2. 陕西中医药大学附属医院骨创伤一科,陕西 咸阳 712000;
3. 陕西中医药大学 陕西中药资源产业化省部共建协同创新中心 秦药特色资源研究开发国家重点实验室(培育),陕西 咸阳 712046
2. Dept of Bone Trauma, Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang Shaanxi 712000, China;
3. Shaanxi University of Chinese Medicine/Co-construction Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine Resources Industrialization by Shaanxi & Education Ministry/State Key Laboratory of Research & Development of Characteristic Qin Medicine Resources (Cultivation), Xianyang Shaanxi 712046, China
骨质疏松症(osteoporosis,OP)是以低骨量和骨组织的微结构退化,导致骨脆性增强、骨折风险增加为临床特征的代谢性骨病。中医将OP归之于“骨痿”、“骨枯”等范畴,认为其发生、发展与“肾虚精亏”密切相关,以“补益肝肾”为主要治法。杜仲、续断始载于《神农本草经》,具有坚筋骨、续筋骨的功效。《中国药典》记载杜仲、续断的功能与主治均为“补肝肾、强筋骨”。在历代医家的验方中,杜仲+续断药对配伍十分常见,如《千金要方》中的丹参丸,《本事方》中的思仙续断丸,《扶寿精方》中的续断丸等[1]。临床上杜仲和续断常相须为用治疗OP,用药频率在常用方剂中分别位列第6和7位[2]。
杜仲、续断治疗OP的疗效确切,但由于中药多成分、多靶点的特点,两药做为相须药对配伍治疗OP的作用机制仍不明确。网络药理学可多层次、多角度分析中药治疗疾病的物质基础及作用机制。本研究采用网络药理学及细胞分子实验开展杜仲和续断配伍治疗OP机制研究,以期明确该药对治疗OP的作用机制,为相须药对的研究及OP的治疗提供新思路。
1 材料与方法 1.1 杜仲+续断药对活性成分获取于中药系统药理学分析平台(https://tcmspw.com/tcmsp.php,TCMSPM)、中药分子机制生物信息学分析工具(http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/,BATAN-TCM)分别以OB≥30%,DL≥0.18以及Score cutoff≥20、Adjust P-value≤0.05为筛选标准检索两药活性成分,并结合文献报道补充桃叶珊瑚苷、川续断皂苷VI等有效成分[3-4]。
1.2 构建“药物-成分-靶点”网络图在Pharmmapper(http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/)获取活性成分潜在靶点。在GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(https://www.omim.org/)以“osteoporosis”为关键词检索疾病靶点。对比活性成分潜在靶点与疾病靶点,交集靶点为杜仲+续断药对活性成分治疗OP的预测靶点,利用Cytoscap3.7.2呈现“药物-成分-靶点”相互关系。
1.3 构建蛋白质-蛋白质相互作用网络利用String(https://string-db.org/)构建蛋白质-蛋白质相互作用关系网络,并以Cytoscap3.7.2呈现靶点相互关系。
1.4 靶点通路分析及可视化在DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)以P < 0.05为筛选条件对关键靶点进行基因本体(gene ontolog,GO)生物学过程富集分析与基因组百科全书(KEGG)代谢通路富集分析,在微生信(http://www.bioinformatics.com.cn)形成气泡图。
1.5 细胞分子实验 1.5.1 实验动物、试药与试剂2日龄SPF级SD乳鼠6只,(220±10) g SD大鼠32只,雌雄各半,购自成都达硕实验动物有限公司[生产许可证号: SCXK(川)2020-030],饲养于陕西中医药大学SPF级动物饲养室,SYXK(陕)2017-004; 杜仲(20200102)、续断(20200426)饮片购自陕西兴盛德药业有限责任公司; DMEM高糖培养基、胎牛血清、双抗购自以色列BI公司; 胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、茜素红购自美国Sigma公司; EdU成像检测试剂盒(KGA331-100)购自江苏凯基生物技术有限公司; ALP试剂盒(A059-1)购自南京建成生物工程研究所; BMP-2(1 ∶ 1 000,PA5-85956)和β-actin(1 ∶ 2 000,MA5-11869)抗体购自美国Invitrogen公司,Wnt、β-catenin、p-β-catenin、p38、RUNX2、兔二抗(1 ∶ 1 000,2721T、8480T、2009、8690T、12556S、7074)抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。
1.5.2 主要仪器细胞超净操作台(苏州安泰净化有限公司); 311型CO2培养箱(美国Thermo公司); IX73-DP73倒置荧光显微镜(日本Olympus公司); Multiskan GO型全波长酶标仪(美国Thermo公司); PAC300型电泳仪、XRS+化学发光分析仪(美国Bio-Rad公司)。
1.5.3 含药血清制备分别称取杜仲300 g、续断300 g、杜仲150 g+续断150 g,加水淹没中药浸泡2 h; 煎煮至水沸改用文火,30 min后过滤倒出药液,重复共煎煮两次,合并两次滤液,旋转蒸发仪减压浓缩至200 mL,得生药含量为1.5 kg·L-1水煎液。SD大鼠随机分为4组,每组8只,分别为空白组、杜仲组、续断组、杜仲+续断组,禁食12 h,以10 mL·kg-1灌胃体积给药,空白组给予同等剂量的蒸馏水,每日1次,连续7 d。末次给药1 h后,乙醚麻醉,腹主动脉采血,静置30 min后,4 ℃离心,得空白血清和含药血清,56 ℃水浴30 min灭活,微孔滤膜过滤,保存于-20 ℃冰箱备用。
1.5.4 细胞增殖及碱性磷酸酶活性测定酶消化法制备大鼠原代成骨细胞(osteoblast,OB)[5],细胞接种于96孔板,密度为5×103个/孔,培养12 h后,设置空白组(CON,加入10%空白血清)、杜仲组(DZ,加入10%含杜仲血清)、续断组(XD,加入10%含续断血清)、杜仲+续断组(DZ+XD,加入10%含杜仲+续断血清)。加药后继续培养24 h,采用EdU标记法检测细胞增殖,荧光显微镜拍照后用ImageJ统计。加药后继续培养至d 7,期间每2 d换液一次,测定碱性磷酸酶ALP活性。增殖或碱性磷酸酶表达率/%=(实验组细胞OD值/空白组细胞OD值)×100%。
1.5.5 OB矿化结节形成测定细胞接种于24孔板,密度为1×105个/孔,培养12 h后,更换为分化培养基(含10%血清,0.1 μmmol·L-1地塞米松,50 mg·L-1抗坏血酸,10 mmol·L-1 β-甘油磷酸钠),分组加药同“1.5.4”,每3 d换液1次。细胞培养21 d后,茜素红染色并在显微镜下拍照并用ImageJ统计分析矿化结节面积。
1.5.6 Western blot检测蛋白表达细胞接种于6孔板,密度为5×105个/孔,培养12 h后,分组加药同“1.5.4”,继续培养48 h后,提取总蛋白,BCA法进行蛋白定量。蛋白变性后用12%分离胶进行电泳,用PVDF膜进行转膜,封闭2 h,一抗孵育过夜,洗膜后加二抗室温孵育1 h,洗膜后进行化学发光并拍照并分析。
1.6 统计学分析采用SPSS 19.0统计软件,选择单因素方差分析(ANOVA)方法进行数据统计。实验数据以x±s表示。
2 结果 2.1 杜仲+续断治疗OP活性成分筛选通过TCMSP、BATMAN-TCM、PubChem检索及文献报道保留有效成分杜仲42个、续断15个,共有成分2个,见Tab 1。
Number | Compound | Formula | PubChem ID | Number | Compound | Formula | PubChem ID | |
DZ1 | Medioresil | C21H24O7 | 181681 | DZ31 | Genistein | C15H10O5 | 5280961 | |
DZ2 | Mairin | C30H48O3 | 64971 | DZ32 | Dulcitol | C6H14O6 | 11850 | |
DZ3 | kaempferol | C15H10O6 | 5280863 | DZ33 | Dimethylcaffeic acid | C11H12O4 | 717531 | |
DZ4 | Olivil | C20H24O7 | 5273570 | DZ34 | Civetone | C17H30O | 5315941 | |
DZ5 | Erythraline | C18H19NO3 | 5317205 | DZ35 | Cis-Pinosylvin | C14H12O2 | 5280457 | |
DZ6 | Acanthoside B | C28H36O13 | 443024 | DZ36 | (2R,3R)-3-Hydroxyproline | C5H9NO3 | 7098652 | |
DZ7 | 8-Hydroxypinoresinol | C20H22O7 | 3010930 | DZ37 | 11-Deoxyglycyrrhetic acid | C30H48O3 | 12305517 | |
DZ8 | 3-Beta-Hydroxymethyllenetanshiquinone | C18H14O4 | 5318290 | DZ38 | 7-Hydroxycoumarin | C9H6O3 | 5281426 | |
DZ9 | D-Epicatechin | C15H14O6 | 182232 | DZ39 | Gama-Sitosterol | C29H50O | 457801 | |
DZ10 | Yangambin | C24H30O8 | 443028 | DZ40 | n-Triacontanol | C30H62O | 68972 | |
DZ11 | Eucommin A | C27H34O12 | 442836 | DZ41 | Geniposide | C17H24O10 | 107848 | |
DZ12 | (-)-Tabernemontanine | C21H26N2O3 | 12309360 | XD1 | Gentisin | C14H10O5 | 5281636 | |
DZ13 | Cyclopamine | C27H41NO2 | 442972 | XD2 | Isochlorogenic acid A | C25H24O12 | 6474310 | |
DZ14 | Dehydrodieugenol | C20H22O4 | 165225 | XD3 | Japonine | C18H17NO3 | 442915 | |
DZ15 | Epiquinidine | C20H24N2O2 | 94175 | XD4 | Sylvestroside III | C27H36O14 | 101967018 | |
DZ16 | GBGB | C23H34O15 | 3082301 | XD5 | Loganin | C17H26O10 | 87691 | |
DZ17 | Helenalin | C15H18O4 | 23205 | XD6 | Akebiasaponin D | C47H76O18 | 14284436 | |
DZ18 | (+)-Eudesmin | C22H26O6 | 234823 | XD7 | Sweroside | C16H22O9 | 161036 | |
DZ19 | Dehydrodiconiferyl alcohol | C20H22O6 | 5372367 | XD8 | Lacceric acid | C32H64O2 | 19255 | |
DZ20 | Quercetin | C15H10O7 | 5280343 | XD9 | Cantleyoside | C33H46O19 | 12302406 | |
DZ21 | Beta-carotene | C112H188N6O79 | 91845605 | XD10 | Sitogluside | C35H60O6 | 5742590 | |
DZ22 | Syringetin | C17H14O8 | 5281953 | XD11 | Helixin | C41H66O12 | 73296 | |
DZ23 | Pinoresinoldiglucoside | C32H42O16 | 174003 | XD12 | Oleanolic acid | C30H48O3 | 10494 | |
DZ24 | Rutin | C27H30O16 | 5280805 | XD13 | Cauloside A | C35H56O8 | 441928 | |
DZ25 | Aucubin | C15H22O9 | 91458 | XD14 | Isochlorogenic acid C | C25H24O12 | 6474309 | |
DZ26 | Geniposidic acid | C16H22O10 | 443354 | XD15 | Venoterpine | C9H11NO | 56842090 | |
DZ27 | Protocatechuic acid | C7H6O4 | 72 | A | Ursolic acid | C30H48O3 | 64945 | |
DZ28 | Methyl chlorogenate | C17H20O9 | 6476139 | B | Beta-Sitosterol | C29H50O | 222284 | |
DZ29 | Astragalin | C21H20O11 | 5282102 | C | C | C20H22O7 | 21582571 | |
DZ30 | (+)-Pinoresinol | C20H22O6 | 234817 | |||||
1. DZ is Eucommia ulmoides,XD is Radix Dipsaci; 2. A,B are common components of Eucommia ulmoides and Radix Dipsaci; C is a component of Eucommia ulmoides,named (E)-3-(4-[(1 r,2 r)-2-hydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-1-methylol-ethoxy]-3-methoxy-phenyl] acrolein |
“药物-成分-靶点”关系见Fig 1,图中共185个节点,1 095个边线,圆形节点为药物,八边形节点为活性化合物,菱形节点为80个靶点,其中20个黄色为杜仲靶点、7个蓝色为续断靶点,53个橙色为共同靶点,边线代表化合物与靶点间联系。
2.3 靶点相互作用网络及分析靶点相互关系见Fig 2,该图有76个圆形节点、436条边线,代表靶点之间的相互关联,节点颜色深度、面积与其degree值成正比。杜仲+续断药对治疗OP相关性排名前15位的靶点中的ALB、EGFR、MAPK1、MAPK8、CASP3、ESR1、HSP90AA1、AR、MAPK14、KDR、PGR共计11个为杜仲+续断共同靶点,PLG、ANXA5、IGF1R共计3个为杜仲单独作用靶点,SRC为续断单独作用靶点,提示该药对治疗OP具有协同增效作用。
2.4 GO和KEGG通路富集结果与分析GO富集分析结果见Fig 3,结果显示: 杜仲+续断主要作用于: 细胞外泌体、细胞外间隙、细胞表面、受体复合物和核染色质等细胞组分; 锌离子结合、ATP结合、甾体激素受体活性、丝氨酸类内肽酶活性、序列特异性DNA结合等分子功能; 以及转录作用、DNA诱导型、负向调节RNA聚合酶II启动子的转录、肽基丝氨酸磷酸化、转录的正调控、对蛋白激酶B信号传导的正向调节等生物过程。KEGG通路富集分析见Fig 4。结合文献研究,癌症相关通路、破骨细胞分化、MAPK、Estrogen、FoxO、VEGF等信号通路与OP的治疗具有相关性。
2.5 杜仲+续断对OB增殖及碱性磷酸酶活性的影响如Fig 5所示,与空白组相比,杜仲组、续断组和杜仲+续断组的细胞增殖速率、碱性磷酸酶活性和矿化结节数量均提高,差异有显著性(P < 0.01),且杜仲+续断组增殖速率、碱性磷酸酶活性和矿化结节数量均明显高于杜仲组或续断组(P < 0.01)。显示杜仲续断对OB增殖、分化和矿化具有协同增效作用。
2.6 杜仲+续断对OB BMP2和Wnt信号通路蛋白表达的影响与空白组相比,杜仲组、续断组和杜仲+续断组BMP2、p38、RUNX2、Wnt和β-catenin蛋白均明显增加(P <0.05, P <0.01); 续断组BMP2、p38和RUNX2蛋白明显高于杜仲组(P < 0.05或P < 0.01); 杜仲组Wnt和β-catenin蛋白明显高于续断组(P < 0.01); 杜仲+续断组BMP2、p38、RUNX2、Wnt和β-catenin蛋白均明显高于杜仲组和续断组(P < 0.01); 杜仲组和杜仲+续断组与空白组相比p-β-catenin蛋白表达明显减少(P < 0.05或P < 0.01),见Fig 6。提示杜仲主要调节Wnt信号通路,续断激活BMP2信号通路更明显,杜仲续断配伍具有协同增效作用。
3 讨论杜仲和续断作为补肝肾、强筋骨的常用中药,常相须用于骨科疾病的临床治疗。既往研究表明杜仲+续断药对不仅可治疗腰椎间盘突出症[1],还能促进骨折愈合提高骨密度[6]。中医常将杜仲和续断相须合用治疗OP,既可补益肝肾以固本,又兼续筋骨、行血脉以预防骨质疏松性骨折,具有显著的临床疗效。但该药对治疗OP的协同增效机制仍未探明。因此,本研究基于网络药理学和细胞分子实验探究了杜仲+续断治疗OP协同增效的药理学机制。
网络药理学研究结果显示,杜仲+续断治疗OP的交集靶点共80个,核心靶点包括ALB、EGFR、MAPK1、MAPK8、CASP3、ESR1等。PPI及GO分析显示这些靶点基因间具有很强的相互作用,并可通过调控细胞的增殖、分化、矿化、凋亡,参与钙磷代谢等生物学进程,影响蛋白、酶、转录因子的结合等分子功能,这种多靶点、多途径的作用机制体现了中医药治疗疾病的整体观。这些核心靶点基因可能通过以下机制影响OP的发生和发展: (1)调控细胞的增殖、分化、矿化: EGFR作为受体酪氨酸激酶超家族中的一员,能被生长因子家族成员结合、激活,并参与调节骨髓间充质干细胞、OB、破骨细胞、软骨细胞等骨代谢相关细胞的增殖、分化过程[7]。MAPK家族不仅能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化、提高OB活力、功能,还能阻断RANKL介导的破骨细胞生成,进而防治OP的发生[8],ESR1在OB中可通过CSE/H2S信号通路和骨骼中的雌激素信号传导途径来发挥成骨作用,并同ESR2在调控OB成熟矿化中起到调节平衡作用[9]。CASP作为传统的与炎症、细胞凋亡相关的蛋白酶,可以调节细胞的增殖和分化,CASP3缺陷小鼠的总骨密度、骨髓间充质干细胞成骨和增殖能力下降[10]; (2)参与钙磷代谢: ALB被证明与钙磷代谢紊乱具有显著相关性,而OP的进展与钙磷代谢是密切相关,研究发现激活Wnt/Ca2+信号通路可抑制骨髓间充质干细胞的自我更新,同时刺激OB分化[11]。
本研究对靶点基因进行了富集分析,以探寻杜仲+续断治疗OP时所调控的主要信号通路及其具体机制。结果显示靶点蛋白涉及多条信号通路,主要包括癌症相关通路、破骨细胞分化、MAPK、Estrogen、FoxO、VEGF等与骨代谢密切相关。(1)癌症相关子通路众多,大多与调控生长发育相关,其中,Wnt/β-catenin信号通路与OB、破骨细胞的生长分化以及骨髓间充质干细胞的成骨分化密切相关[12]。(2)MAPK信号通路主要包括ERK1/2、JNK、p38和ERK5等通路,既能作用于骨髓间充质干细胞、OB而促进成骨,还能阻断破骨细胞的生成,对骨代谢进行双重调节[8]。(3)Estrogen可通过促进破骨细胞凋亡和抑制OB产生破骨细胞分化因子而抑制骨吸收,还可促进局部骨血管生成从而改善骨质疏松[13]; (4)Foxo1通过调节OB增殖及氧化还原平衡控制骨形成,激活Foxo1通路可以调控骨髓间充质干细胞在OB和脂肪细胞之间的转换[14]。(5)VEGF不仅能直接作用于OB,增加OB的碱性磷酸酶活性,促进其增殖分化及钙结节的形成,亦能通过调节血管形成作用于骨髓间充质干细胞和破骨细胞参与骨代谢过程[15]。由此可见,杜仲+续断治疗OP可能是通过多途径同时调控多条信号通路,主要围绕促进骨形成、抑制骨吸收、改善细胞增殖环境、促进血管新生等方面来延缓OP的发生发展。
本研究选取癌症相关的子信号通路Wnt/β-catenin和MAPK信号通路中的BMP2/p38/RUNX2途径,进行细胞分子实验以考察杜仲+续断药对的协同增效作用和机制。研究结果显示杜仲+续断促进OB增殖、碱性磷酸酶表达和矿化结节形成的能力明显高于两药单独作用,且杜仲主要调节Wnt信号通路,续断则能够更明显的激活BMP2信号通路,两药配伍后对Wnt和BMP2通路调控作用显著增强,这可能是杜仲+续断治疗OP的协同增效的作用机制。既往研究表明: 杜仲及其有效成分可通过Wnt及p38等多条信号通路诱导骨髓间充质干细胞成骨分化[16],续断皂苷类成分也可通过BMP2/MAPK/RUNX2信号通路促进成骨细胞分化[17],与本研究结果一致。
综上所述,本研究从网络药理学角度对杜仲+续断治疗OP的潜在活性成分、关键基因和关键通路、机制进行了阐述,并通过细胞分子实验证实了该药对治疗OP的协同增效作用。结果提示该药对在OP的治疗中可能涉及不同靶点和通路,通过促进成骨细胞的骨形成等相关骨代谢过程延缓OP的进展,体现了中医药治疗OP多靶点、多途径的治疗特点。
[1] |
李志超, 李丹丹, 薛海鹏, 等. 基于网络药理学探讨杜仲-续断药对治疗腰椎间盘突出症的作用机制[J]. 云南中医学院学报, 2019, 42(6): 63-71. Li Z C, Li D D, Xue H P, et al. Study on the mechanism of duzhong and xuduan in treating lumbar disc herniation based on network pharmacology[J]. J Yunnan Univ Tradit Chin Med, 2019, 42(6): 63-71. |
[2] |
范元赫, 杨永菊, 关雪峰. 基于中医传承辅助系统分析骨质疏松组方用药规律[J]. 辽宁中医药大学学报, 2020, 22(9): 201-5. Fan Y H, Yang Y J, Guan X F. Analysis of medication rule of osteoporosis based on traditional Chinese medicine inheritance platform[J]. Liaoning Univer J Tradit Chin Med, 2020, 22(9): 201-5. |
[3] |
陈启洪, 李晓飞, 段灿灿, 等. 网络药理学探讨杜仲主要活性成分及药理作用机制[J]. 中药材, 2018, 41(2): 419-26. Chen Q H, Li X F, Duan C C, et al. Study on the main activite components and mechanism of eucommiae cortex by network pharmacology[J]. Chin Med Mater, 2018, 41(2): 419-26. |
[4] |
高歌, 潘晓华, 高雪, 等. 基于系统药理学的续断治疗骨质疏松作用机制研究[J]. 中草药, 2018, 49(19): 4581-5. Gao G, Pan X H, Gao X, et al. Mechanism of dipsaci radix in treatment of osteoporosis based on systematic pharmacology[J]. Chin Tradit Herbal Drugs, 2018, 49(19): 4581-5. doi:10.7501/j.issn.0253-2670.2018.19.017 |
[5] |
杨森, 潘亚磊, 李引刚, 等. 飞天蜈蚣七提取物对大鼠成骨细胞的保护作用及对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用[J]. 中南药学, 2020, 18(3): 435-9. Yang S, Pan Y L, Li Y G, et al. Protective effect of extract of Aralia Chinensis L on osteoblasts in rats and regulation of Wnt/β-catenin signaling pathway[J]. Cent South Pharm, 2020, 18(3): 435-9. |
[6] |
马进连, 漆成军, 薛鹏翔. 杜仲续断汤对股骨干骨折带锁髓内钉术后患者骨痂生长、骨密度及血清碱性磷酸酶的影响[J]. 西部中医药, 2021, 34(9): 108-11. Ma J L, Qi C J, Xue P X. Effects of duzhong xuduan decoction on serum alkaline phosphatase, bone mineral density and callus growth[J]. West J Chin Med, 201, 34(9): 108-11. |
[7] |
Schneider M R, Sibilia M, Erben R G. The EGFR network in bone biology and pathology[J]. Trends Endocrinol Metab, 2009, 20(10): 517-24. doi:10.1016/j.tem.2009.06.008 |
[8] |
Liu Y, Liu W, Yu Z, et al. A novel BRD4 inhibitor suppresses osteoclastogenesis and ovariectomized osteoporosis by blocking RANKL-mediated MAPK and NF-κB pathways[J]. Cell Death Dis, 2021, 12(7): 654. doi:10.1038/s41419-021-03939-7 |
[9] |
邵佳乐, 周建, 李志忠, 等. 雌激素受体信号通路与骨质疏松症相关性的研究进[J]. 中国生物制品学杂志, 2020, 33(8): 956-60. Shao J L, Zhou J, Li Z Z, et al. The relationship between estrogen receptor signaling pathway and osteoporosis[J]. Chin J biol, 2020, 33(8): 956-60. |
[10] |
Svandova E, Vesela B, Tucker A S, et al. Activation of pro-apoptotic caspases in non-apoptotic cells during odontogenesis and related osteogenesis[J]. Front Physiol, 2018, 9: 174. doi:10.3389/fphys.2018.00174 |
[11] |
余来, 邢更彦. 体外冲击波通过激活Wnt/Ca2+信号通路治疗骨质疏松症的研究进展[J]. 中国医学前沿杂志(电子版), 2014, 6(6): 15-7. Yu L, Xing G Y. Research progress of extracorporeal shock wave in the treatment of osteoporosis by activating Wnt/Ca2+ signaling pathway[J]. Chin J Front Med Sci, (Electronic Version), 2014, 6(6): 15-7. |
[12] |
李晨睿, 孟志远, 牛银波, 等. 黄芩苷通过Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的促进作用[J]. 中国药理学通报, 2015, 31(7): 919-24. Li C R, Meng Z Y, Niu Y B, et al. Baicalin induces osteogenic differentiation of rat bone marrow derived mesenchymal stem cells via Wnt/β-catenin signaling pathway[J]. Chin Pharmacol Bull, 2015, 31(7): 919-24. doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.07.007 |
[13] |
曾天保, 徐仙赟, 刘海金, 等. 雌激素受体调控血管生成的研究进展[J]. 赣南医学院学报, 2021, 41(4): 399-403. doi:10.3969/j.issn.1001-5779.2021.04.017 |
[14] |
Chen P, Hu B, Xie L Q, et al. Scara3 regulates bone marrow mesenchymal stem cell fate switch between osteoblasts and adipocytes by promoting Foxo1[J]. Cell prolif, 2021, 54(8): 13095. |
[15] |
谢兴文, 李建国, 黄晋, 等. 血管内皮生长因子防治骨质疏松的研究进展[J]. 中国骨质疏松杂志, 2019, 25(7): 1030-3. Xie X W, Li J G, Huang J, et al. Progress on research of vascular endothelial growth factor in the prevention and treatment of osteoporosis[J]. Chin J Osteoporosis, 2019, 25(7): 1030-3. doi:10.3969/j.issn.1006-7108.2019.07.030 |
[16] |
赵继荣, 杨涛, 赵宁, 等. 杜仲诱导骨髓间充质干细胞成骨分化防治骨质疏松症相关信号通路研究进展[J]. 中国骨质疏松杂志, 2020, 26(12): 1868-72. Zhao J R, Yang T, Zhao N, et al. Research progress of eucommia ulmoides bone marrow mesenchymal stem cells osteogenic differentiation in prevention and treatment of osteoporosis[J]. Chin J Osteoporosis, 2020, 26(12): 1868-72. |
[17] |
Niu Y, Kong X, Li Y, et al. Radix Dipsaci total saponins stimulate MC3T3-E1 cell differentiation via the bone morphogenetic protein-2/MAPK/Smad-dependent Runx2 pathway[J]. Mol Med Rep, 2015, 11: 4468-72. |