马兰为菊科植物马兰Kalimeris indica(L)Sch.的全草，在我国分布广泛。研究表明，其具有抗炎和促进胃肠排空作用[1-2]，我国西南地区也常有食用马兰来缓解小儿疳积。目前，尚未见其能改善幼鼠胃肠功能的报道。因此，本实验拟通过体内、外实验，研究马兰对幼鼠胃肠功能的影响，以期为其改善幼鼠胃肠功能提供实验依据，为将马兰进一步开发成小儿健胃/脾口服液提供数据支持。
1 材料 1.1 试剂原儿茶酸、丁香酸(成都克洛玛生物科技有限公司，纯度＞98%)。马兰购自成都荷花池中药材市场，马兰提取液的制备方法如下：干燥马兰100 g，加入1 L水，浸泡0.5 h，煎煮1 h，纱布过滤，收集滤液；再加入500 mL水，煎煮1 h，过滤，合并滤液，浓缩至马兰浓度为1 g·L-1，待用。TRIzol试剂盒购自美国Invitrogen公司；PrimeScript®RT reagent Kit、SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ购于大连宝生物工程有限公司；Real-time PCR引物由上海生工生物工程公司合成。
1.2 实验动物3~4周龄SD大鼠，♂，体质量(100±20)g；家兔，♂，体质量(2.0±0.5)kg, 均购自重庆中药研究院，生产许可证号：SCXD (渝) 2013-0006。
1.3 仪器BI-420生物机能仪(成都泰盟科技有限公司)；安捷伦1200 HPLC(安捷伦科技有限公司)。
2 方法 2.1 马兰水提取液指纹图谱的建立色谱柱Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：0.5%甲酸-水；B：乙睛；检测波长：330 nm；柱温：30.0℃；流速：0.7 mL·min-1；进样量10 μL；梯度洗脱，洗脱程序为(B 0 min→105 min, 13%→70%)。
2.2 马兰水提取液等对家兔离体回肠自主收缩的影响[3]制备家兔离体肠管，生物机能实验系统记录正常小肠张力值，然后分别加入马兰水煎液(0.05、0.1、0.2 kg·L-1)、丁香酸(2.5、5.0、10.0 μmol·L-1)、原儿茶酸(2.5、5.0、10.0 μmol·L-1)，并记录张力值。
2.3 阿托品对马兰增强回肠收缩力的影响除了硫酸阿托品(M受体阻断剂，5 mg·L-1)先加入浴管5 min外，其余方法同“2.2”。
2.4 马兰水提取液对幼年大鼠体质量增长以及胃肠功能的影响32只SD大鼠随机分为对照组和马兰给药组(0.5、1.0、2.0 g·kg-1)。连续给药14 d，期间每日记录大鼠的体质量、饮水量、摄食量。末次给药后，采用灌胃碳末阿拉伯胶法测得胃排空率和小肠推进率。
2.5 小肠钠葡萄糖共同转运体1(sodium/glucose cotransporter 1, SGLT1)的表达称取适量回肠组织，TRIzol提取总RNA，按逆转录试剂盒说明书制成cDNA。所得cDNA进行实时荧光定量PCR反应，检测SGLT1的表达水平。
2.6 数据处理实验数据以x±s表示，数据统计采用SPSS 19.0。组间两两比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，体质量增长曲线、日饮水量和摄食量比较采用重复测量方差分析。
3 结果 3.1 马兰提取物指纹图谱马兰水提取液所含成分较多，其中原儿茶酸含量为67 mg·g-1，丁香酸含量为223 mg·g-1。
3.2 家兔离体回肠平滑肌张力大小的变化马兰水提取液呈剂量依赖性地促进家兔离体回肠平滑肌张力(P < 0.01)，而原儿茶酸和丁香酸在10 μmol·L-1浓度范围内对平滑肌张力无明显影响(Tab 1)。阿托品对马兰增强回肠收缩力无影响(Tab 2)。
| Group | Concentration | Tension/g |
| Control | - | 2.01±0.12 |
| Kalimeris indica extract/kg·L-1 | 0.05 | 2.75±0.32** |
| 0.1 | 3.31±0.06** | |
| 0.2 | 4.31±0.66** | |
| Protocatechuic acid/μmol·L-1 | 2.5 | 2.17±0.35 |
| 5.0 | 2.69±0.98 | |
| 10.0 | 2.12 ±0.12 | |
| Syringate/μmol·L-1 | 2.5 | 2.16 ±0.06 |
| 5.0 | 2.15 ±0.15 | |
| 10.0 | 2.12 ±0.26 | |
| **P < 0.01 vs control | ||
| Group | Tension/g |
| Control | 2.01±0.12 |
| Kalimeris indica extract 0.05 kg·L-1 | 2.75±0.32** |
| Astropine+Kalimeris indica extract | 2.96±0.72* |
| *P < 0.05, **P < 0.01 vs control | |
马兰水提取液有促进大鼠体质量增长的趋势，但对其日摄食量和饮水量无影响。但可明显加强大鼠的胃排空率和小肠推进率(P < 0.05)。
3.4 大鼠小肠SGLT1 mRNA表达的变化马兰水提取液能增强大鼠回肠和空肠SGLT1 mRNA的表达(P < 0.05)。
4 讨论本研究证实，马兰提取液给药14 d可加强胃肠排空速率，有促进体质量增长的趋势，但无统计学意义。此外，马兰水提取液还能上调大鼠回肠和空肠葡萄糖转运体SGLT1 mRNA的表达，表明马兰可通过促进葡萄糖吸收发挥健脾作用，而相关机制还有待进一步研究。
| [1] | 陈华国, 周欣, 赵超, 等. 马兰草抗炎活性部位量效关系及高效液相色谱-效关系研究[J]. 中国药学杂志, 2013, 48(14): 1190-3. Chen H G, Zhou X, Zhao C, et al. Dose-response and HPLC spectrum-activity relationships of the anti-inflammatory active site of Kalimeris indica[J]. Chin Pharm J, 2013, 48(14): 1190-3. |
| [2] | 田徽, 阮期平, 李崇进, 等. 马兰水煎液对小鼠胃排空及小肠推进的影响[J]. 中国医药指南, 2012, 10(23): 464-5. Tian W, Ruan Q P, Li C J, et al. Influence of Kalimeris Indica (L) on the gastrointestinal function of rat[J]. Guide China Med, 2012, 10(23): 464-5. doi:10.3969/j.issn.1671-8194.2012.23.346 |
| [3] | 金龙, 马建秀, 马艳庆. 莪术醇对大鼠十二指肠平滑肌收缩的影响[J]. 中国药理学通报, 2017, 33(12): 1717-20. Jin L, Ma J X, Ma Y Q. Effect of curcumol on contraction of duodenal smooth muscle in rats[J]. Chin Pharmacol Bull, 2017, 33(12): 1717-20. doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2017.12.018 |