的影响不显著(P>0.05)。
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从表 5可以看出,锯谷盗危害能引起金银花维生素C含量下降。在200、400、600、800和1 000头/kg虫口密度下,危害7 d时金银花维生素C含量分别比对照下降了0.02%、0.06%、0.09%、0.13%和0.15%;随着危害时间的延长,维生素C含量不断下降,35 d时各虫口密度下维生素C含量分别比对照下降了0.13%、0.16%、0.19%、0.23%和0.25%。除200头/kg密度下,28 d和35 d之间差异无统计学意义外,在其他虫口密度下,各侵害时间的金银花维生素C含量差异有统计学意义;在同一时间下,维生素C含量随着虫口密度的升高而下降,差异有统计学意义。相关性分析表明,锯谷盗危害后,金银花的维生素C含量与虫口密度和危害时间均呈显著的负相关(P<0.05),相关系数r分别为-0.997 4和-0.994 9。方差分析显示,锯谷盗虫口密度和危害时间的交互作用对金银花维生素C含量的影响不显著(P>0.05)。
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粮食、中药材等物质在贮藏过程中由于受本身的新陈代谢作用、环境因素以及生物因素的影响,其品质会逐渐发生变化,甚至发生劣变,其中,害虫危害是引起品质下降的一个重要原因。金银花(L. japonica)是我国的名贵中药材,在贮藏过程中常遭受到锯谷盗(O. surinamensis)的危害[7]。研究锯谷盗危害对金银花化学成分的影响可以为中药材的安全贮藏提供理论依据。笔者的研究结果表明:受到锯谷盗危害后,金银花的蛋白质、总糖、总黄酮、绿原酸及维生素C含量均下降;并且,随着虫口密度的升高和危害时间的延长,各成分的含量进一步下降,与锯谷盗的虫口密度和危害时间均呈显著的负相关(P<0.05)。方差分析显示,锯谷盗虫口密度和危害时间的交互作用对金银花上述各成分含量的影响不显著(P>0.05)。
蛋白质是植物含有的营养成分。许新新等[14]研究了柴达木地区古毒蛾害虫对唐古特白刺叶片营养成分的影响,结果发现古毒蛾危害能引起唐古特白刺叶片中粗蛋白含量升高。这可能是由于古毒蛾危害的是唐古特白刺的新鲜叶片,新鲜叶片通过植株的代谢补偿作用产生大量营养物质,引起粗蛋白含量升高。而锯谷盗危害的是贮藏期金银花,金银花无法通过植株的代谢补偿作用获得相关营养物质,从而使得蛋白质含量下降;深层次原因还需进一步研究。
传统的中药材往往含有多种活性成分,这些活性成分在治疗疾病过程中发挥着重要的药理作用,如糖类中的多糖具有重要的抗氧化活性[15];总黄酮具有抗氧化、抗炎、抑菌等多种药理活性[16];绿原酸是在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物,具有抗菌消炎、清热解毒的作用[17];维生素C具有抗氧化作用[18]。已有研究[19]表明,中药材的药效与其活性成分含量有密切关系,锯谷盗危害能引起上述活性成分含量下降,从而降低金银花的药用价值。因此,在金银花贮藏过程中,应采用有效的方法消除害虫,使金银花免受危害,从而保障金银花的药用价值。
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